猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定

猪伪狂犬病是由疱疹病毒科的猪疱疹病毒1型病毒引起的一种急性传染病，多数动物均可感染，猪是本病的主要宿主和带毒者。本病主要以成年妊娠母猪流产、死产、木乃伊胎、新生仔猪急性死亡及3周龄以内的仔猪表现神经症状为主要特征。近年来我国也相继有本病发生的报道。1997年10月黑龙江省牡丹江地区某养猪场从外地引进种母猪，回来后直接放入后备猪舍与其他后备母猪混养，5日后同舍母猪出现厌食、发热、精神沉郁，有的呕吐、咳嗽。     

猪瘟病毒垂直感染的检测

猪瘟是一种急性、高度接触性传染的一种重要传染病。近年来猪瘟流行的方式发生了改变，典型猪瘟逐渐减少，非典型猪瘟逐渐增多，表现怀孕母猪流产，产死胎、木乃伊和病弱的仔猪等，尤其是新生仔猪猪瘟，临床症状不十分明显，但发病率、病死率较高，严重危害养猪业的发展。关于新生仔猪猪瘟的发生，多认为是母猪怀孕期间感染猪瘟病毒而通过垂直传播的方式引起仔猪感染，但到目前为止未见有关新生仔猪垂直感染猪瘟病毒的直接证据。     

猪附红细胞体ORF2的全基因合成、表达与鉴定

通过重叠区扩增法（PCR-based accurate synthesis,PAS）人工合成猪附红细胞体ORF2基因,并使其在大肠杆菌（DE3）中高效表达。根据GenBank注册的AJ504999的ORF2基因序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计并合成11对寡核苷酸片段,用PAS方法,人工合成ORF2基因。基因克隆入pMD18-T载体,经测序证实正确后,连接到表达载体PET-28a,获得重组表达质粒PET-28a/ORF2,导入大肠杆菌BL21（DE3）,在37℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,Western-blot鉴定,在35 000附近出现目的片段。同时通过生物信息学软件对其蛋白二级结构及抗原表位等方面进行预测。     

猪繁殖障碍性疾病病例分析

中国是世界上生猪养殖量和猪类产品消费量最多的国家,中国的猪肉产量占世界的43.35%,养猪业在我国畜牧养殖业占有重要地位。2021年,全国生猪出栏67128万头,比上年增加14424万头,增长27.4%;猪肉产量5296万吨,增加1183万吨,增长28.8%。2021年末,全国生猪存栏44922万头,同比增长10.5%,其中能繁殖母猪存栏4329万头,同比增长4.0%,分别达到2017年末的101.7%和96.8%。在出栏量增长的过程中,养殖业较之过去也得到了蓬勃的发展。虽然规模养殖为企业创造了非常可观的经济效益,但也增加了猪场疾病预防和饲养管理方面的难度。     

猪大肠杆菌病的诊断与防治

大肠杆菌病是常见的人畜共患传染病,该病能造成幼畜的大量感染和死亡,猪大肠杆菌病分为黄痢型,白痢型,水肿型和断奶仔猪腹泻,是根据患病仔猪年龄与致病性大肠杆菌的种类不同进行分类。黄痢型,潜伏期短,病发快,在1~3日龄仔猪中最常见,排黄色稀薄粪便,死亡快速。白痢型,常发生于10~20日龄仔猪,粪便呈白色糊状,可病愈,死亡率低。水肿型,是断奶仔猪常发的肠毒血症,引起胃壁等部位水肿,发病率低,但死亡率高。断奶仔猪腹泻,常发于断奶后6~10 d的仔猪,主要表现为严重脱水,黏膜发绀,肺部干燥贫血等。大肠杆菌病主要通过LT、ST、PCR等方法来检测。目前,用于免疫的疫苗多数是多价灭活苗。随着大规模集约化养猪业的发展,致病性大肠杆菌对养猪生产造成的损失正在增加,并在引起了人们的重点关注。     

猪肺疫菌苗种类及其使用

猪肺疫又叫猪巴氏杆菌病,俗称“锁喉风”或“肿脖子瘟”,是由多杀性巴氏杆菌引起的急性流行性或散发性和继发性传染病。根据巴氏杆菌特异性荚膜抗原特性,可将巴氏杆菌分为A、B、D、E和F5个血清群。本病多发生于中、小猪,成年猪患病较少。本病的发生,无明显的季节性,一年四季都可发生,但以秋末春初及气候骤变的时候发病较多,在南方大多发生于潮湿闷热及多雨季节。饲养管理不当、应激是本病发生的诱因。     

