杜氏盐藻CDPK基因的克隆及其序列的分析

首先对拟南芥Arabidopsis thaliana等其他物种CDPK基因的同源序列进行相似性分析,设计1对简并引物,利用RT-PCR技术获得一个长636 bp的片段,经克隆测序分析发现其同拟南芥的CDPK基因有60.3%的相似性,然后再以此片段为模板设计引物,通过RACE技术构建杜氏盐藻Dunaliella salinaCDPK基因的全长序列。在GenBank中进行Blastp检索,发现该片段与许多植物CDPK基因具有较高的相似性(50.2%~73.0%)。     

家蚕微孢子虫PCR检测的研究

根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、柞蚕微孢子虫、Vairimorphanecatrix及Pleistophoraanguillarum等。对N.b孢子DNA检测灵敏度达1ng水平。     

不同引物组合对中国杏品种资源S基因特异扩增效果比较

 利用已报道的5对蔷薇科李属通用引物组合对起源于我国的30个杏(Prunus armeniaca L.)品种进行了S等位基因的专一性PCR扩增（S-allele specific PCR），并依据扩增系数和扩增成功率两个指标对扩增效果进行了评价。结果表明：①不同的引物组合对参试杏品种的扩增系数和扩增成功率差异很大，其中引物组合EM PC2consFD+EM PC3consRD扩增系数和扩增成功率均为最高（66.7%和53.3％），效果最好；②引物组合EM PC2consFD+EM PC3consRD对‘华县大接杏’和‘猪皮水杏’未能扩增出任何条带，而PruC2+PruC4R和PaConsⅡ F+PaConsⅡ R两对组合却能对其扩增出两条带；此外，5对组合均没有对‘兰州大接杏’和‘白木杏’这两个品种扩增出任何条带，表明要对中国杏品种资源的S基因型进行全面、准确鉴定，除了采用不同的引物组合外，还需要根据中国杏的S基因序列进一步开发、设计新的专用引物；③ EM-PC2consFD+EM PC3consRD和PruC2+PruC4R两对组合对‘红丰’、‘新世纪’、‘红荷包’和‘二花槽’等4个品种的扩增结果表明，依据本试验所提出的扩增系数和扩增成功率两个指标评价不同引物组合的扩增效果是有效的。     

马立克氏病鸡MDV血清基因的克隆与鉴定

[目的]克隆马立克氏病鸡MDV血清基因,并对其进行鉴定。[方法]从潜伏期感染马立克氏病鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR扩增马立克氏病毒的L-meq基因。将其插入pMD18-T克隆载体并进行测序,并用DNAman软件进行序列分析。[结果]获得的DNA片段的序列与已发表的L-meq基因序列相一致,表明该试验成功获得了目的基因。[结论]该研究可为鸡马立克氏病的预防与治疗提供新思路和新方法。     

保康野生蜡梅花与叶基因组DNA提取方法的研究

[目的]证实从蜡梅花基因组提取DNA等同于从叶基因组提取DNA。[方法]采用CTAB法,对保康野生蜡梅花与叶基因组进行遗传多样性研究。[结果]在用CTAB法提取DNA时,65℃水浴振荡并二次抽提后花基因组DNA在浓度和OD260/OD280上都与叶基因组DNA达到相近的水平。[结论]从性状表现更显著的蜡梅花基因组提取DNA进行遗传性分析能达到叶基因组的水平。     

应用响应曲面法优化萱藻丝状体扩增条件

为优化萱藻丝状体扩增条件,提高萱藻丝状体的扩增速率,本研究以实验室萱藻种质库保存的丝状体为实验材料,在单因素实验的基础上,应用Box-Behnken设计对萱藻丝状体扩增条件进行了响应曲面优化探索。以增重倍比为指标,确定了扩增萱藻丝状体的最佳条件：温度20.45℃, 光照强度78.13μmol/(m_².s),外加氮磷比16.19。在该条件下扩增10d,萱藻丝状体增重倍比为(299.21%±13.58%),显著高于单因素实验和Box-Behnken设计实验条件下获得的萱藻丝状体增重倍比。实验结果与理论预测值的相对误差小于5%,模型可靠。为评价优化培养后萱藻丝状体的发育情况,对丝状体进行了20d的诱导,结果显示：优化培养后的萱藻丝状体呈深褐色,细胞质充盈,孢子囊比例(26.37%±5.22%)比对照组的孢子囊比例(18.10%±3.51%)提高了45.69%；优化条件下的孢子囊直径平均为(19.75μm±0.21μm),高于对照组的孢子囊直径(16.91μm±0.36μm)。本研究结果表明,在萱藻丝状体扩增过程中,对扩增环境条件进行有目的性的调控,设置合适的营养盐浓度配比,不仅可以实现较高的扩增速率,还可以促进丝状体的孢子囊发育。