家蚕空泡型ATP酶（V-ATPase）基因的基本信息及表达特征

【目的】鉴定家蚕（Bombyx mori）中的空泡型ATP酶（vacuolar-type ATPase, V-ATP酶）A、B亚基的编码基因,并调查其在家蚕幼虫5龄第3天不同组织和上蔟时期丝腺不同区段的表达特征。【方法】利用生物信息学的方法鉴定家蚕的V-ATP酶A、B亚基的编码基因并在线预测V-ATP酶两个亚基所具有的结构域,采用软件将其分别与其他物种中V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列进行同源序列比对和进化树的构建,通过荧光定量PCR技术分析家蚕V-ATP酶A、B亚基的编码基因在5龄第3天家蚕各组织的表达情况。进一步利用向家蚕幼虫上蔟时期的气孔注射pH值指示剂溴酚蓝,对丝腺进行染色,通过颜色变化对丝腺不同区段的pH值进行调查。最后,采用荧光定量PCR对家蚕上蔟时期丝腺不同区段V-ATP酶A、B亚基编码基因的表达情况进行分析。【结果】获得了家蚕V-ATP酶A、B亚基的编码基因BGIBMGA008295(GenBank登录号NM_001098359.1)和BGIBMGA002241(GenBank登录号NM_001098358.1)。结构域预测发现这两个亚基均具有3个非常保守的结构域,分别为位于N端的β筒结构域、序列中部的核苷酸结合结构域和C端结构域。将这两个基因编码的V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列与其他物种V-ATP酶A、B亚基的氨基酸序列进行同源性比对和进化树的构建,同源比对结果发现不同物种中V-ATP酶A、B亚基的氨基酸相似度为90%,保守结构域间相似度高达95%以上,说明不同物种间V-ATP酶A、B亚基高度保守。进化树显示家蚕V-ATP酶A、B亚基与同属于鳞翅目的其他昆虫的V-ATP酶A、B亚基亲缘关系较近。5龄第3天家蚕各组织中V-ATP酶A、B亚基编码基因的荧光定量PCR结果显示,这两个基因主要在中肠、脂肪体、生殖腺和丝腺中表达。使用溴酚蓝染色的方法分析上蔟期丝腺不同区段的pH情况,结果显示家蚕后部丝腺、中部丝腺后区和中区为中性或碱性环境,中部丝腺前区pH急剧下降到酸性环境,前部丝腺也为酸性环境。进一步对V-ATP酶A、B亚基编码基因在上蔟期丝腺不同区段进行表达情况分析,发现V-ATP酶A、B亚基基因在前部丝腺和中部丝腺前区高量表达,推测V-ATP酶可能与这两个区域低pH环境的产生和维持相关。【结论】明确了V-ATP酶在家蚕各组织的表达情况,V-ATP酶可能与中部丝腺前区和前部丝腺腺腔的酸化相关,这为进一步研究V-ATP酶的生理功能提供了理论依据。     

棉铃虫部分组织中蛋白酶抑制剂的调查与分析

蛋白酶抑制剂在鳞翅目昆虫的生长、发育以及免疫过程中发挥了重要作用.该文采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-polyacrylamide gel electrophoresis Native-PAGE)结合胰凝乳蛋白酶抑制剂(Chymotrypsin inhibitor,CI)和胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor,TI)活性染色的方法,调查了棉铃虫部分组织中胰凝乳蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶抑制剂的分布情况.结果表明:在碱性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳下,血液中可检测到5条CI活性带,分别命名为H-CI1～H-C15.同样能检测到几条迁移率很近且难以分开的TI活性带,而在头,丝腺、脂肪体、体壁、中肠和生殖腺等组织器官中没有检测到CI和TI活性带.在酸性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳下,血液中检测到一条CI活性带,命名为H-CIb1;两条TI活性带,命名为H-TI1和H-TI2.其他组织与碱性电泳的结果一致,未检测到CI和Tl的存在.

