白姜转录组中的SSR位点信息分析

利用Trinity软件对白姜转录组进行de novo组装,CAP3软件对组装的contig拼接删选;MISA工具对unigene进行SSR检索。从153 724条unigene中共发现16 593个SSR,分布在14 436条unigene序列中,出现频率为9.39%,平均每9.26kb含有1个SSR位点。其中二核苷酸、三核苷酸所占比例最大,分别为37.59%和45.24%;二者分别以AG/CT和AGG/CCT重复基元为主,占22.47%和11.79%。基序长度主要分布于12~20bp,占总数的85.06%。研究结果表明,白姜SSR位点频率、密度较高,类型多样,在生姜分子标记辅助育种、遗传多样性研究中有较大应用潜能。     

微载体培养PK-15细胞试验条件的优化

为了优化PK-15细胞在微载体上的生长条件,在微载体浓度5 mg/mL、低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液条件下,观察4.5×104cells/mL和8.7×104cells/mL的细胞接种密度对细胞生长的影响;在低糖DMEM+100 mL/L NBS培养液、接种密度5×104cells/mg条件下,观察3、5、10 mg/mL微载体浓度对细胞生长的影响;在3 mg/mL微载体浓度条件下、接种密度25×104cells/mL,观察MEM、高糖DMEM和低糖DMEM培养基对细胞生长的影响。结果表明,以微载体接种细胞密度4.5×104cells/mg、微载体浓度5 mg/mL在低糖DMEM培养基中培养方式效果最为理想。优化的培养工艺适用于PK-15细胞的生产。     

shRNA表达质粒体外防治猪传染性胃肠炎病毒感染

猪传染性胃肠炎病毒是引起猪胃肠道感染的主要病原之一,新生仔猪感染后死亡率很高,给养猪业带来重大经济损失.为了探索运用RNA干扰技术防治猪传染性胃肠炎病毒感染的可能性,我们构建了两个靶向病毒基因组的小发卡RNA(shRNA)表达质粒pEGFP-U6/P1和pEGFP-U6/P2,并分别转染猪睾丸(ST)细胞.通过细胞增殖试验(MTS)和定量RT-PCR检测试验表明,这两个质粒均可高效特异地抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制.研究结果表明,RNA干扰(RNAi)技术可以用来有效防治猪传染性胃肠炎.     

草鱼出血病病毒vp6核酸疫苗的免疫效果评估

为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游,获核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6。按每尾分别注射疫苗载体10、30、60μg的剂量免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(体长14～20 cm,体质量60～120 g),同设pFastBacTMDual载体(30μg/尾)阴性对照组及空白对照组(0.4 mL/尾无菌水)。于免疫后不同时间通过RT-PCR检测免疫鱼体中vp6基因的表达,并于免疫后第14、21、28、49、70天分别通过间接凝集反应检测血液中的抗体水平,并在免疫第21天感染GCRV评估免疫保护效果。结果显示,核酸疫苗免疫草鱼后,各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第28天达到最高;攻毒后每尾注射疫苗载体10、30、60μg组的死亡率分别为0%、0%、5%,pFastBacTMDual载体对照组和空白对照组分别为30%和100%。表明构建的核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果。     

家蚕精巢中小热激蛋白在不同发育时期的蛋白质组学分析

[目的]研究家蚕不同发育时期精巢组织中小热激蛋白(sHSP)变化,为阐明其在家蚕精子发生中的重要作用提供理论参考.[方法]利用双向电泳技术建立家蚕5龄第5天、化蛹第1天和化蛾第1天3个时期的精巢电泳图谱,并用Imagemaster2D 6.0软件分析不同时期图谱中的差异蛋白,再用基质辅助激光解析离子质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定.[结果]鉴定出家蚕精巢中5个小热激蛋白,分别为sHSP23.7、sHSP20.8、sHSP 20.4、sHSP19.9和sHSP19.8,它们在化蛹第1天和化蛾第1天的蛋白合成量比5龄第5天显著降低.[结论]在家蚕精巢中,5龄第5天是形成有核精子的重要时期,有大量的微管蛋白(α微管蛋白、β微管蛋白),它是中心粒和纺锤体的重要组成成分,在减数分裂中有重要作用,这些小热激蛋白可能在有核精子形成时与微管蛋白相互作用,在促进鞭毛轴丝形成和鞭毛运动方面发挥重要作用.     

基于近红外光谱法对五倍子主成分含量的快速检测

水分、单宁酸和没食子酸含量是评价五倍子质量的重要指标,目前多采用中华人民共和国林业行业标准的方法获得,繁琐且时效性得不到保证。为了探讨快速测量这些指标的可行性,通过采集五倍子样本130份,采用化学法测量化学值,利用近红外光谱技术进行五倍子样本的光谱扫描,将其与传统方法测定的化学值进行拟合,采用偏最小二乘法(PLS)构建数学模型,对比模型相关系数和误差评估模型预测性能。最终得到五倍子中水分、单宁酸和没食子酸的最佳预处理方法分别为FD+MSC、FD和FD+ML,水分的特征波段为9 403.7～7 498.2、 6 012.0～5 774.1、 4 601.5～4 246.7 cm^-1,单宁酸的特征波段为9 403.7～7 498.2、 6 102.0～4 597.7 cm^-1,没食子酸的特征波段为6 102.0～5 446.3,4 601.5～4 246.7 cm^-1;主因子数分别为9、 10和5;水分、单宁酸和没食子酸校正集相关系数(R_c²)分别为0.968、 0.915和0.9...     

温度胁迫对烤烟生理机制的影响及相关调控研究进展

温度影响烤烟生长发育，随着当前极端高温和低温灾害的频发，温度胁迫成为制约烤烟正常生长发育和生理功能的重要因素之一。低温胁迫和高温胁迫是目前烤烟苗期和成熟期中最常见的灾害，对烤烟品质和产量造成严重影响。综述了温度胁迫对烤烟生长发育、光合功能、碳氮代谢、抗氧化系统等生理过程的影响，介绍了植物蛋白和分子机制在温度胁迫方面的相关研究进展，系统总结了目前针对田间温度胁迫的抗逆调控措施，包括田间管理和喷施外源物质。目前针对温度胁迫管理的大多农艺干预措施尚不完善，需要深入了解不同品种的遗传、生化和生理过程，以鉴定和选择性状，并增强其耐高温机制，培育耐高温胁迫的烤烟品种。对今后研究进行展望，包括挖掘地方种质资源，培育耐热品种，利用多组学或交叉组学等手段深度挖掘烤烟温度胁迫响应机制，开展对烤烟温度胁迫的预测研究，有针对性制定抗逆栽培管理措施等，以期为烤烟防御气候灾害和农业减灾增效提供科学支持。