水禽源沙门菌的分离鉴定与PFGE分子分型

为了明确目前广东省水禽源沙门菌的优势血清型及其分子流行病学动态,采用细菌分离纯化、生化特性鉴定和PCR扩增从316份样品中分离鉴定出188株水禽源沙门菌;采用玻片凝集法将分离株分为4(B、D、C1、E1)个群别8种血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型法对分离株进行分子分型,得到PFGE-XbaⅠ带型62种,菌株间相似度为54.1%~100.0%,分为A^I共9个聚类簇与11个单一基因型。结果表明,广东水禽源沙门菌优势血清型为鼠伤寒沙门菌,PFGE-XbaⅠ带型具多样化,其中11种PFGE-XbaⅠ带型在区域和年份小范围集中流行,32种带型跨区域与跨时间交叉分布呈散在"流行暴发",不同血清型分离株的PFGE-XbaⅠ带型差异较大,相同血清型的分离株PFGE-XbaⅠ带型一般具有相同图谱型或聚类在一起。本研究采用PFGE法进行分子分型分析具有流行病学意义,并探明了本地沙门菌分离株血清型与分子分型的关系。     

1例鸡源血清4型禽腺病毒感染的实验室诊断

本研究从广州番禺某鸡场送检病死鸡中分离获得1株疑似Ⅰ群禽腺病毒。病鸡剖检以心包积液、肝脏呈土黄色并伴有出血点,肾脏肿胀、出血为主要特征。实验室通过血凝试验、PCR鉴定、序列测定及遗传进化分析、动物回归试验、病理组织学观察等进行一系列检测。结果显示,该毒株不能凝集鸡红细胞,根据FAdV的六邻体(Hexon)基因设计引物,进行PCR扩增和单克隆测序,PCR扩增出分子量约为550bp的特异性条带,通过序列测定和遗传进化分析表明,该分离病毒株与FAdV-4的相似性最高。同时用该分离毒株的鸡胚尿囊液感染28日龄雏鸡,试验鸡可复制出与临床相似病例,病理组织学观察可见,心肌细胞有炎性细胞浸润,肝内有嗜碱性包涵体等病变特征。综上,分离株B13为Ⅰ群FAdV-4。     

华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

 【目的】副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,了解副猪嗜血杆菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。【方法】参考CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测副猪嗜血杆菌华南分离株对21种抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测9 种四环素耐药基因的携带情况,并利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型技术对携带四环素耐药基因的菌株进行了遗传相关性分析。【结果】结果显示：被检菌株对磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对磺胺类药物的耐药率高于80%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受3种或3种以上的抗菌药物,其中以7重和8重耐药菌株的数量最多,分别占19.13%和17.39%。2008-2010年华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性总体上呈现逐年上升的趋势。15.62%（18/115）的菌株携带tetB基因,这些菌株之间表现明显的遗传差异性,但是部分菌株存在克隆传播关系。【结论】副猪嗜血杆菌对抗菌药物的耐药性比较高,tetB基因在耐四环素的副猪嗜血杆菌中广泛存在,表明主动外排泵作用可能是副猪嗜血杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。本研究有助于了解副猪嗜血杆菌耐药性的变化特点,并初步揭示了该菌对四环素的耐药机理。     

CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797～+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.     

猪链球菌2型毒力相关因子的研究进展

目前,猪链球菌(Streptococcus suis)病已成为严重影响各国养猪业发展和人类健康的一种重要的人兽共患传染病。猪链球菌的血清型众多,有35个血清型,其中猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)的致病性强、流行范围广,而且它的毒力因子在该菌的致病过程中发挥着重要的作用。但是猪链球菌2型毒力因子认识的缺乏是制约该病有效防制的关键,因此作者对SS2已发现的毒力因子和新发现的一些毒力相关因子进行了广泛深入的论述,为该病的预防、治疗提供科学依据和参考。     

广东省部分地区规模化猪场猪流感病毒感染的血清学调查与分析

为了解广东省规模化猪场猪流感病毒(SIV)感染情况,本研究采用ELISA方法和血凝抑制试验(HI),对2011年～2012年采集的1 050份血清样品进行SIV血清学检测.两种检测方法结果显示1 050份血清样品中SIV抗体阳性率分别为50.4％(ELISA)和50.2％(HI).其中珠三角地区和粤东地区的感染率高于粤西地区.SIV亚型调查结果显示该地区流行的SIV主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为39.2％和18.2％(ELISA).部分猪场存在H9亚型SIV抗体.部分猪群中同时存在H1和H3两种亚型SIV抗体,表明猪群中存在不同亚型SIV混合感染.本研究为广东省猪流感的预防提供参考依据.     

鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析

为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性，本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象，采用λ-Red同源重组技术，分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株，并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养，对各菌株生物学特性进行比较；通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性；采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性；将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠，测定各菌株对小鼠的毒力，并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明，正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示，与亲本株相比，A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001)，不产酸、不产生H₂S，菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐，不产生H₂S，菌体极显著变长(P<0.001)，表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示，菌株传至60代时，基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示，与亲本株比较，A...