丁酸梭菌CB1对肉鸡免疫器官指数、黏膜SIgA抗体和血清生化指标的影响

试验选取1日龄Cobb500肉鸡15 000只,随机分为5组,每组3 000只,每组3个重复,试验周期为42d,前期1~21d和后期22~42d。试验分组为基础日粮(A组)、基础日粮+50g/t金霉素(B组)、基础日粮+100g/t丁酸梭菌CB1制剂(C1组)、基础日粮+200g/t丁酸梭菌CB1制剂(C2组)、基础日粮+200g/t丁酸梭菌CB1复合菌制剂(D组),分别在21d和42d时每个重复随机抽取10只鸡进行屠宰取样,测定相关指标。结果显示:丁酸梭菌CB1制剂添加组C1、C2和D组42d法氏囊指数比A组、B组分别提高了347.37%,520%和400%(P0.01),脾脏指数比B组显著提高了61.11%,46.67%和31.11%。C1、C2、D组气管黏膜SIgA水平显著高于A组和B组,C2组、D组肠道黏膜SIgA水平显著高于A组和B组。21d和42d,血糖含量C1、C2、D组与A、B组相比均有所提高,D组显著高于A和B组(P0.05);尿素氮含量C1、C2、D组均低于A组和B组,D组显著低于A和B组(P0.05)。21d,D组总胆固醇、肌酐也显著低于A和B组(P0.05),但42d差异不显著。结果表明:丁酸梭菌CB1及其复合菌制剂能有效促进法氏囊和脾脏的生长发育,对于后期法氏囊的生长维持作用优于抗生素和基础日粮组;能有效刺激肉鸡气管和肠道体黏膜SIgA的分泌;在一定程度上改善了肉鸡血液生化指标,复合菌制剂组在血糖含量、尿素氮指标显著优于抗生素组。     

猪附红细胞体的体外连续培养

临床疑似猪附红细胞体病猪红细胞,经Giemsa染色镜检及PCR扩增,证实感染猪附红细胞体（M．suis）。PCR扩增片段（781hp）与M．suis已知序列（AJ504999）同源性达99．4％。经预试验对红细胞接种量、血清添加量、pH等条件优化后,选用添加新生牛血清、酵母浸出液、葡萄糖等成分的PPLO肉汤,将染虫红细胞接种到细胞培养板上,置于37℃、含5％CO2的培养箱培养,定期更换培养液,约72h后红细胞溶血变为带虫血影（Ghost）。除首次接种外不添加任何红细胞,连续培养达280d以上,染虫率维持近100％。对培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验,证实与接种物为同一病原,并保持有感染阴性红细胞的能力。     

禽流感病毒单克隆抗体的制备及其抗蛋白抗原的分析

以纯化的H9N2亚型禽流感病毒为抗原,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选,获得了8株能稳定分泌抗禽流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。特异性试验证明,8株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水的特异ELISA抗体效价可达1∶3.2×103~1∶5.1×106,其中2株HI效价达212。8株单抗与H5亚型血凝素分型抗原不发生血凝,与减蛋综合征(EDS-76)病毒、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)均不反应。亚类鉴定证实,除1C7单抗为IgG2b外,其他7株均为IgG1亚类。Westernblotting试验分析初步表明,8株单抗至少针对纯化病毒粒子3种不同的蛋白抗原,其中3株针对核蛋白(NP),2株针对基质蛋白M1,2株针对血凝素HA/HA1。对感染细胞的Western blotting分析结果与纯化病毒结果基本一致,其中1株未明显沉淀纯化病毒粒子蛋白的单抗可以与感染细胞的M2蛋白多肽反应。     

地方流行性牛白血病间接gp51-ELISA抗体检测试剂盒的研制

利用重组牛白血病病毒gp51蛋白作为包被抗原研制了gp51-ELISA诊断试剂盒.试剂盒主要成分包括抗原gp51包被96孔板、HRP标记的兔抗牛IgG和牛白血病阴性、阳性标准血清.对试剂盒进行了特异性、灵敏度、重复性及保存期试验.结果表明,试剂盒特异性好,灵敏度是AGlDT的4～8倍,批间和批内的变异系数分别小于10%和15%,于一20℃保存至少能保持6个月检测结果稳定.与法国Synbiotics公司同类试剂盒进行比对试验,诊断敏感性、特异性和符合率分别为75%、96.1%和94.6%.对采集于山东济南的164份奶牛血清和进口澳大利亚奶牛的398份血清进行检测,抗体阳性率分别6.10%和4.77%.     

