基于N基因的小反刍兽疫病毒贵州流行株分子特征与分群研究

为探讨小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）贵州流行株N基因分子特征和分群,试验设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对小反刍兽疫（peste des petits ruminants,PPR）临床样本进行N基因扩增,克隆至pMD19-T载体,对阳性重组质粒进行测序,应用DANStar软件对测序序列和参考序列进行核苷酸同源性、氨基酸同源性、变异位点及系统进化树分析。结果显示：PPRV贵州流行株N基因扩增长度为1 578 bp,其相互间核苷酸、氨基酸同源性分别为99.6%~100.0%及99.2%~100.0%,与国内参考株N基因的核苷酸序列（97.7%~99.9%）及氨基酸序列（98.3%~100.0%）同源性较国外参考株（88.5%~97.7%和92.2%~98.5%）高;PPRV贵州流行株N基因编码的氨基酸同疫苗株Nigeria 75-1相比存在26个位点突变,但没有氨基酸的缺失或增加;基于N基因系统进化分析显示,PPRV贵州流行株同国内参考株处于同一个进化分支,但与国外参考株处于不同进化分支;其属于病毒进化的Ⅳ基因群,与国内参考株处于同一系统分群,但与疫苗株Nigeria 75-1（Ⅰ基因群）处于不同基因群。     

Prion蛋白致病机理的研究

Prion这一术语是Prusiner提出的,其中Pr源自英文蛋白质(protein),i源自英文传染性的(infec-tious),on意指粒子(particle)。Prions病也称为传染性海绵状脑病(transmissible spongiform enceph-alopathies,TSEs),是发生于动物与人类的一种致命性神经退行性疾病(Attwood等,2000)。TSEs包括疯牛病(mad cow disease,MCD),即牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE)、羊瘙痒症(scrapie)、克-雅氏病(creutzfeldt-jakob dis-ease,CJD)、GSS综合征(gersrmann-straussler-scheikerg disease,GSS)和致死性睡眠综合征(fatalfamil…     

小反刍兽疫快速诊断技术及其疫苗的研究进展

小反刍兽疫（PPR）是一种感染家养和野生反刍类动物的急性传染病，它是由副粘病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的。本病没有有效治疗方法，只能预防,因此诊断监测技术是控制该病的重要手段。由于传统的血清学检测技术，如琼脂糖凝胶免疫扩散(AGID)、病毒中和试验（VNT）等存在诸多缺陷，难以用于大规模的疫情监控。目前国际上发展的主流是以分子生物学技术为基础的检测方法，如RT-PCR、PCR-ELISA等，这些新技术灵敏便捷，高通量，而且能够在野外进行。而疫苗以重组疫苗为研究方向。     

小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因体外转录与RT-PCR方法的研究

小反刍兽疫(PPR)是由PPRV引起的主要是绵羊和山羊的一种热性病毒病。我们合成了PPRVN基因,连接到pGEM-T载体中,线性化处理后用T7转录酶启动体外转录,获取类PPRV的RNA作为阳性对照,参考国外文献设计一对合适的引物NP3和NP4,经PCR条件的优化,获得了预期的350bp目的片断,初步建立了检测PPRVN基因的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)。     

小反刍兽疫一步法RT-PCR检测方法的建立

为储备小反刍兽疫疫情防控技术,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒N基因序列设计合成特异性引物,以小反刍兽疫弱毒疫苗为材料,建立小反刍兽疫病毒一步法PT-PCR检测方法,并对所建方法进行条件优化和性能评价。结果显示,建立的方法能有效扩增大小约447bp目的基因片段。该一步法RT-PCR最佳模板质量浓度为6.76×10-3 g/L,最佳退火温度60℃。该一步法RT-PCR检测方法性能评价结果显示,其最小模板检出质量浓度为6.76×10-6 g/L,且方法具良好的特异性和临床应用性,可用于小反刍兽疫多种样本的检测。