草莓脱毒种苗快繁节本技术

近年来浙江省各地在进行种植业结构调整中,草莓种植面积迅速扩大,2004年全省草莓面积达到4.79公顷,总产量9.62万吨,产值达6亿多元.但品种单一化和越来越严重的草莓病毒病,严重制约着产业的发展和农民增产增效.本研究以静冈11号草莓为试材,从降低脱毒种苗快繁生产过程中的快繁术、试管苗驯化的生产成本为重点,研究并建立了一整套脱毒草莓组织培养及种苗产业化生产的技术体系.经3年的生产应用,取得了明显的效益.     

根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草

将抗虫ＰＩ基因构建到ｐＩＧ１２１Ｈｍ质粒的Ｔ－ＤＮＡ上，利用农杆菌ＬＢＡ４４０４介导转化烟草，获再生植株．经ＧＵＳ检测和Ｄｏｔｂｌｏｔ分析，证实外源基因已插入植物细胞基因组中，再生植株的转化率为６４．３％．     

甘蓝型油菜小孢子再生植株染色体倍数检测研究

 采用流式细胞光度法 (FCM )对甘蓝型冬油菜 4个F1代杂种的小孢子再生植株 ,在幼苗期 (取再生株新长出的叶片嫩组织 )进行了染色体倍数检测。其矩形图上清晰地检测出单倍体、二倍体、三倍体和四倍体以及单倍体加二倍体二倍体加四倍体和三倍体加六倍体等嵌合体。小孢子再生植株中 ,单倍体和自发二倍体比率分别为 5 0 %～85 % (平均为 6 0 % )和 2 0 %～ 5 0 % (平均为 35 % )。FCM倍数检测结果与在油菜花蕾期进行的花器形态鉴别相一致。本文还讨论了采用FCM倍数检测的优势及其检测进展。     

油菜素内酯(BR)超敏感嵌合受体的构建和水稻转基因表达

将油菜素内酯(brassinosteroids,BR)超敏感受体激酶基因Sud1与水稻抗病受体激酶基因Xa21经体外点突变后构建了带SUD1 LRR-JM结构域与XA21激酶域 (kinase)的合成受体(chimera)基因SNRG1, 同时构建了SUD1 LRR突变体对照受体基因SNRGmL和XA21 kinase突变体对照受体基因SNRGmK.应用基因枪(particle bombardment)转化技术成功将SNRG1, SNRGmL和SNRGmK导入粳稻模式品种台北309的胚性愈伤组织中,并由此获得了再生植株和细胞株.经PCR、Northern blot 分子检测和表型观察证实外源基因已经转入并整合到水稻基因组.防卫基因表达的结果表明SNRG1可能已在体内微量的BR作用下,激发了水稻的防卫反应.该结果为进一步研究XA21激酶的抗性激发奠定了基础.     

利用菊花B病毒外壳蛋白特异片段进行多克隆抗体的制备与分析

菊花B病毒(CVB)是乙型线状病毒科(Betaflexiviridae)麝香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)成员,在浙江杭白菊基地普遍存在。为了能够特异、快速、简便检测CVB,利用SWISS-MODEL分析CVB外壳蛋白(CP)的三维结构,选择暴露在CVB CP三维空间结构外部的片段,片段之间使用连接肽串联以提高柔性,重复4个片段,根据大肠杆菌密码子的偏爱性将其相应的DNA序列进行优化,将合成的特异DNA序列连接表达载体pET-28a(+),转化至Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了纯化后大小约为14 kDa的融合蛋白;将其作为抗原免疫家兔制备抗血清,纯化获得相应抗体;对获得的抗血清和抗体进行酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白免疫印迹(WB)检测。间接ELISA检测结果表明,512 000倍稀释的抗血清可检测到1 μg抗原。纯化后最终得到浓度为15 mg·mL^-1 的抗体,WB检测结果,1∶1 000稀释后的抗体可检测500 pg抗原,且能够特异性结合CVB CP蛋白。本研究制备的多克隆抗体为检测CVB提供了便利,也为后续CVB检测试纸条的开发提供了技术支撑。     

植物体内西罗血红素的研究进展

植物以硫酸盐和硝酸盐的形式从土壤中吸收硫元素和氮元素,但硫酸盐和硝酸盐皆需要一定的还原反应才能被同化吸收利用。该还原过程的第二步是由亚硝酸盐还原酶（nitrite reductase, NiR）和亚硫酸盐还原酶（sulphite reductase,SiR）催化的,这些酶的结构中都具有一个起关键作用的西罗血红素辅助因子。本文主要介绍生物体内西罗血红素的合成过程及其在硫元素、 铁元素生化反应中的作用。     

Plant Regeneration from Hypocotyl Protoplast of Brassica campestris

以大白菜成青２号为材料,从萌发５天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加８．２％葡萄糖,０．４ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的改良ＫＭ８ｐ液体培养基进行浅层培养．培养１３天后,用含５．２％葡萄糖的ＫＭ８ｐ培养基以１∶１进行稀释．４～６周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约０．４～０．５ｍｍ的愈伤组织经ＭＳ培养基（附加２％蔗糖,０．８％的琼脂,１．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ,０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ）诱导植株分化．５９％的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株．０．８ｍｇ／ＬＩＢＡ和４００ｍｇ／Ｌ的羧苄青霉素对分化再生有促进作用．     

水稻冬闲田栽培元胡试验

采集元胡种植前后水稻冬闲田的土壤样品,采用平板法分离土壤中微生物,rDNA序列分析微生物种类,同时测定土壤中氮、磷、钾、微生物碳氮等含量。结果显示,与水稻收获后翻耕田块相比,种植元胡田块细菌数量显著降低(降低76.9%),放线菌数量显著提高(提高812.2%);种植元胡田块全氮、全磷、全钾、碱解氮和速效钾等含量无显著变化,但显著提升了土壤速效磷、土壤微生物碳氮和土壤微生物熵;冬闲田和种植元胡田块差异不显著。元胡667 m²产量为118 kg,市场价格43元·kg^-1,667 m²效益5 074元。研究表明,水稻+元胡种植模式可作为浙江地区水稻冬闲田的一种新型的栽培模式。     

马铃薯试管苗及微型种薯形成的几个因素研究

以马铃薯东农303(Solanum tuberosum L. Dongnong 303)的茎尖为外植体,研究了灭菌方式对茎尖成活率、BA与2,4-D不同浓度组合对诱导不定芽、光强对微型种薯形成以及催芽方式对发芽率的影响. 结果表明, 70%酒精 30s, 0.1% HgCl2 1 min组合茎尖成活率最高; 2 mg/L 2,4-D和0.4 mg/L BA组合最利于诱导不定芽; 弱光环境有利于试管薯的形成; 试管薯经针刺后浸泡于0.5 mg/L 2,4-D和2 mg/L赤霉素混合液8 h的处理,发芽率最高.     

根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草

将抗虫ＰＩ基因构建到ｐＩＧ１２１Ｈｍ质粒的Ｔ－ＤＮＡ上，利用农杆菌ＬＢＡ４４０４介导转化烟草，获再生植株。经ＧＵＳ检测和Ｄｏｔ ｂｌｏｔ分析，证实外源基因已插入植物细胞基因组中，再生植株的转化率为６４．３％。