沉默囊泡分选蛋白(VPS)对辣椒疫霉效应因子RxLR504功能的影响

辣椒疫霉(Phytophthora capsici)是一种重要的病原卵菌,能产生大量的RxLR效应分子帮助病原菌定殖。前期实验证明RxLR504效应分子能够抑制INF1引发的细胞死亡,并证实囊泡分选蛋白(VPS)与其相互作用。本文借助VIGS tool在线工具设计靶标基因沉默片段;利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟靶标基因;提取沉默样品叶片组织RNA,构建c DNA文库;利用qRT-PCR检测靶标基因表达水平;在沉默植株叶片上表达RxLR504,24 h后接种INF1,观察病斑症状。结果表明:本氏烟中设计沉默片段长度为300 bp,构建c DNA文库质量较高;荧光定量PCR结果显示,沉默植株中靶标基因表达水平下降86.2%,与对照相比差异性显著;接种实验证明RxLR504在沉默植株与对照植株上均能抑制INF1引发的细胞死亡。RxLR504与VPS互作不影响其抑制INF1引起的细胞坏死,为进一步揭示病原物利用植物靶标基因抑制植物免疫从而促进自身寄生的机制打下基础。     

瞬时沉默乙醛脱氢酶对辣椒疫霉效应因子RxLR129113功能的影响

辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)产生的效应因子RxLR129113在本氏烟上的功能之一是抑制BAX引起的细胞坏死,而且已经证实乙醛脱氢酶(ALDH)是RxLR129113的互作蛋白。为了探究乙醛脱氢酶(ALDH)是否影响Rx LR129113抑制BAX引起的细胞坏死,本研究利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,克隆了乙醛脱氢酶(ALDH)基因片段,插入到烟草脆裂病毒载体(TRV)中,构建了pTRV-ALDH的VIGS载体,转入农杆菌侵染本氏烟后qrt-PCR验证成功沉默了ALDH基因。在沉默ALDH基因的本氏烟上瞬时表达RxLR129113,24 h接种BAX。结果表明,在NbALDH沉默植株上,RxLR129113仍然抑制BAX引起的细胞坏死。本研究结果表明RxLR129113与ALDH互作不影响其抑制BAX引起的细胞坏死,为进一步深入开展辣椒疫霉效应因子RxLR129113功能机制研究奠定了基础。     

设施黄瓜霜霉病绿色防控技术

@@设施黄瓜霜霉病绿色防控技术的核心是通过使用新型涂覆棚膜改善设施生态环境，黄瓜幼苗移栽穴施毛壳菌肥，增强黄瓜根系而培育壮苗，适时喷施新型低毒、低残留杀菌剂，遏制黄瓜霜霉病菌的繁殖与生长，明显减少了用药次数与使用量，有效控制了黄瓜霜霉病发生与危害，并且其他叶部病害也被有效遏制。综合集成单项防控技术，防效达85%以上，产量增加20%以上，减少农药用量50%以上。该技术适用于北方地区设施黄瓜生产（图1）。     

致病性和非致病性辣椒疫霉菌群体的遗传多样性

从辣椒疫病病土和病株上分离鉴定辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）,得到11个致病性和11个非致病性菌株。利用RAPD分子标记对其遗传多样性进行分析,结果表明受试致病性和非致病性辣椒疫霉菌株分别聚为1个组,但其中3个非致病性菌株与致病性菌株聚为1个组。ITS序列分析发现,受试致病性和非致病性辣椒疫霉菌株分别聚为1个组,但是非致病性辣椒疫霉菌的遗传多样性比致病性的高,这说明致病性菌株可能是单系群起源。此外,在辣椒疫霉菌的遗传表型和地理来源方面,致病性和非致病性辣椒疫霉菌之间不存在任何关系,这表明辣椒疫霉菌的起源并不单独依赖其地理来源。     

山东小麦纹枯病菌致病性与遗传分化关系的研究

 对山东麦区被鉴定为双核丝核菌的35个菌株进行致病性测定的基础上,选用15个随机引物对上述菌株进行了RAPD分析,共标记出171条DNA片段,其中多态性片段161个,多态率为94.15%。用UPGMA法构建系统树,以遗传距离0.33为阈值,被鉴定为AG-D融合群的33个菌株隶属于同一个RAPD组,而3个未定融合群菌株(WK-6、WK-37和WK-13)均为独立的RAPD组。以遗传距离0.25为阈值,将属于同一个融合群的33个AG-D群菌株划分为7个亚组,说明受试小麦纹枯病菌株间存在丰富的遗传多样性。综合分析受试菌株的致病力测定结果与RAPD分析发现,供试菌株的RAPD组与菌株致病力的强弱无明显的相关性,但少数菌株的致病力强弱与亚RAPD组有一定的相关性。     

