氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（CAP－BSA）为包被抗原，氯霉素（CAP）为竞争半抗原，两者与一定量的抗CAP－McAb反应。结果表明，理想的包被抗原质量浓度为1．25mg/L，抗CAP－McAb稀释倍数为1∶12000，酶标二抗稀释倍数为1∶5000，最适检测范围为1－100μg/L，最小检测为0．1μg/L，批内和批间变异系数分别为3．62％和5．19％。得到回归方程（y=1.2730-0.6745x,r^2＝0．9779）和标准曲线，从而建立了快速定量测定CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ciELISA）。     

直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留

采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538,R^2=0．995,IC50为41．7ng／mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81．3％,阴性符合率为83．3％,总符合率为88．9％;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100％。     

鸭传染性浆膜炎的诊断与防治

报道了武汉市郊某鸭场肉鸭暴发鸭传染性浆膜炎的发病情况、临床症状、剖检病变及实验室诊断结果．并提出防治该病的基本措施。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

湖北鸭疫里氏杆菌分离株人工感染试验及灭活疫苗研制

近两年来,湖北省部分地区发生了以雏鸭传染性浆膜炎为主要特征的疾病,经实验室诊断确诊为鸭疫里氏杆菌病。用分离的Ⅰ型鸭疫里氏杆菌菌株(云梦株)进行了人工感染试验,并以此菌株作为种毒,研制了3种含菌量不同的单价灭活水剂苗和1种灭活油剂苗,其平均保护率为54.0％-67.1％。     

逆转录病毒介导的PrV Ea株gD基因转基因细胞系的建立

采用逆转录病毒介导的方法,将PrV Ea株gD基因整合进PK-15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PK^D。通过荧光观察,发现PK^D表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PK^D细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接免疫荧光染色法对PK^D进行检测的结果表明该细胞系具有良好的遗传稳定性。在相同培养条件下,PK^D细胞的生长速度及形态与正常PK-15细胞无明显差异。用脂质体介导的方法,将PrV Ea株基因组转染PK^D细胞,在转染后30h细胞发生典型病变,表明PK^D细胞对脂质体的毒害具有耐受性。TCID50测定结果显示：PK^D对PrV Ea株增殖尽管有明显的抑制作用,但PrV Ea株仍能在其上正常增殖。上述研究结果提示：所构建的细胞系PK^D可用于构建PrV Ea株gD基因缺失毒株,为PrV Ea株gD基因缺失毒株的构建提供了必备的工具。     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定

用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84～96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值.     

海兰褐蛋鸡眼型大肠杆菌病的诊断和防治

通过实验室微生物学鉴定了一起海兰褐育成蛋鸡“瞎眼病” ,结果表明该病为全眼球炎型大肠杆菌病。该菌株血清型为O2 ,经药敏试验 ,筛选出 4种敏感药物 ,经临床紧急治疗 ,病情得到有效控制。     

益生性屎肠球菌HDRsEf1对雏鸡盲肠菌群发育的影响

研究益生性屎肠球菌HDRsEf1株和抗生素对白羽肉雏鸡科宝500盲肠肠道菌群发育情况的影响。采用荧光定量PCR检测方法,确定该株屎肠球菌能在雏鸡盲肠中定植后,选取180只新生1日龄白羽雏鸡科宝500随机分成对照组、益生菌组和抗生素(金霉素)组,分别在7、14、21、28、35、42日龄无菌快速采集盲肠内容物,用RT-PCR法检测盲肠中乳酸杆菌和大肠杆菌的数量,用DGGE技术检测盲肠肠道菌群的变化情况。结果显示,益生菌的添加可以显著降低雏鸡21日龄盲肠大肠杆菌的数量,显著增加42日龄盲肠乳酸杆菌的数量。DGGE结果显示,雏鸡盲肠菌群从7日龄到14日龄为一个过渡期,从14日龄到42日龄为相对稳定期。益生菌和抗生素的添加可以促进肠道菌群在过渡期更有效地完成过渡,在稳定期维持更稳定的状态,而抗生素的添加作用相反。