Abstract：

Proteinase inhibitors play an important role in the growth,development and immunity of the Lepidoptera insects.In this study,native polyacrylamide gel electrophoresis was performed in conjunction with CI or TI activity staining to detect the chymotrypsin inhibitor and trypsin inhibitors from some tissues of cotton bollworm,Helicoverpa armigera.Alkaline native polyacrylamide gel electrophoresis detected 5activitv bands named H-CI1～H-CI5 from the hemolymph.In addition,several activity bands of TIs were identified,which could not be separated from each other due to the similar Rf between them.No CI or TI activity bands were observed in the head,silkgland,fatbody,integument,midgut and gonad of the cotton bollworm.Acidity native polyacrylamide gel electrophoresis detected one activity band of CI and two activitv bands of TIs from the hemoymph and were named H-CIb1,H-TI1 and H-T12,respectively.Similar to the case of alkaline native polyacrylamide gel electrophoresis,no CI or TI was not detected in the other tissues studied.     

棉铃虫部分组织中蛋白酶抑制剂的调查与分析

蛋白酶抑制剂在鳞翅目昆虫的生长、发育以及免疫过程中发挥了重要作用.该文采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-polyacrylamide gel electrophoresis Native-PAGE)结合胰凝乳蛋白酶抑制剂(Chymotrypsin inhibitor,CI)和胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor,TI)活性染色的方法,调查了棉铃虫部分组织中胰凝乳蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶抑制剂的分布情况.结果表明:在碱性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳下,血液中可检测到5条CI活性带,分别命名为H-CI1~H-CI5.同样能检测到几条迁移率很近且难以分开的TI活性带,而在头、丝腺、脂肪体、体壁、中肠和生殖腺等组织器官中没有检测到CI和TI活性带.在酸性非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳下,血液中检测到一条CI活性带,命名为H-CIb1;两条TI活性带,命名为H-TI1和H-TI2.其他组织与碱性电泳的结果一致,未检测到CI和TI的存在.     

5种不同商品化的饲料对C57BL/6J和KM小鼠生长和繁殖的影响

研究市场上常见的5种饲料对C57BL/6J小鼠及KM小鼠生长和繁殖的影响,为实验小鼠生产中合理使用饲料提供科学依据.实验选取3周龄C57BL/6J小鼠和KM小鼠各250只,每种鼠随机分为5组,每组50只,雌雄各半,饲喂A,B,C,D,E共5种不同厂家的实验动物维持饲料,测定小鼠4～8周龄的体质量和脏器系数.另选取C57BL/6J小鼠及KM小鼠性成熟小鼠各150只,雌雄各半,每种鼠随机分为5组,每组15对,饲喂A,B,C,D,E共5种不同厂家的实验动物繁殖饲料,测定母鼠的产仔数、连胎率.结果表明:①5种维持饲料均能满足小鼠的生长需求, C饲料和E饲料更符合小鼠生长的营养需求.②5种饲料饲喂的小鼠器官指数正常.③5种繁殖饲料饲喂的母鼠第1,2胎的产仔数差异不具有统计学意义(p0.05),说明产仔数更多取决于遗传因素,本次调查的几种饲料对其影响较小.合理选择实验小鼠所需饲料,利于实验数据的稳定.     

家蚕精巢中小热激蛋白在不同发育时期的蛋白质组学分析

[目的]研究家蚕不同发育时期精巢组织中小热激蛋白(sHSP)变化,为阐明其在家蚕精子发生中的重要作用提供理论参考.[方法]利用双向电泳技术建立家蚕5龄第5天、化蛹第1天和化蛾第1天3个时期的精巢电泳图谱,并用Imagemaster2D 6.0软件分析不同时期图谱中的差异蛋白,再用基质辅助激光解析离子质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定.[结果]鉴定出家蚕精巢中5个小热激蛋白,分别为sHSP23.7、sHSP20.8、sHSP 20.4、sHSP19.9和sHSP19.8,它们在化蛹第1天和化蛾第1天的蛋白合成量比5龄第5天显著降低.[结论]在家蚕精巢中,5龄第5天是形成有核精子的重要时期,有大量的微管蛋白(α微管蛋白、β微管蛋白),它是中心粒和纺锤体的重要组成成分,在减数分裂中有重要作用,这些小热激蛋白可能在有核精子形成时与微管蛋白相互作用,在促进鞭毛轴丝形成和鞭毛运动方面发挥重要作用.