基于RNA-seq数据大规模挖掘蜜蜂球囊菌的SSR分子标记

基于已获得的球囊菌转录组数据预测微卫星标记(SSR),并进行SSR位点的信息分析和SSR引物的挖掘.利用软件MISA对球囊菌转录组中42610条unigenes进行搜索,共预测出7968个SSRs,分布于5233条unigenes中,其中最主要的重复类型为三核苷酸重复(53.15%),其次为二核苷酸重复(32.32%)和四核苷酸重复(8.46%).二核苷酸重复中的基序主要是AG/CT(占总量的15.8%).针对所有的SSR位点,利用Primer Premier 5软件设计出6956对SSR特异性引物,随机选取20对引物对两个不同来源的球囊菌样品进行SSR位点扩增,共有6对引物成功扩增出符合预期的目的片段.研究结果表明,利用球囊菌转录组数据开发SSR引物是可行的.     

胁迫中华蜜蜂幼虫肠道的球囊菌及其体外培养的高表达基因分析

利用RNA-seq技术对胁迫中华蜜蜂(简称中蜂)6日龄幼虫肠道的球囊菌及其体外培养进行深度测序,根据基因的FPKM值筛选得到高表达基因(HEGs),进而对HEGs进行GO及KEGG代谢通路(pathway)富集分析.Illumina测序数据经质控和过滤得到100814558条有效读段(clean reads),平均Q30均在93.81%以上.GO富集分析结果显示处理组(Aac T)的HEGs富集于39个GO term,基因富集数最多的是细胞(1872 unigene)、细胞组件(1872 unigene)和细胞进程(1748 unigenes);对照组(Aa CK)的HEGs富集于37个GO term,基因富集数最多的是细胞(785 unigenes),其次是细胞组件(785 unigenes)和代谢进程(776 unigenes).KEGG pathway富集分析显示,Aac T的HEGs富集在119个代谢通路上,基因富集数最多的是核糖体(176 unigenes)、碳代谢(147 unigenes)及氨基酸的生物合成(134 unigenes);Aa CK的HEGs富集在110个代谢通路上,基因富集数最多的是核糖体(179 unigenes)、氨基酸的生物合成(70 unigenes)以及碳代谢(62 unigenes).深入分析发现,对于富集在MAPK信号通路上的高表达基因数量,胁迫中蜂幼虫肠道的球囊菌远多于体外培养的球囊菌,说明病原的该通路在胁迫后期被显著激活.     

意大利蜜蜂AmMETTL3基因的分子克隆与表达模式

为克隆意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）的AmMETTL3基因,解析AmMETTL3蛋白的分子特性,并测定AmMETTL3在工蜂不同组织及发育时期的表达谱。通过PCR扩增AmMETTL3的CDS并进行Sanger测序验证;使用相关生物信息学软件预测AmMETTL3的理化性质和分子特性,鉴定METTL3的结构域和保守基序,并构建系统进化树;采用RT-qPCR检测AmMETTL3在工蜂7个组织及5个不同发育时期的相对表达量。结果表明：成功克隆到AmMETTL3的CDS并发现AmMETTL3不含典型的跨膜结构域和信号肽;METTL3在各种昆虫中高度保守且含1个MT-A70结构域和3个相同的保守基序;AmMETTL3与东方蜜蜂METTL3的亲缘关系最近;相较于触角中的表达量,AmMETTL3的表达量在咽下腺中极显著上调（P<0.01）,在中肠中极显著下调（P<0.01）;AmMETTL3在3日龄幼虫中的表达量极显著（P<0.01）低于卵中的表达量,在12日龄蛹中的表达量极显著（P<0.01）高于卵中的表达量,在2、6、12、15和18日龄工蜂体内的表达量极显著（P<0.01）低于1日龄工蜂体内的表达量。研究结果为深入探究AmMETTL3的功能及其参与的表观调控机制提供了参考和依据。     

金属离子及脲对中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的影响

通过提纯中华蜜蜂工蜂体内的碱性磷酸酶,研究金属离子及脲对碱性磷酸酶的影响.结果表明:Na+、K+和L i+等正一价金属离子浓度为1.0-10.0 mmol.L-1时,对酶活力没有影响;Mg2+、Ca2+、Ba2+浓度为0-5.5 mmol.L-1时,对酶均有激活作用;N i2+、Mn2+、Co2+、Zn2+浓度为0-200μmol.L-1时,对酶有激活作用,而Cu2+在该浓度下对酶有抑制作用;Hg2+、Ag+及Cd2+浓度为0-150μmol.L-1时对酶有抑制作用;脲浓度低于3 mol.L-1或高于3 mol.L-1时,对碱性磷酸酶有变性失活作用.     

