基于双语网络教学平台的兽医微生物学课程教学改革

兽医微生物学的双语教学是培养高水平兽医人才的必然要求。青岛农业大学通过与瑞典农业大学的合作,对兽医微生物学双语教学改革展开研究。笔者主张课前开展问卷调查并选择合适的教材,完善和补充网络课程,制作双语教学课件。探讨了教学方法的改革和课后总结的方法,以期为进一步开展兽医微生物学的双语教学提供思路。     

水貂大肠杆菌病的诊断

对临床送检水貂进行剖检,无菌取肝、肾、脾、肺分别接种普通平板和血平板,分离纯化细菌,革兰氏染色镜检为阴性;在麦康凯培养基上生长出红色菌落,三糖铁斜面变黄并产气;IMViC试验结果为+、+、-、-;发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇并产气;用24种药物进行药敏试验,只有大观霉素效果较好。     

含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究

 【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量（CD4+和CD8+）以及淋巴细胞增殖反应（MTT法）水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。     

纳米硒对肉鸡免疫和抗氧化能力的影响

【研究目的】试验旨在研究纳米硒对肉鸡免疫和抗氧化性能的影响。【方法】选用1日龄Avian肉鸡225只,随机分为5个处理组,每组45只,设3个重复,每个重复15只。在玉米．豆粕型日粮基础上添加纳米硒（0、0．15、0．3、0．6、1．2mg／kg）,以饲喂基础日粮组为对照组,试验期6周。【结果】结果表明：（1）试验至14、28日龄时,纳米硒在0．15～1．2mg／kg的添加水平肉鸡的新城疫抗体效价、免疫器官指数高于对照组（P〉0．05）;42日龄时,纳米硒在0．3～1．2mg／kg的添加水平肉鸡的新城疫抗体效价、免疫器官指数显著高于对照组（P〈0．05）。14、28、42日龄时,纳米硒在0．6～1．2mg／kg的添加水平外周血T淋巴细胞转化率显著高于对照组（P〈0．05）。（2）14日龄时,纳米硒在0．6～1．2mg／kg的添加水平血浆中的总抗氧化能力（T-AOC）显著高于对照组（P〈0．05）;纳米硒在0．15～1．2mg／kg的添加水平血浆中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、抑制羟自由基（OH．）能力高于对照组（P〉0．05）,丙二醛（MDA）含量低于对照组（P〉0．05）;纳米硒在0．3～1．2mg／kg的添加水平血浆中一氧化氮（NO）含量极显著低于对照组（P〈0．01）。28日龄时,纳米硒在0．3～1．2mg／kg的添加水平血浆中T．AOC极显著高于对照组（P〈0．01）;纳米硒在0．15～1．2mg／kg的添加水平血浆中GSH-Px活力显著高于对照组（P〈0．05）,MDA含量、NO含量显著低于对照组（P〈0．05）;纳米硒在1．2mg／kg的添加水平血浆中抑制OH．能力的显著高于对照组（P〈0．05）。42日龄时,纳米硒在0．15～1．2mg／kg的添加水平血浆中的T-AOC、GSH-Px活力、T—SOD活力、抑制OH．能力、MDA含量、NO含量都显著高于或低于对照组（P〈0．05）。【结论】因此,纳米硒在0．6～1．2mg／kg的添加水平对提高肉鸡免疫能力效果最佳;纳米硒在0．15～1．2mg／kg的添加水平可以很好的提高肉鸡的抗氧化能力。     

鸡致病性大肠杆菌噬菌体的分离

将微生物实验室分离保存的44株鸡致病性大肠杆菌进行生化鉴定,将鉴定正确的大肠杆菌接种于肉汤培养基,取幼龄培养物利用双层平板法进行大肠杆菌噬菌体的分离。对分离的噬菌体进行增殖后,经过滤除菌得到较纯噬菌体样品,并用甘油进行分装保存。     

