改良一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea maysL.）、大豆（Glycine maxL.）、苜蓿（Medicago sativaL.）和黄瓜（Cucumis sativusL.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1基因和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

改良一步法提取植物RNA·DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea mays L.）、大豆（Glycine max L.）、苜蓿（Medicago sativa L.）和黄瓜（Cucumis sativus L.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白质进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

大豆抗SMV生化机制的初步研究

以对ＳＭＶ－ａ株系抗性不同的３个大豆品种为材料,分析了感染ＳＭＶ后苯丙氨酸解氨酶,过氧化物酶,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的动态变化。结果表明,抗病品种科丰１号接种ＳＭＶ的早期,ＰＡＬ和ＰＯＤ活性显著升高,ＳＯＤ和ＣＡＴ活性明显下降,相反感病品种１１３８－２和徐豆１号的ＳＯＤ和ＣＡＴ活性明显上升,ＰＯＤ活性的增加幅度则小于抗病品种,而１１３８－２的ＰＡＬ活性则低于相应对照。     

水稻种胚脂氧合酶-3和耐贮性关系的研究现状与策略

 稻谷贮藏期间脂质的降解是导致其品质下降并产生令人不快气味的主要原因之一。已经发现 ,约占水稻种胚LOX总活性 80 %～ 90 %的脂氧合酶 3(LOX 3)是脂质降解并导致产生令人不快气味的主要关键酶 ,缺失体 (DawDam)的研究还表明 ,其活性缺失可以降低贮藏期间稻谷不饱和脂肪酸的过氧化水平 ,减少包括己醛、戊醛和戊醇等令人不快的陈化气味的累积 ;遗传分析的研究则证实LOX 3的缺失由单隐性基因控制。另一方面 ,从酶学特性来看 ,种胚LOX 3与已纯化的水稻叶片LOX和克隆的 3种水稻叶片Lox的编码蛋白是明显相异的。今后需进一步加强水稻种胚LOX 3缺失对耐贮性影响的研究 ;同时由于仍未克隆到编码稻谷种胚LOX 3的基因 ,更不太清楚其缺失的分子机理 ,而诸如大豆和豌豆等其它粮食作物种子中脂氧合酶缺失的表型则涉及结构基因中编码序列的单碱基颠换以及启动子区域的替代、插入和删除等 ,因此有必要克隆控制水稻种胚LOX 3缺失的隐性基因和相应的显性基因 ,阐明它们基因表达和调控的机制差异 ;最后进一步提出耐贮藏水稻新品种选育的理论和实践概念。     

大豆花叶病毒（SMV）的侵染对大豆叶片过氧化物酶及其同功酶的影响

研究了对ＳＭＶ抗性不同的３个大豆品种在接种ＳＭＶ－ａ株系后叶片过氧化物酶活性及其同功酶的动态变化。结果表明，侵染的早期（接种后３ｄ），抗病品种科丰１号的过氧化物酶活性急剧上升，出现了新的ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶；感病品种徐豆１号和１１３８－２的变化则相对较小。侵染的中后期（接种后６ｄ和９ｄ），感病品种的过氧化物酶活性迅速上升，且徐豆１号也出现了ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶；抗病品种过氧化物酶活性略有下降，ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶消失。ＳＭＶ侵染早期，抗病品种过氧化物酶活性的急剧增加以及ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶的出现可能与抗病性密切相关。     

外源一氧化氮对盐胁迫下水稻根部脂质过氧化的缓解作用

 在100 mmol/L NaCl的胁迫条件下，研究了两种浓度的一氧化氮供体硝普钠（sodium nitroprusside，SNP）处理对水稻幼苗根部脂质过氧化的影响。低浓度（10 μmol/L）的SNP处理明显缓解盐胁迫下水稻幼苗根组织膜脂过氧化产物MDA的累积，显著提高可溶性蛋白含量，并诱导根系APX、POD和SOD活性的上升；而高浓度（50 μmol/L）SNP处理的效果则基本相反。表明外源低浓度NO可以通过提高盐胁迫下水稻幼苗根组织的抗氧化能力来缓解氧化损伤。     

小麦叶片老化期间氨肽酶活力的影响因素

小麦叶片中存在着氨肽酶,用放线菌酮、氯霉素、氨基酸(丝氨酸、半胱氨酸)、激素(6-BA,ABA)及H2O2等处理小麦叶片发现,放线菌酮、6-BA、氯霉素可阻止氨肽酶活力上升;而氨基酸(丝氨酸、半胱氨酸)、ABA及H2O2可加速氨肽酶活力上升。由于放线菌酮是一种蛋白质合成抑制剂,故放线菌酮处理结果表明在叶片老化过程中有氨肽酶的从头合成过程发生。     

棉铃虫中肠钙黏蛋白Cry1A结合区编码基因的原核表达及多克隆抗体制备

通过RT-PCR扩增出棉铃虫中肠钙黏蛋白毒素结合区编码基因片段Cad-tb,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,并在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,获得融合表达的包涵体,经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用ELISA检测其效价。结果显示,以pET-30a-Cad-tb表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导成功获得分子量为37 ku左右的重组蛋白,单抗-His的Western blot鉴定其正确表达。纯化后的蛋白成功免疫新西兰大白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16 000。     

免疫PCR检测技术及其在食品安全领域中的应用

免疫PCR技术是一种在免疫学和PCR技术基础上建立起来的新型检测技术,这种技术同时具有ELISA的高特异性和PCR的高灵敏性。本文介绍了免疫PCR的技术原理和反应体系,比较其不同种类和应用范围,指出免疫PCR存在的问题并提出相应的对策;归纳了目前免疫PCR在食品安全等领域中的应用;并结合免疫PCR技术的优势提出其在食品安全检测中的应用前景。     

胡萝卜素漂白法快速筛选耐储藏水稻品种

根据水稻种胚脂氧合酶的主要同工酶LOX-3的活性缺失可以提高耐贮性的特性,研究了快速测定LOX-3酶活性以筛选耐储藏水稻品种的方法。报道了水稻种胚LOX-3具有共氧化的次生反应特性,并根据该特性建立了快速筛选其缺失体的胡萝卜素漂白法（检测时间为3 h）,优化了反应体系。推测在正常氧压下水稻种胚LOX-1和LOX-2不具备或仅具备相对较弱的共氧化次生反应能力。与LOX-3缺失体的单克隆抗体技术和I2-KI比色法相比,胡萝卜漂白法具有方法简单、成本低、快速的优点。还探讨了胡萝卜素漂白法在耐储藏水稻品种改良和相关分子克隆研究中的应用前景。