猪博卡病毒不同基因型三重PCR检测方法的建立及初步应用

为鉴别猪博卡病毒1型、2型和3型3种基因型,根据猪博卡病毒基因序列分别设计3对针对保守区域的引物进行PCR扩增,扩增目的片段大小分别为645 bp(PBoV1型)、352 bp(PBoV2型)和259 bp(PBoV3型)。通过引物浓度和退火温度等条件优化,首次建立了同时检测猪博卡病毒3种基因型的三重PCR方法。所建立的三重PCR方法扩增其他猪病病毒结果均为阴性,最低检测限为8×10-7ng/μL。结果表明,该方法具有较好的特异性和敏感性。对临床样品进行三重PCR和单项PCR检测,对比结果显示符合率为100%。该方法的建立为猪博卡病毒3种不同基因型的鉴别检测提供了有效手段。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因不同编码区的表达和反应原性鉴定

通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒( TGEV) S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 bp)、含D位点的TD片段(441 bp)和含A位点的TA片段(456 bp),经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达,SDS-PAGE电泳显示各片段均高效表达,表达的TCB片段、TD片段和TA片段融合蛋白大小分别为34.6,35.1,36.1 kDa。 Western Blot结果表明,表达蛋白与TGEV感染猪阳性血清和His标签抗体均产生阳性反应。结果显示,3个S基因编码片段均具有与TGEV抗体结合的能力,为进一步鉴定不同编码区的免疫原性及抗原保护能力奠定了基础。     

利用玉米作为生物反应器表达PEDV中和表位抗原蛋白

以玉米为生物反应器,将猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）主要中和抗原表位（core neutralizing epitope, COE）基因导入玉米自交系,获得了高效表达PEDV\|COE的转基因玉米稳定株系。首先,根据玉米密码子的偏好性,设计合成优化的COE编码基因,构建了植物表达载体pBAC9036。然后,利用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71株转化再生植株,进而通过田间草甘膦抗性筛选,获得2个T1代转基因玉米稳定株系。通过PCR、RT\|PCR、间接ELISA和Western blot等鉴定结果显示,COE基因已成功整合到玉米基因组并进行了转录和蛋白表达。并且种子中COE蛋白占可溶性总蛋白的0.122％和0.078％。最后,提取转基因玉米稳定株系的种子可溶性蛋白,与佐剂混合皮下注射免疫小鼠并取可溶性蛋白灌胃免疫小鼠,均可产生针对PEDV抗原的特异性抗体。获得的转基因玉米可有效表达COE蛋白,表达产物具有显著的免疫原性,为进一步研制PEDV\|COE转基因玉米疫苗奠定了基础。     

转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及优化

为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法.对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段.结果显示,LA Taq酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53～55℃时扩增效果较好.分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5％和76.3％.利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中.本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础.     

复合活菌剂对肉用仔鸡生产性能、消化和盲肠菌群的影响

基础日粮中添加１％ Ｋ９４ 复合活菌剂饲喂 １ 日龄ＡＡ 鸡，以添加不含活菌的 Ｋ９４ 辅料为对照，分别于２ 周和４ 周后，测定平均日增重，以及饲料中干物质（ＤＭ ）和粗蛋白质（ＣＰ）消化率，并对盲肠微生物进行计数。结果表明，Ｋ９４ 能明显提高 ＡＡ 肉鸡的生产性能，提高饲料转化率，并在饲喂 ４ 周后使采食量提高；促进ＤＭ 和ＣＰ的消化；同时改变盲肠菌群的比例，使 １～１５ 日龄鸡需氧菌总数和大肠杆菌数量减少，１～１５ 日龄和 １６～３０ 日龄鸡盲肠厌氧菌总数、厌氧乳杆菌、梭状芽胞杆菌以及双歧杆菌数量均增加。     

顺应改革潮流建造一支高水平的兽医官队伍

2004年的7月12日．对中国的兽医界来说．是一个值得载八史册．永远纪念的日子。因为在这一天建国以来首个专门兽医行政管理机梅一兽医局在农业部挂牌成立．贾幼陵先生被任命为首位国家首席兽医师（对外称兽医官)兼兽医局局长。兽医局的成立和首位国家首席兽医师的任命．充分显示了我国政府对兽医工作的高度重视．标志着我国兽医行政管理体制改革迈出了关键的一步．同时也拉开了即将在全国自上而下逐步展开的兽医行政管理体制改革的序幕。     

北京建立官方兽医制度的思考

国务院副总理回良玉说：高致病性禽流感疫情与非典疫情一样，既给中国经济社会发展造成一定损失．也带来一些新的启示和机遇。禽流感疫情的暴发，暴露出中国动物防疫体系还十分薄弱，政府决定制定出台兽医管理体制改革方案，并适当增加防疫经费，同时加快《重大动物疫情应急条例》的协调和修改，建议全国人大常委会修改和完善《中华人民共和国动物防疫法》。     

美国的兽医管理及执业准入制度

众所周知．兽医的主要职责是保护动物和人类的健康。兽医的职业行为主要是诊断、控制和治疗动物疾病、阻止人畜共患病在人类和动物之间的传播．并指导人们正确地关爱宠物．工作动物以及家畜。此外兽医还通过维持食用动物的健康和通过对肉类以及家禽产品的检验来确保食品安全。     

双氯醇胺对山羊胃肠电活动及运动的影响

采用在瘤胃背囊、皱胃幽门部和十二指肠近端安装有双极胃肠电极及应力传感器的土种公山羊5头,按自身对照设计,研究了双氯醇胺对山羊胃肠电活动及运动的影响.结果表明,β-激动剂双氯醇胺在功能上有与肾上腺素相似的作用,即可直接或间接地抑制山羊胃肠道电活动和运动.与对照期相比,给山羊皮下注射双氟醇胺后,其瘤胃背囊、皱胃幽门部及十二指肠近端的快、慢波电位振幅显著降低(P＜0.05),瘤胃运动的应力波值极显著减小(P＜0.01),但快、慢波频率无明显变化.瘤胃运动的应力波值与瘤胃快波电位振幅以及应力波延续时间与快波峰电位数间呈强正相关(R值分别为0.94±0.32和0.85±0.27).体外试验结果亦显示,双氯醇胺可使离体十二指肠段的快、慢波电位振幅减小,张力波值大幅度下降,张力曲线变得平滑.