应用基因分型技术研究牛结核分枝杆菌分子流行病学

牛分枝杆菌是引起牛结核病(bTB)的病原体,侵染宿主广泛,可感染多种家畜和野生动物,对人类和动物健康构成巨大危害。随着多年不懈的研究,有关分枝杆菌分子流行病学的知识积累不断增加。作者对近年来应用新的基因分型技术研究牛结核分枝杆菌分子流行病学方面的一些研究进展。这些技术包限制性片段长度多态性分析(RFLP)、PCR介导的间隔区寡核苷酸分析(spoligotyping)、数目可变串联重复位点(VNTR)等。主要用于对人、牛、家畜以及野生动物的结核病分子流行病学进行分析和监测。另外,还利用一系列敏感的基于PCR的技术从分枝杆菌杆菌复合体(NTM)中对菌型进行鉴别。对分枝杆菌感染分子流行病学的全面了解,有助于对本病扩散传播机制的深入研究。可为制定科学防治结核病的措施做出贡献。     

复方中草药对大鼠热应激蛋白70mRNA的表达影响

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对热应激模型组、热应激加中草药配方一组、热应激加中草药配方二组和对照组的SD大鼠的肝组织进行HSP70mRNA表达检测,观察清热复方中草药对两种模型大鼠肝HSP70mRNA表达的影响,并以β-actin为内参照进行基因表达水平的半定量分析。结果显示热应激组中HSP70mRNA的表达高于对照组(P<0.05);热应激加中草药配方一组和热应激加中草药配方二组高于热应激组(P<0.05),但其二者之间差异不显著(P>0.05)。说明清热复方中草药可诱导热应激大鼠肝脏组织中HSP70表达量的增加,从而提高组织细胞的耐受性,避免损伤,对机体起保护作用。     

牛体外受精卵5～10细胞期单一卵裂球染色体诊断

利用单一卵裂球的染色体诊断牛体外受精5－～10－细胞期胚胎的正常性。牛体外受精后5－～10-细胞期的胚胎用0．5％链霉蛋白酶处理分离单一卵裂球，然后用100ng/ml长春花碱处理10h，制作染色体标本。检查33枚不同发育期胚胎及卵裂球185个，有43．8％的可进行染色体分析（81／185）。结果表明，正常2倍体的发生率为46．9％，染色体异常的卵裂球中，单倍体的发生率为50．6％，显著高于多倍体（2．5％）的发生率（P＜0．001）。单倍体中含有X－性染色体和含有Y－性染色体的性比基本相同。引起单倍体发生的原因可能是由于卵母细胞的孤雌发育或受精过程中精子穿入未成熟卵后由雄性原核产生。     

牛老化卵体外受精后的胚胎发育速度与细胞遗传学研究

体外成熟培养和牛老化卵受精后发育到囊胚到期速度减慢。囊胚期的发育率分别为22h培养组的35．3％,34h组23．6％,46h组15．4％,胚胎的发育速度随培养时间的延长而明显减慢（P＜0．05）。46h组的囊胚期胚胎的平均卵裂球数明显少于22h组（P＜0．05）,老化组的染色体平均分裂像,分裂指数均明显低于对照组（P＜0．05）。染色体异常发生率46h组高于22h组。     

附红细胞体病患畜病理组织学及血液学变化的研究

对急性附红细胞体病患畜病理组织学,血液学和部分生理生化变化指标变化的显示：患畜均有体温升高,呼吸和心跳加快,谷－丙转氨酶和血清胆红素增高,血糖降低,红细胞压积,红细胞总数,淋巴细胞下降,白细胞总数上升等血液学和生理生化指标变化;     

白香猪群体血液蛋白多态性及遗传变异度的分析

本试验采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，检测了白香猪群体的血液中血红蛋白(Hb)，转铁蛋白(Tf)，后白蛋白(Po)，后转铁蛋白(Ptf）4个蛋白座位的多态性。其中Tf、Po、Ptf发现了多态。计算了群体多样性指数和平均位点杂合度，以及群体内亲缘小组之间的欧氏几何遗传距离。表明该群体具有一定的纯度，但遗传变异性仍较大。     

