植物丛枝症病毒病毒病原研究概况

对引起植物丛枝病害病毒的分类地位、生物学特性、抗原特性、电镜观察和基因组成了综合论述。     

云南省丝核菌种群分类及其分布

 从云南省12个地州的土壤,感病组织上分离到共70个丝核菌株,经与标准菌株配合测定,可划分为12个融合组,其中有8 组已知,它们是AG1-IC,AG4HG-Ⅱ,AG4HG-Ⅰ,AG-6GW,AGB(a),AGBa, AGI-Ⅱ,AGBb,AGK,WAG-E,WAG-O,其中AG6GW属于国内尚未被报道的融合群。昆明地区分布丝核菌菌丝融群最为丰富,在所有11群中占有5群,其它地州分别分布有1-4群。温度梯度测定中,大多数丝核菌的最适生长温度为25～29 ℃。     

玉溪烟叶有机氯、拟除虫菊酯类杀虫剂农药残留分析

建立了一种同时测定烟草中18种有机氯杀虫剂和8种拟除虫菊酯类杀虫剂残留的固相萃取气相色谱分析方法。采用Elite-5MS弹性石英毛细管柱为分离柱,内标法定量。结果表明,样品的加标回收率在83.28%～102.33%,相对标准偏差(RSD)为2.86%～5.44%,并对12个玉溪采集的烟叶样品进行了实际有机氯杀虫剂和拟除虫菊酯类杀虫剂残留的测定,发现样品中未检测到有机氯杀虫剂,只检测到微量拟除虫菊酯类杀虫剂。与各种农药含量限量指标比较,玉溪烟叶达到了无公害烟叶的标准,玉溪地区具有发展无公害优质烟叶的条件。     

侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT-PCR检测

 番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus, TSWV）寄主广泛,危害多种作物,近年发现侵染烟草引起严重经济损失。研究该病毒的分子检测方法,对健康烟草种苗培育和指导病害防控具有重要意义。本文根据 TSWV核壳体蛋白基因(N基因)序列设计引物,用RT PCR方法对采于云南疑似番茄斑萎病毒症状的5个烟草病害标样（102,514,自10,自16,自58）进行检测,PCR产物连接pMD载体并测序。测序结果表明：这5种烟草病害分离物与已报道TSWV N基因核酸序列相似性大于9704%,所编码氨基酸序列的相似性达9767%以上。这说明获得的5种病毒分离物均属于TSWV。本研究建立了侵染云南烟草的番茄斑萎病毒（TSWV）的RT PCR检测方法。     

直丝紫链霉菌A8发酵条件优化、活性成分初步分析及对水稻纹枯病的防效研究

为了获得直丝紫链霉菌Streptomyces rectiviolaceus A8最佳发酵水平，并初步确定其代谢生物活性物质以及对水稻纹枯病的防控效果。本研究通过碳、氮单因素试验，正交试验和发酵条件的优化，确定其最佳的发酵条件；通过气相色谱-质谱技术（GC-MS）对菌株A8产生的活性物质进行初步检测，将鉴定出的不同组分以立枯丝核菌Rhizoctonia solani和蜡状芽胞杆菌Bacillus cereus作为指示菌进行生物活性测定试验；同时在大田开展菌株A8对水稻纹枯病的生防效果研究。结果显示菌株A8的最佳发酵配方为：可溶性淀粉3%，黄豆粉0.6%，酵母膏0.4%，NaCl 0.05%，K₂HPO₄·3H₂O 0.05%，MgSO₄·7H₂O 0.05%，FeSO₄·7H₂O 0.001%；最佳发酵条件：装液量100～200 mL/500 mL，接种量3%～7%，培养温度28℃～31℃，初始pH 7.0～8.0；通过气相色谱-质谱联用技术对菌株A8发酵液粗提物进行了分离和鉴定，共鉴定出26个化合物，其中3-甲基-1，2-环戊二酮、1，2，4，5-四甲基苯和二氢-3-亚甲基-2，5-呋喃二酮对立枯丝核菌的抑菌率达到70%以上，二氢-3-亚甲基-2，5-呋喃二酮、2-呋喃羧酸，酰肼、邻苯二酚和3-甲基-1，2-环戊二酮对蜡状芽胞杆菌的抑菌作用较强，该放线菌具有潜在的同时抑制真菌和细菌的作用，对开发广谱生防制剂提供很好的材料。田间防效试验结果表明，菌株A8对水稻纹枯病有一定的防效，防治效果与枯草芽胞杆菌BT205相当。     

应用分子生物学方法检测植原体研究进展

 从血清学、核酸杂交技术以及PCR技术等方面综述了国内外植原体检测研究的概况及最新进展。     

烟草赤星病菌遗传多样性的ISSR和RAPD标记比较分析

采用ISSR和RAPD 2种分子标记方法对来自不同地区的28份烟草赤星病菌进行遗传多样性分析,筛选后选用10个ISSR引物和10个RAPD引物,ISSR扩增出多态性条带112条,多态性条带百分率为86.82%,菌株间相似性系数为0.53～0.97;RAPD引物扩增出多态性条带70条,多态性条带百分率为81.39%,菌株间相似性系数为0.57～0.94;用SPSS17.0软件对2种标记遗传距离进行相关性分析,发现2种分子标记结果呈显著正相关,表明2种分子标记方法都适合于烟草赤星病菌遗传多样性研究,ISSR是一种多态性优于RAPD的标记技术。根据2种标记的结果,利用NTSYS软件按UPGMA方法进行聚类分析,发现烟草赤星病菌遗传多样性与地理差异没有显著相关性。     

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织,并抽提试验材料的总核酸电泳检测,结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ,切片中未观察到病毒粒子,薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成,直径约１０００～２０００ｎｍ,结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊,直径约１００～２００ｎｍ,结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ）,但因其广泛分布于寄主细胞中,不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征,初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害,发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征,此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅺ病原研究：类病毒问题

 感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体,旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构,但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子,质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定RNA有密切关系,但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征。     

云南烟草丛枝症病害的超微细胞病变研究

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测。病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA，切片中未观察到病毒粒子和植原体等病原，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体和细胞质泡囊，质膜体(1000～2000nm)结构类似于病毒形成的旁壁体。细胞质泡囊(100-200nm)是含纤维状物的双膜的囊。运用不同盐浓度介质的RNase处理病变细胞组织，发现高盐介质的Rnase(2XSSX)不能消解小囊泡中的纤维状物，而低盐介质的Rnase(O．01XSSC)可以消解小囊泡中的纤维状物。文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为这是云南烟草丛枝症病害发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征。