开放式实验教学在农学类实验课中的应用与实践

开放式实验教学是高校实行学分制后实验教学的改革方向,也是培养高素质创新人才的必然选择,这对于培养本科生的综合素质、科研能力和创新精神都具有重要意义。由于传统实验教学存在不足,山东农业大学国家级实验教学中心对农科类实验课的开放式教学作了改革实践,探讨了开放式实验教学的硬件建设、运行和管理机制的建设,建立了＂四位一体＂实验教学管理模式及智能网络化的实验教学管理系统。     

应用重组MSG1蛋白检测猪附红细胞体抗体的ELISA检测方法的建立

 【目的】针对猪附红细胞体g1基因编码的MSG1表面粘附蛋白（rMSG1）和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段。【方法】将MSG1-pET28c_E.coli BL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白。以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体。以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性。【结果】接种后获得了符合效价的抗血清;基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25%,其中阳性样本对已知小鼠抗血清有明显的阻断作用,并且与其它一些抗原无交叉反应;此ELISA方法的特异性和敏感性分别可达到97.06%和95.92%,较间接血凝试验(IHA)有更高的检出率。【结论】结果显示MSG1具有良好的抗原性,建立的ELISA方法具有较高的敏感性、特异性、符合性和可重复性,在临床检测中可以取得理想的效果。     

REV与ALV-J共感染对肉鸡T淋巴细胞免疫功能与组织病理学的影响

 【目的】研究致瘤性病毒REV、ALV-J单一感染和共感染肉鸡后血液和脾T淋巴细胞的免疫功能与脾组织病理学的变化。【方法】用一定剂量的REV和ALV-J单一感染及共感染1日龄肉鸡,取感染后不同日龄鸡的血液和脾组织,无菌分离淋巴细胞,用3H-TdR掺入法和MTT法分别检测T淋巴细胞增殖活性和细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性,并对脾脏进行组织切片、H.E染色检测组织病理学变化,通过免疫荧光抗体结合试验(immunofluorescence assay,IFA)分析组织病毒感染量变化。【结果】感染REV和ALV-J的肉鸡血液和脾T淋巴细胞的增值活性和CTL杀伤活性在整个感染监测期出现降低,单一感染比,共感染两种病毒的肉鸡在某些阶段出现T淋巴细胞免疫功能抑制加重;检测感染后17 d和37 d的脾脏组织病理学变化表明感染病毒的脾脏组织出现间质稀疏,淋巴细胞数量减少,生发层被破坏或减少,17 d较37 d出现病理变化更为明显;同时采用荧光标记的单克隆抗体进行IFA检测发现脾内淋巴细胞含有大量病毒粒子,在共感染两种病毒的肉鸡脾细胞内均检测出两种病毒,且含有病毒数量明显多于单一感染一种病毒的肉鸡。【结论】REV和ALV-J共感染后肉鸡T淋巴细胞功能抑制更为严重,这可能与两种病毒在肉鸡体内数量积聚增加、互为促进有重要关系;同时这两种病毒感染后造成T免疫细胞增殖活性和对肿瘤细胞的杀伤活性降低,可能是病毒持续感染、增殖及组织病变、产生肿瘤细胞的前提,本研究为家禽临床生产中防治REV和ALV-J感染提供免疫学基础。     

猪附红细胞体感染

猪附红细胞体病是由寄生于猪红细胞或血浆中的附红细胞体引起的一种人畜共患传染病。猪感染以后会导致猪的生长发育不良，可以使呼吸道和肠道疾病的发病率增加，还能导致母猪生殖系统的损伤，使孕育后代的效率降低。由于附红细胞体感染使动物受到的影响越来越大，受到了全球各国的重视，尤其最近几年我国的畜牧养殖业受附红细胞体感染的影响日益严重。但是截至目前，该病没有标准的疾病诊断方法和特效治疗药物，因此，建立一种适合于临床快速诊断该病的检测方法，减少该病对人畜的健康危害，保障人畜的安全，对该病的控制及预防都具有重要意义。