EuFPS基因表达载体构建及对杜仲遗传转化的研究

本实验用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切植物表达载体pSH737和含有目的基因的pUC-FPS,定向连接得到重组质粒pSH-FPS,将其导入农杆菌EHA105。采用农杆菌介导法对杜仲进行遗传转化,研究了卡那霉素(kanamycin,Km)浓度、预培养时间、菌液浓度及侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度、共培养时间等对杜仲遗传转化效率的影响。结果表明,选择无菌苗苗龄15d的杜仲下胚轴,卡那霉素浓度50mg/L,农杆菌浓度OD600值0.3~0.6,侵染时间8min,侵染时菌体重悬液中添加50μmol/L乙酰丁香酮,共培养时间3d,抗性芽的获得率最高。对再生植株进行GUS检测发现有45%的植株呈阳性。     

小油桐外植体的KN1基因遗传转化及其超量表达的转基因植株

本研究采用农杆菌介导法将KN1基因遗传转化小油桐,并获得了转基因植株。在研究中分析了农杆菌菌液菌液的浓度、侵染时间和外植体的大小对遗传转化效率的影响以及KN1基因超量表达对转基因植株再生的影响。研究结果表明：以苗龄15d左右的小油桐无菌苗子叶为外植体,农杆菌菌液浓度OD600为0.6～0.8时,侵染8min,外植体大小为（0.8×0.8）～（1.0×1.0）mm时,遗传转化效果最好;对抗性芽及再生植株进行GUS及PCR检测结果表明,KN1基因已经整合到小油桐植物基因组中。KN1基因的超量表达可提高小油桐再生芽分化,影响转化芽及植株的外观形态及叶片的表型,包括芽及植株矮小,茎杆粗壮;叶片缩小,边缘分裂,对称性丧失,无子叶柄等。     

刺梨花粉管萌发的荧光显微观察

花粉管作为连接柱头与胚囊的唯一结构,是外源DNA导入的通道。因此,必须首先形成花粉管通道,才能进行外源DNA的导入。本研究利用醋酸洋红染色对刺梨雌蕊、雄蕊进行显微观察,并在人工授粉后的0．5h、1h、3h、6h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、24h和30h不同时期取其雌蕊,用苯胺蓝染色后进行荧光显微观察。研究结果初步探明了刺梨人工授粉的最佳时期在花蕾露红期;其花粉管通道从人工授粉后10h左右开始萌发,到18h左右完成萌发,花粉管萌发完成后的2～9h是利用花粉管通道法介导刺梨遗传转化的最佳时期。本研究结果将为花粉管通道法介导刺梨遗传转化技术体系的建立提供基础资料。     

转录组测序分析甘蓝型油菜DW871矮化性状

DW871是一个具有特异株型的甘蓝型油菜矮化品系.为了研究DW871的相关基因及其表达模式,我们以甘蓝型高秆油菜HW871为对照,选取抽薹期茎秆组织进行转录组基因表达分析.结果显示:DW871与HW871之间存在8665个显著差异基因,其中上调基因2582个,下调基因6083个.通过GO富集分析可注释到3个大类共22个...     

植物单宁在反刍动物生产中的应用研究进展

单宁是植物体内重要的次生代谢产物,其极具活性,可与多糖、蛋白质以及金属离子等结合生成不溶于水的复合物,在反刍动物生产中具有特殊抗营养性.除此之外,单宁具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒及抗寄生虫等生物活性,并在反刍动物体内发挥重要的营养生理功能.综述单宁的结构、特性及其在反刍动物生产中的应用现状,为单宁的进一步研究及其在促...     