中华蜜蜂增长阶段气温20℃条件下巢温昼夜变化

蜜蜂昼夜巢温分布和变化规律能够反映蜜蜂巢温调节能力.蜜蜂作为社会性的模式昆虫,通过蜂群的社会行为保持了巢温相对稳定.为了研究中华蜜蜂昼夜巢温分布和变化规律,在春季增长阶段,以每分钟一次连续测定了中华蜜蜂蜂巢均匀分布的180个位置的蜂巢温度.结果表明:在环境温度20℃条件下,巢温昼夜的分布模式具有明显差异,白天高温的区域大于夜间,白天巢温变化幅度小于夜间.白天巢温比夜间高0.5-1.0℃.根据巢温以及巢温昼夜变化的幅度,将蜂巢划分为6个温区.蜂巢中仅中蜂路温区1的子脾中心区的巢温昼夜变化不显著,保持在34.5-35.0℃,其他区域巢温昼夜差异明显.     

蜂胶提取工艺的研究

通过单因素试验及分析确定正交实验参数.对结果进行方差分析得出(1)蜂胶提取最佳工艺参数为:乙醇浓度80%、提取温度60℃、提取时间3 h、超声时间20 min;(2)蜂胶提取得率:黄酮21.4%,干物质50.7%.     

复合蜂胶乳剂抑菌试验研究

通过对吐温-40蜂胶乳剂、吐温-60蜂胶乳剂、复合蜂胶乳剂和含蜂胶乙醇溶液稀释液对金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌进行抑菌试验,得到这四种蜂胶液稀释度小于等于4倍时抑菌效果均良好;稀释至8倍时,乙醇液抑菌效果也很显著,吐温-40蜂胶乳剂、吐温-60蜂胶乳剂、复合蜂胶乳剂抑茵效果不显著;比较四种乳剂抑菌效果比较可得：蜂胶乙醇液〉复合蜂胶乳剂〉吐温-60蜂胶乳剂〉吐温-40蜂胶乳剂。     

中华蜜蜂与意大利蜜蜂中肠消化酶活性差异性探讨

本试验对中华蜜蜂(A.c.cerana Fab.)和意大利蜜蜂(A.m.ligustica Spinola)的成年工蜂、幼虫中肠内蛋白酶、淀粉酶、蔗糖酶的活性进行了比较.试验结果显示:中华蜜蜂、意大利蜜蜂幼虫之间三种酶活性差异均不显著;而中华蜜蜂、意大利蜜蜂的成蜂间蛋白酶活性差异显著(P＜0.05),意大利蜜蜂高于中华蜜蜂;淀粉酶和蔗糖酶的活性分别为差异显著(P＜0.05)、差异极显著(P＜0.01),中华蜜蜂高于意大利蜜蜂;同一蜂种内,成年蜂中肠液内的三种酶活性,均高于大、小幼虫,且差异极显著(P＜0.01).     

山茶蜂花粉多糖对四氧嘧啶致小鼠糖尿病的降血糖作用研究

对山茶蜂花粉多糖降血糖作用进行了研究.通过一次性按80 mg/kg剂量尾静脉注射四氧嘧啶致小鼠实验性糖尿病后,腹腔注射低(75 mg/kg·d)、中(150 mg/kg·d)、高(300 mg/kg·d)三个剂量的山茶蜂花粉多糖14 d.研究显示高、中、低三个剂量的多糖均能有效降低实验性糖尿病小鼠的血糖值.实验结果表明:山茶蜂花粉多糖具有一定的降血糖功效.