用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗原的研究

本试验用抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 单克隆抗体（ Ｓ Ｄ Ｏ Ｗ １７）建立了检测猪体内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的免疫组化染色法,主要步骤：组织块在１００ ｍ Ｌ／ Ｌ中性缓冲液福尔马林中固定２４～４８ ｈ→常规脱水、石蜡包埋、切片４～５μｍ →二甲苯脱蜡→１００％ 酒精→１０ ｍ Ｌ／ Ｌ盐酸酒精 ３０ ｍ ｉｎ（消除内源性过氧化物酶）→９５％ 酒精→８５％ 酒精→７５％ 酒精→蒸馏水→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ→１０％ 马血清３７ ℃３０ ｍ ｉｎ 后转４ ℃过夜→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→生物素化马抗鼠 Ｉｇ Ｇ（１∶２００） ３７ ℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３× ５ ｍ ｉｎ→辣根酶标记链亲和素（１∶２００）３７℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→新鲜配制的 Ｄ Ａ Ｂ室温下显色 ５～１５ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ洗→常规脱水、透明、封片。经对８ 例试验感染 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 仔猪各种组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的一种好方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实验感染SPF猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞早期凋亡细胞的观察

采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染色法,用流式细胞仪检测了猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）实验感染ＳＰＦ猪不同时期外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞感染Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群（早期凋亡细胞群）。结果显示,ＰＲＲＳＶ感染猪外周血单核细胞和肺泡巨噬细胞Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ＾＋／ＰＩ＾－细胞群的表达率均明显高于正常对照猪,感染后２４ｈ表达率达最高值。     

鸡源大肠杆菌噬菌体LHE71的生物学特性和全基因组序列分析

为了获得具有高效广谱裂解特征的噬菌体,本试验以96株鸡源大肠杆菌(E.coli)临床分离株为宿主菌,用双层平板法从鸡场采集的5份粪便样品中分离纯化噬菌体,测定噬菌体的裂解谱,并对筛选到的噬菌体进行形态观察、生物学特性测定和全基因组序列分析。结果显示,从鸡场采集的粪样中分离到1株烈性大肠杆菌噬菌体,命名为LHE71,在菌苔上形成透亮带晕环的噬斑。透射电镜观察该噬菌体形态为长尾噬菌体,正二十面体的头部直径约为70 nm,弯曲的尾部长约150 nm。以E.coli K12为宿主菌增殖噬菌体,当感染复数为0.1时效价最高,可达到2.6×10¹⁵ PFU/mL;该噬菌体增殖的潜伏期约为40 min,爆发量约为10⁴ PFU/cell。噬菌体LHE71在60℃以下、pH 7～9的范围内活性稳定,对紫外线有一定的抵抗力。噬菌体LHE71基因组全长50 158 bp,预测到81个开放阅读框,其中24个编码已知功能蛋白,无tRNA,不含毒力基因和耐药基因。GenBank数据库中共有32株噬菌体与LHE71有同源性,基于噬菌体衣壳蛋白和末端酶大亚基的进化分析结果...     

干奶期奶牛乳房炎防控

乳房炎是影响奶牛健康、牛奶产量及品质、造成牧场经济损失最严重的疾病之一。约2个月的干奶期是防治奶牛乳房炎最关键的时期。本文基于干奶期的乳腺变化,分析干奶期乳房炎高发原因,提出全群及选择性干奶治疗、乳头末端保护方法、营养及卫生方面的饲养管理方法,为防控奶牛乳房炎、提高牛群生产表现及牧场经济效益提供科学参考。     

德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备

【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因,对其进行原核表达及多克隆抗体制备,同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况,为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(登录号：XM＿023631135.1)设计特异性引物,从驴原代肺泡巨噬细胞(donkey primary alveolar macrophages, DPAMs)中提取RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增HO-1基因编码区(coding sequences, CDS),对测序所获序列与其他物种进行相似性比对并构建系统进化树;应用多种在线软件对HO-1基因编码蛋白进行生物信息学分析。将HO-1基因序列克隆至pCold-SUMO载体进行原核表达,经镍柱亲和层析纯化后,以重组的HO-1蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,利用ELISA和Western blotting检测多克隆抗体特异性及与抗原结合的最大稀释度。利用免疫组化试验检测德州驴4种组织中HO-1蛋白的表达水平。【结果】德州驴HO-1基因CDS区全长873 bp,编码...