高羊茅FaGST1基因克隆、亚细胞定位及表达分析

[目的]克隆高羊茅谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因FaGST1,并进行亚细胞定位及表达分析,为深入研究该基因的抗逆分子调控提供理论依据.[方法]采用RT-PCR和RACE从高羊茅黔草1号中克隆FaGST1基因,对其进行生物信息学分析,构建植物融合表达载体pCAMBIA1300-FaGST1-GFP,通过农杆菌介导转入烟草叶片表皮细胞,观察FaGST1基因亚细胞定位情况,并利用实时荧光定量PCR检测高盐、高温、干旱及低氮胁迫处理下高羊茅叶片中该基因的表达情况.[结果]克隆获得FaGST1基因cDNA全长序列为1003 bp,开放阅读框(ORF)为681 bp,编码227个氨基酸残基,其编码蛋白的分子量约25.60 kD,理论等电点(pI)为5.58,亲水指数平均值-0.342,不稳定系数32.96,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核.FaGST1蛋白二级结构中,α-螺旋占50.44%,β-转角占5.75%,无规则卷曲占30.54%,延伸链占13.27%.FaGST1蛋白的保守结构区域为含有G位点的N末端结构域和含有H位点的C末端结构域.FaGST1蛋白与黑麦草GST蛋白(AMY26594.1)的氨基酸序列相似性最高,为93%,其次是海滨雀稗GST蛋白(AMN87043.1),为91%,与玉米(ACG39365.1)和小米(KQK86785.1)GST蛋白氨基酸序列相似性均在80%以上,与系统发育进化树分析结果基本相符,即FaGST1蛋白与黑麦草、海滨雀稗、玉米和小米等禾本科植物GST蛋白亲缘关系较近.高羊茅FaGST1基因在干旱、高温、高盐胁迫和低氮胁迫处理下均出现抑制表达.[结论]FaGST1基因负向调控高羊茅逆境胁迫响应.     

朝仓花椒DIR基因家族的鉴定及分析

本研究通过NCBI的BLAST比对分析,最终从朝仓花椒转录组数据库筛选出28条朝仓花椒Dirigent(DIR)蛋白家族的编码基因序列。利用MEGA、MEME、DNAMAN等软件对该蛋白家族进行生物信息学分析,结果显示:从朝仓花椒转录组中获得的28个DIR基因,经过鉴定,在进化上分为6个小组,每个小组的基因数量分别为7、5、1、0、5、10。该家族的蛋白等电点均小于7,均偏酸性,且多数属于稳定蛋白。多基因序列比对比发现,该家族蛋白均具有一个高保守性的DIR结构域。空间结构的分析预测ZpDIR蛋白多为多链线性折叠卷曲蛋白,且以线性无链非规则多链卷曲蛋白为主。     

隶属函数分析法对25份贵州玉米种质抗旱性评价研究

干旱是制约玉米产量的重要因素之一,通常可引起20%～50%的减产。测定玉米植株抗旱相关指标及综合评价对于筛选抗旱玉米种质具有重要价值。本研究采用盆栽和PEG处理模拟干旱对25份贵州玉米种质三叶期的植株鲜重、叶片相对含水率、根冠比等抗旱指标进行测定,结果表明,金单999的植株鲜重最高,为109.83g,CML 171植株鲜重最低,为32.12g;而金玉818的相对含水量最高,为99.26%,CML 171的相对含水量最低,为22.47%。另外,不同玉米品种的根冠比以黔单16号最大,S 273次之,分别为266.73与251.36,以QB 1013根冠比最小。同时结合隶属函数法对这25种玉米种质的抗旱性进行综合评价,结果表明,金玉818、金单999为抗旱较强的品种;黔单18号、金玉506、金玉819、金玉838、黔526、QB 48、S 611、QB 1018、QB 1013、黄C、QB 516、18599、QB 506、QB 446为中等干旱品种,黔单16号、QB 39、QB 948、QB 191为弱抗旱玉米品种。此外,隶属函数分析表明玉米种质S 273、T 32、CML 171、J 106、QB 662为不抗旱品种。     

低温胁迫下贵州云雾贡茶生长调节剂的变化

以贵州云雾贡茶[Camellia sinensis(L.)Kuntze var.niaowangensis Q.H.Chen]一年生幼苗茶树为试验材料,用酶联免疫法(ELISA)测定不同低温胁迫下茶树叶片生长调节剂含量的变化,以探讨低温胁迫下茶树生长调节剂变化规律。结果显示,1、4℃处理云雾贡茶IAA、GA含量大部分显著低于对照,ABA含量、ABA/GA明显高于对照;10℃处理ABA、IAA、GA含量大部分显著高于对照,ABA/GA与对照无明显变化。随胁迫时间延长,1、4℃处理ABA、IAA含量随时间变化呈先上升后下降的趋势,GA含量呈下降趋势,ABA/GA呈上升趋势;10℃处理ABA和GA含量呈先上升后下降的趋势,IAA含量呈下降趋势。低温条件下,云雾贡茶能提高ABA类生长抑制物质,降低IAA、GA等生长促进类物质,通过调节植物体内生长调节剂平衡来应对低温胁迫。     

对特克斯林场继续实施天保工程的几点思考

特克斯林区是新疆重点国有林区之一,林区成林条件好,森林茂密,巨大的冰雪储备和丰富的降水,使区内发育着以库克苏河为代表的大小众多河流,而森林则调节着河水长流不息。山地森林是本地区生态基础构架的主体,在涵养水源、维护生态平衡中具有不可或缺的作用和地位。