猪PLEl基因启动子克隆及序列分析

通过巢式PCR方法获得猪PI。E1基因5’端上游启动子序列，通过T／A克隆法对PI。E1基因的启动子进行克隆，并对PCR鉴定为阳性的克隆子进行测序，参考人、啮齿类的羧酸酯酶家族的启动子结构，并利用启动子在线分析软件对其进行生物信息学分析。结果成功克隆得到PI。E1基因5’端上游1153bp的调控片段，分析表明该调控区没有CpG岛，也不存在典型的TATA盒结构；有2个转录起始位点分别位于翻译起始密码子ATG上游-39bp和-37bp处，潜在的转录因子结合位点有C／EBP、Spl、USF、CdxA、GATA-X、GATA-1、GATA-2、GATA-3、MZFl、AML-la、SRY、Nkx-2、LyLl、deltaE等。另外还发现了7种基序分别为EGF-1、INTEGRINBETA、CTCKl、ANA—PHYIJATOXIN-1、THIOLASE-3、TUBUI，IN、VWFC-1。研究结果可为进-步揭示PLEl基因转录调控机制提供理论参考。     

蛋鸡葡萄球菌感染

湖北某养鸡场于 1998年 11月底暴发了一起产蛋鸡葡萄球菌病 ,报告如下。1　发病情况　该养鸡场养有一群海兰褐蛋鸡 5 40 0余只 ,2 30日龄时开始发病 ,每天死亡 1～ 2只 ,产蛋量每天下降 5 kg左右 ,持续了约 10天 ,随后每天产蛋量下降约 30 kg,至发病后 18天 ,产蛋量突然减至 2     

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。     

旋毛虫肌幼虫分泌性蛋白P49基因的克隆与表达

通过设计、合成引物，以旋毛虫RNA为模板，用RT—PCR法扩增出旋毛虫P49序列，并进行了序列测定。将P49基因亚克隆至表达载体pET—28b中，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，作SDS—PAGE及Western blot分析。结果表明，PCR法扩增出P49序列，其大小约为960bp，将构建的重组质粒pGEM—P49进行序列测定表明其与Genbank中的P49序列具有高度的同源性。成功构建了重组表达载体pET—P49；SDS—PAGR及Western blot分析表明，表达产物分子量约为38kDa，约占菌体总蛋白的7％左右，且能被感染旋毛虫猪阳性血清所识别。     

金丝猴源益生粪肠球菌dlt7a的发酵工艺

从神农架金丝猴的粪便中分离出1株益生菌株dlt7a,经鉴定为粪肠球菌。为进一步提高发酵液中dlt7a的活菌数量,对菌株dlt7a的发酵工艺进行优化。通过单因素水平试验,确定dlt7a的最佳培养条件为装液量20%(50mL/250mL),接种量2%,培养基初始pH 6.5。设计Plackett-Burman(PB)试验和响应面试验,找出发酵培养基中影响dlt7a活菌数的主要成分是蔗糖、鱼粉和KH_2PO_4,并优化3种重要成分的含量,确定最优发酵培养基配方为:蔗糖2.55%,鱼粉2.63%,豆粕2.5%,酵母膏0.4%,CaCO_3 1.0%,KCl 0.1%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KH_2PO_4 0.014%。在此条件下培养dlt7a菌株,活菌数可达58.83×108cfu/mL,比优化前提高了46.53%。     

禽流感疫苗免疫和野毒感染的鉴别诊断策略

近年来,用灭活疫苗免疫接种已成为我国控制禽流感的一种主要策略,但免疫禽类不能与自然野毒感染的禽类从血清学水平上进行鉴别,并常导致贸易障碍.为了克服禽流感灭活苗的这种局限性,提出对疫苗免疫和野毒感染禽类鉴别诊断.一是免疫群内安插未免疫过的"哨兵禽",二是采用亚单位疫苗免疫定向检测血凝素蛋白,三是接种疫苗的血凝素与野毒同源而神经氨酸酶为异源,四是检测非结构蛋白(NS1)的血清学反应.文章对上述四种鉴别诊断策略的优缺点进行了评价,为禽流感的控制策略提供一些新的思路.