中国不同地区烟草寄生疫霉(Phytophthora parasitica var. nicotianae)菌株的随即多态性DNA扩增分析

来自中国云南、辽宁、山东3省的烟草寄生疫霉（Phytophthora parasitica var.nicotianae)菌株的致病性已被划分为3种致病类型组，即强致病性组、中致病性组和弱致性组。上述省是中国的烟草主产区，选自云南省的15个烟草寄生疫霉菌株、山东省的13个烟草寄生霉菌株和辽宁省的20个烟草寄生疫霉菌株，选择3个烟草栽培品种在温室内进行接种试验测定不同菌株的致病性分化。提取受试菌株的DNA，利用PCR技术对受试苗菌株的模板DNA进行随机多态性扩增分析，对扩增DNA片段谱带借助于UPGMA分析法构建遗传树，结果表明，受试菌株被划分为4个遗传聚类组，每个遗传聚类组内包括不同的烟草寄生疫霉致病性菌株，而且来自于不同烟区相同的致病性菌株和每种致病性的不同菌株皆不属于同一个遗传聚类组内。结果表明RAPD－PCR的遗传标记分析结果与不同致病性组的划分未有明显的区别。因此，随机多态性DNA图谱的相同与不同不能当作区分来自不同烟区的烟草寄生疫霉的致病性分化的分子检测的工具。     

植物抗真菌基因工程研究进展

近几年来，由于分子生物学和生物工程技术的迅速发展，尤其是重组DNA技术的发展，开辟了植物抗病育种的新途径。植物抗病机制的分子生物学和抗病基因工程的研究有了许多新的突破。本文重点综述近几年来国内外科学家在抗真菌基因工程研究方面所进行的探索。     

国家大宗蔬菜产业技术体系研究成果介绍（二）——设施黄瓜霜霉病绿色防控技术

设施黄瓜霜霉病绿色防控技术的核心是通过使用新型涂覆棚膜改善设施生态环境,黄瓜幼苗移栽穴施毛壳菌肥,增强黄瓜根系而培育壮苗,适时喷施新型低毒、低残留杀菌剂,遏制黄瓜霜霉病菌的繁殖与生长,明显减少了用药次数与使用量,有效控制了黄瓜霜霉病发生与危害,并且其他叶部病害也被有效遏制。综合集成单项防控技术,防效达85% 以上,产量增加20% 以上,减少农药用量50% 以上。该技术适用于北方地区设施黄瓜生产。     

马铃薯无性系对晚疫病的抗病性配合力分析

本文按16X3双因数交叉式遗传设计配置的48个单交种为材料，连续2年在云南农业大学试验农场进行了家系的抗病性评价试验，试验采用随机区组，4次重复；抗病性采用Jan W.Henfling的方法计算发病叶面积，并进行了配合力分析。结果表明：（1）马铃薯对晚疫病的抗病性主要由本决定。（2）一般配合力对于马铃薯抗晚疫病更为重要。（3）母本393085．5、391002．15、391002．6、391004．4号具有较高的一般配合力，父本一般配合力不高。（4）母本39328058号与父本392639．8具有较高的特殊配合力。本研究结果为抗晚疫病的亲本选配提供了重要依据。     

拮抗真菌HTC的鉴定及其对辣椒疫病的生物防治潜力

为明确拮抗真菌HTC对辣椒疫霉Phytophthora capsici的拮抗机制,采用平板对峙、形态学鉴定和18S rDNA序列比对分析等方法对菌株HTC进行了鉴定,并研究其发酵液与抗生物质粗提液对辣椒疫霉不同发育阶段的影响。经鉴定,菌株HTC为金色毛壳菌Chaetomium aureum。在平皿对峙试验中,菌株HTC的红色分泌物能抑制辣椒疫霉菌丝的生长,抑制率为59.1%,后期HTC菌丝可缠绕并降解辣椒疫霉菌丝。发酵液与抗生物质粗提液对辣椒疫霉不同发育阶段均有抑制作用,发酵液对辣椒疫霉菌丝生长的抑制率高达97.58%,对辣椒疫病的防治效果均高于70%。浇灌发酵液后,可提高辣椒苗的苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶的活性,并明显促进辣椒苗生长,鲜重和干重增加32.27%和18.09%。研究表明,金色毛壳菌菌株HTC是一株具有开发潜力的生防菌株。