SPF仔猪肠道菌群结构的分子分析

目的：对SPF（Specific Pathogen Free）仔猪断奶前后的肠道菌群组成进行动态监测,并以普通饲养仔猪（自然分娩）为对照作相关分子微生物生态学分析.方法：利用剖腹取胎的方式将仔猪从母体子宫中取出放于屏障系统中饲养,于7日龄时转移至消毒的开放式环境中,14日龄断奶,分别于10日龄、16日龄和22日龄以及32日龄采集仔猪新鲜粪便样品.提取粪便样品中细菌总DNA,获得其ERIC-PCR指纹图谱,再将其中一个样品的ERIC-PCR产物以地高辛标记为混合探针通过杂交对指纹图谱上DNA条带序列的异同进一步比较.结果：SPF仔猪和普通仔猪在断奶后肠道菌群的组成发生较大变化,而且SPF仔猪的肠道菌群和普通仔猪有显著差异.     

2个猪瘟野毒株E2基因主要抗原区域的扩增及其序列分析

用RT-PCR技术对华东地区2份猪瘟病料的E2基因主要抗原编码区域进行了扩增和序列分析。结果表明这2个毒株的棱苷酸序列同源性为97．321％、氨基酸序列同湃性为100％，但2个毒株的序列与我国的标准强毒Shimen株、疫苗毒HCLV株的差异较大，核苷酸序列、氨基酸序列均只有80％左右，与法国Alfort、意大利C1W株棱苷酸和氨基酸序列的同源性分别为84％～87％和91％。参考国内外对猪瘟病毒基因组的分型方法，将这2株猪瘟病毒归为基因Ⅱ型。     

青蒿素、大蒜素治疗犬附红细胞体病的研究

通过青蒿素、大蒜素、四环素、新胂凡钠明、青霉素、链霉素、磺胺嘧啶对附红细胞体病患犬治疗效果比较,结果表明,青蒿素、大蒜素同四环素、新胂凡钠明均能有效地抑制和杀灭附红细胞体病原,具有显著的疗效,其治愈率分别为 100％、90％、90％和 80％;而青霉素、链霉素、磺胺嘧啶对附红细胞体病治疗无效,青蒿素、大蒜素应用于治疗大附红细胞体病的成功,为发掘祖国宝贵的医学遗产,避免和减少四环素、新胂凡钠明等药物毒副作用对机体的危害,为治疗人类附红细胞体病提供临床实用的依据。     

白香猪内脏器官乳酸脱氢酶同功酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对成年白香猪的肺、肝、脾、肾和胰脏组织的乳酸脱氢酶(LDH)进行分离,结果显示:它们均含有5条LDH同功酶谱带。经生物图象处理系统扫描定量得出:LDH1,LDH2,LDH3,LDH4和LDH5各组分在肺脏的百分含量的排列顺序:LDH5>LDH2>LDH1>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为62.93%∶37.08%;在肝脏中百分含量的排列顺序为:LDH5>LDH2>LDH1>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为49.52%∶50.48%;在脾脏中百分含量排列依次是:LDH5>LDH2>LDH4>LDH3>LDH1,M亚基∶H亚基为52.41%∶47.59%;在肾脏中百分含量多少的次序是:LDH1>LDH2>LDH4>LDH3>LDH5,M亚基∶H亚基为19.00%∶81.00%;在胰脏中百分含量顺序是:LDH1>LDH2>LDH5>LDH3>LDH4,M亚基∶H亚基为32.86%∶67.14%。以上结果提示:LDH同功酶在不同的内脏组织中各谱带及亚基组成与含量的不同,它们反映了相应组织的中乳酸和丙酮酸间转化代谢过程的差异,由此保证了机体糖代谢中LDH所催化反应的正常协调进行。