食品和动物性饲料中沙门氏菌PCR检测方法的建立

为建立食品及动物性饲料沙门氏菌的PCR快速检验方法,设计出一对特异性引物,分别对鸡白痢沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌以及多种非沙门氏菌的肠道病原菌进行了PCR扩增。结果,沙门氏菌出现300 bp的条带,其他非沙门氏菌无条带,证明该对引物特异性良好。利用人为污染沙门氏菌的方法,对鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行不同程度地沙门氏菌人为污染,对样品进行适当处理后进行PCR检测。结果,鱼罐头、鱼粉、蛋制品、肉骨粉均能达到理想检测效果,敏感性为10～100 CFU/50 L。利用该方法对商品鱼罐头、蛋制品、鱼粉、肉骨粉进行检测,具有检测速度快、特异性强、敏感性高等优点。     

牛病毒性腹泻BVDV2/JZ05-1活疫苗最小免疫剂量及攻毒保护试验

本试验对牛病毒性腹泻病毒BVDV2/JZ05-1活疫苗对犊牛最小免疫剂量及攻毒保护效果进行了研究。对BVDV2/JZ05-1活疫苗进行倍比稀释后免疫犊牛,在免疫后第28天用BVDV/JL-1强毒株进行攻毒保护试验研究。结果表明,牛病毒性腹泻病毒BVDV2/JZ05-1活疫苗对犊牛的最小免疫剂量是105.0TCID50/mL。     

IL-2Rα结合位点修饰型OviIL-2在毕赤酵母中的表达与鉴定

IL-2主要由激活后的T细胞产生,是一种天然的免疫增强剂,临床应用广泛。之前构建了适用于毕赤酵母表达系统的重组绵羊IL-2的真核表达载体pPIC9K-roIL2。本研究在此基础上使用pPIC9K-roIL2转化毕赤酵母GS115,筛选得到阳性克隆,命名为GS115-roIL2并经过摇瓶培养和诱导表达得到表达产物。通过SDS-PAGE进行初步鉴定,证明成功表达出了roIL-2。本研究为下一步roviIL-2免疫机理研究奠定了基础。     

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定

将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌接种于营养肉汤，40℃培养16～18h，离心，向上清液中加入饱和(NH4)2S04提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳，证明该融合蛋白具有特异性，且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Western blot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。     

CpG基序对坏死梭杆菌免疫原的免疫佐剂效应实验研究

分别用坏死梭杆菌来源CpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝佐剂与坏死梭杆菌免疫原配制的抗原免疫小白鼠,通过检测坏死梭杆菌免疫原抗体变化,来探讨CpG对坏死梭杆菌免疫原的佐剂效应。试验结果表明,坏死梭杆菌来源CpG有较好的免疫佐剂效应,可望进一步研制成为坏死梭杆菌疫苗佐剂成分。     

MSL抗菌肽对绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌细胞膜的损伤作用研究

通过MSL抗菌肽(MSL)对细菌细胞膜的损伤作用研究,确定该抗菌肽的作用靶点。在1×108个/m L的绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌悬液中,分别加入MSL至终浓度为1×MIC,37℃保温孵育,分别于0min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、120min、180min、240min离心收集上清液,检测各时间点蛋白浓度,分析蛋白浓度变化规律;分别在对数生长期的金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌悬液中加入MSL至终浓度为1×MIC,37℃保温孵育60min后,利用透射电镜观察分析细菌结构的变化。结果,MSL与2种细菌接触后均可引发胞液外流;透射电镜观察发现,MSL可造成绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌细胞膜破损,胞浆内电子密度降低,染色质聚集,严重者细胞崩解结构不清,说明MSL对G+和G-细菌细胞膜均可造成损伤,证明细菌细胞膜是MSL作用的靶点之一。     

重组抗菌肽LfcinB/LfampinB基因的克隆及表达载体的构建

根据GeneBank中提供的牛乳铁蛋白基因序列,设计并合成了重组LfcinB/LfampinB基因,并通过PGEM-Teasy载体扩增。酶切回收的LfcinB/LfampinB片段与中间载体pP6连接。pP6上的启动子、信号肽和调控序列与LfcinB/LfampinB共同切下,获得具有上游调控元件的PLfc/Lfa基因片段。将PLfc/Lfa与pME290表达载体连接,并转化绿脓杆菌。结果表明,本试验成功构建了重组pPLfc/Lfa表达载体。     

毕赤酵母表达MSL的发酵条件研究

本试验对含有pPIC9K-MSL转化子的毕赤酵母在BSM基础盐培养基中发酵培养条件进行了研究,并从BSM基础盐培养基组分、补料方式以及诱导时间对酵母生长发酵和表达高浓度的外源蛋白的影响进行了单因素优化试验,得到了毕赤酵母在BSM基础盐中发酵MSL的生产工艺。     

狐狸三聚氰胺和三聚氰酸混合物急性中毒及蓄积毒性

通过口服不同剂量的三聚氰胺和三聚氰酸混合物人工染毒,以雄性狐狸血浆、尿液、肝脏和肾脏中的代谢动力学和组织病理变化为研究指标,考察三聚氰胺和三聚氰酸对狐狸急性中毒及蓄积毒性的影响。结果显示,染毒后的狐狸出现食欲低下、骚动等临床症状,在血浆、尿液、肝脏和肾脏中检测到毒物的残留;同时,病理切片证实,毒物对肝脏血管和肾小球造成病例损伤。     

枯草芽胞杆菌表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原摇瓶发酵条件优化

为了建立枯草芽胞杆菌摇瓶发酵表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原的制备方法,对已构建的含有pNC-HisE-Mtb8.4质粒的分泌表达载体,在枯草杆菌表达系统中进行分泌性表达,采用单因素影响试验方法,在摇瓶水平上进行了表达产量优化。结果表明,各因素的最佳条件是2SY培养基、接种浓度为6%、18h最佳种子阶段,在33℃的培养温度下振荡培养48h,目的蛋白的表达量能够达到750mg/L。该表达条件的确立,为后期生产工艺放大奠定了基础。