华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP栽体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区(镇赉县)家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与栽体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库.文库容量为1.5×106pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4～2.0 kb之阀,扩增文库的滴度为1.5×1010pfu/mL.然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0×105个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因.本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据.     

旋毛虫新生幼虫期特异性基因T668主要抗原表位短肽的筛选

为进一步从T668基因编码的蛋白中寻找到敏感性及特异性较高的抗原表位,对T668主要抗原表位区进行抗原表位作图,进一步设计了一套共16条覆盖整个抗原表位决定区的短肽,并与GST融合表达,用Western blot筛选具有高反应原性的短肽。结果显示,N5EM4、N5EM5、N5EM7、N5EM8、N5EM9、N5EM116条融合短肽与感染旋毛虫的猪血清有强阳性反应条带,但均表现出较明显的假阳性。将筛选出的6条短肽人工合成后与牛血清白蛋白偶联,利用Dot blot进一步验证,结果显示融合短肽N5EM11-BSA表现出良好的反应原性和特异性。此抗原短肽的发现对进一步确定T668蛋白虫体定位、功能及旋毛虫病诊断试剂盒的研发奠定了基础。     

我国异尖线虫病研究进展

异尖线虫病呈世界性分布,已成为重要的食源性人兽共患寄生虫病,严重威胁人类的健康,是我国禁止入境的二类寄生虫病。综述了异尖线虫病的病原学、生活史、地理分布、发病机制和临床症状,重点概括了国内海鱼体内异尖属线虫的感染、种类分布和国内尚未出现病例报道的原因,进一步强调异尖线虫病的防控对中国水产养殖业乃至全世界的重要性,并对今后的研究前景进行展望,以期为防控异尖线虫病奠定基础。     

抗犬细小病毒复方制剂的研究

对山茶叶、轮叶党参、卵叶芍药、苦味西葫芦、狼毒大戟 5种中草药的提取物进行体外抗犬细小病毒 (CPV)筛选 ,并对以山茶叶、黄芪等组成的复方进行抗病毒效果评价与药理作用研究。结果表明 ,山茶叶抗CPV作用较强 ,其对CPV的抑制率为 55 2 4 % ;由山茶叶组成复方对CPV的抑制率为 63 0 4 % ,抗病毒效果明显优于单方的山茶叶和药物对照黄连 ;对CPV 50 %抑制浓度 (IC50 )为 1∶587 5 ,提示有较强抗病毒作用。由山茶叶、黄芪等组成的复方药物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用 ,可明显增强机体免疫力。     

丙磺舒对阿莫西林在猪体内的药代动力学影响

本实验采用高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林的浓度,研究了丙磺舒对阿莫西林在健康猪体内药物动力学的影响。结果表明,单剂量肌肉注射阿莫西林后,阿莫西林吸收迅速,药峰时间为(0.19±0.11)h,药物浓度为(7.21±3.27)μg/mL,其动力学模型为一级速率一室模型。使用丙磺舒后,阿莫西林的半衰期由(0.86±0.18)h延长到(2.77±1.02)h(P<0.05),AUC由(12.38±5.69)μg/mL·h增加至(35.24±18.62)μg/mL·h,药峰时间为(0.42±0.32)h,药峰浓度为(6.24±3.43)μg/mL·h。     

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物，用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53cDNA，将其克隆到pMD-18T载体，转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析，结果表明，克隆到1176bp的p53cDNA，共编码391个氨基酸。序列分析表明，p53cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变，二者的同源性为98％，所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98％。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star（DE3），经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实，p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有很好的抗原性。     

苗期高温高湿影响番茄花芽分化进程的机理探讨

以番茄品种“寿和粉冠”为试材，于2020年4−7月在南京信息工程大学农业气象试验站进行气温、空气相对湿度、处理天数的正交试验，气温（昼温/夜温）设4个处理水平：T1(32℃/22℃）、T2(35℃/25℃）、T3（38℃/28℃）和T4（41℃/31℃）；空气湿度设3个处理水平：H1（50%）、H2(70%)和H3（90%），误差范围在±5个百分点；处理天数为2、4、6和8d。以昼温/夜温28℃/18℃、空气相对湿度45%～55%处理为对照（CK）。在番茄花芽分化各个时期分别测量顶芽内源激素、淀粉和可溶性糖含量，在现蕾期测量茎粗、单株干质量、壮苗指数和叶绿素含量，以研究苗期高温高湿影响番茄花芽分化进程的机理。结果表明：（1）随着温度升高，整个花芽分化过程随着温度的升高而延长，而空气相对湿度和处理天数对番茄花芽分化进程影响不大。（2）不同处理下番茄顶芽IAA和GA3含量随着花芽分化出现降—升—降的趋势，ZT和ABA含量出现与IAA完全相反的趋势。IAA、ZT、GA3含量均随着温度、相对湿度和处理天数的增加逐渐降低，ABA含量随着胁迫程度的增加逐渐升高。（3）番茄叶片淀粉和叶绿素含量随花芽分化进程逐渐降低，可溶性糖含量从未分化期到雄蕊分化期逐渐升高，雌蕊分化期间逐渐降低。随着胁迫程度的加深，各处理间差异显著。表明高温高湿对番茄花芽分化的抑制作用可能与内源激素含量变化、营养物质减少有关，花芽分化初期环境温度应控制在CK水平，温度越高越不利于番茄花芽分化。     

草鱼苗种培育

<正>近年来由于水产养殖环境的变化,人工成本、塘租和捕捞成本的逐年提高,养殖利润被层层挤压,养殖户在寻找高利润的养殖品种的同时,基本上把目标都锁定在草鱼这一个品种上。草鱼以其养殖成本低、生长速度快、利润空间大等优点受到养殖户的青睐。但是,在草鱼的苗种培育上出现了许多的问题,不能达到预定的规格,影响了养殖效益。根据这几年的养殖结果来看草鱼苗种的培育应该注意以下几个方面的问题:一、鱼种池的选择鱼种池的大小一般以3~10亩为宜。面积过大,投饵不容易投到池塘的中间,鱼苗就会采食不均匀,而且容易受到大风的影响,伤到鱼苗;拉网操作也不太方便。池塘的深度在2~3米最好,而且水深能够控     

免疫胶体金标记技术及其在植物保护上的应用前景

综述了胶体金制备、质量鉴定方法 ,胶体金探针的制备、纯化方法 ,以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验即免疫层析和免疫渗滤试验技术 ,以及免疫胶体金标记技术在植物保护研究领域中的应用前景。     

棉铃虫取食小麦的生存和营养效应

在观察棉铃虫取食麦穗及其穗序的特点的基础上 ,进一步研究棉铃虫幼虫取食不同生育期麦粒的生长指标及相应饲料的营养物质含量 ,发现低龄幼虫和高龄幼虫对小麦有不同的营养需求 ,食料中的营养物质对棉铃虫幼虫的存活率、体重、生长发育状况亦有不同的影响