多杀性巴氏杆菌鉴定与特性研究的分子生物学方法

多杀性巴氏杆菌是一种常见病原菌，其血清型众多（16种血清型），在毒力及流行病学等方面的生物学特性差异很大。分子生物学鉴定和特性分析方法能直接揭示其基因型上的差异，具有高灵敏度和可靠性。本文综述了多杀性巴氏杆菌的PCR、菌落杂交和16S rRNA基因测序等鉴定方法以及限制性酶切分析、核糖体分型、脉冲场凝胶电泳、PCR指纹等特性分析方法。     

鸽圆环病毒浙江株△Cap基因的克隆与原核表达

根据已发表的鸽圆环病毒(PiCV)序列,在V1ORF保守序列部位设计引物(目的片段长度为629bp),对浙江某鸽养殖场的病料进行PCR扩增检测,获得阳性样品;应用设计的删除核定位信号外壳蛋白基因(△Cap)的引物,扩增获得680bp的△Cap基因,克隆于pMD18-T载体,进行测序;将△Cap基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,△Cap融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的22.1%。     

抗菌肽制剂对妊娠母猪蓝耳病抗体水平及生产性能的影响

为了研究抗菌肽制剂对妊娠母猪蓝耳病抗体水平及生产性能的影响,根据品种相同、体重相当的原则,随机选取180头妊娠母猪,试验A组、B组以及对照组各60头,试验A、B组饲料中添加0.3%、0.5%抗菌肽,对照组饲料中添加抗生素。通过ELISA抗体检测方法 ,分别检测试验组和对照组的蓝耳病抗体水平。结果表明:试验A、B组的蓝耳病抗体水平(S/P值)的稳定比例分别为80%和88.3%,显著高于对照组的68.33%(P≤0.05);试验A、B组的死胎率、窝均木乃伊数和死胎数均显著低于对照组(P≤0.05),窝均健仔数显著高于对照组(P≤0.05)。     

胞内劳森菌SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×102~1.0×108拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值(Ct)之间具有良好的线性关系(R2=0.992),最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率(分别为40.7%和78.9%)。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。     

银杏叶提取物对肉仔鸡十二指肠黏膜免疫的调节作用

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对肉仔鸡十二指肠黏膜的免疫调节作用。【方法】将360只1日龄健康AA肉用母雏鸡随机分成5组,每组6个重复,其中1组为对照组,饲喂基础日粮;其余4组分别饲喂添加质量分数0.009%金霉素及0.15%,0.20%和0.25%EGB的日粮,试验期为42d。分别于21和42d取样,测定各组肉仔鸡十二指肠黏膜免疫球蛋白含量、黏膜免疫相关细胞数量和白细胞介素-2(IL-2)含量。【结果】日粮中添加质量分数0.20%,0.25%EGB可显著提高42日龄肉仔鸡十二指肠黏膜IgA、IgG、IgM含量(P<0.05),提高十二指肠上皮内淋巴细胞、肥大细胞、杯状细胞数量和IL-2含量(P<0.05),并且作用效果优于金霉素组(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.20%或0.25%EGB,可增强肉仔鸡十二指肠黏膜免疫功能。     

基因芯片技术在现代畜牧业中的应用

基因芯片技术是建立在杂交序列基本理论上的分子生物学技术,具有强大的类比性、重复性、微型化和自动化等特点。由于其克服了传统核酸印迹杂交技术操作复杂、自动化程度低、检测效率低等缺点,得以飞速发展,特对该技术以及其在畜牧业的新兽药开发、DNA测序、新基因的发现、基因诊断等领域的应用进行概述。     

猪增生性肠炎研究进展

猪增生性肠炎是由专性寄生回肠上皮细胞内的劳森氏菌引起猪的接触性肠道病。该文介绍了其病原学、病理变化及实验室诊断等方面的研究进展。     

猪增生性肠炎的PCR诊断

猪增生性肠炎(pcrcine proliferative enteritis,PPE)是由胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)引起的猪的一种传染性肠道疾病,严重危害养猪业的健康发展.胞内劳森菌是专性胞内寄生菌,目前尚无法用常规细菌培养技术培养,鸡胚也不适应其生长,但其可在IEC-18、Int 407、GPC-1652等细胞内生长[1].     

基于钙黄绿素显色的可视化LAMP检测猪流行性腹泻病毒的研究

针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的NP基因设计1套环介导等温扩增(LAMP)引物,在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂代替传统的反应后添加SYBR Green Ⅰ染料,建立了基于钙黄绿素的可视化LAMP检测PEDV的方法。该方法能在65 ℃ 1 h内特异性扩增PEDV,与猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)及大肠杆菌等均无交叉反应,检测下限为3.73 pg/μL,其结果可用肉眼判断,快捷方便。用该方法对龙岩学院动物医学研究所接诊的93份腹泻病例进行检测,结果表明,LAMP方法检测PEDV的阳性率为43.01%(40/93),高于普通PCR的检出率(38.7%,36/93)。本试验建立的可视化LAMP检测方法能用于PED诊断。     

银杏叶超微粉对仔猪肠道菌体外抑菌作用的研究

在制备银杏叶超微粉的基础上,研究其对仔猪肠道菌的体外抑菌作用.结果表明,银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2h后,其水提液中黄酮含量比室温下浸提2h后的高.银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2h或室温浸提2h后,对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、化脓性链球菌和枯草芽孢杆菌都表现出一定的抑菌作用.在相同的作用时间内,银杏叶超微粉的浓度越高,抑菌率越高;同一浓度的银杏叶超微粉作用时间越长,抑菌率也越高.银杏叶超微粉经39℃水浴浸提2h后的抑菌效果好于室温浸提2h后的抑菌效果.