红螯螯虾主要病害的研究进展

红螯螯虾(Cherax quadricarinatus )属甲壳纲、十足目、长尾亚目、拟螯虾科、光壳虾属,原产地澳大利亚,具有个体大、生长快、食性杂、易饲养等养殖优势;同时,因其肉味鲜美、富含低胆固醇蛋白质,是目前世界上较名贵的淡水经济虾之一.目前,美国、拉丁美洲、西班牙、南非、东南亚、中国等许多国家引进了此虾,进行工厂化育苗及养殖.我国于1992年引入该种,先后在广东、湖北、福建、江苏、山东、北京等地试养,取得了初步的成功,并在繁殖生物学、自然水温育苗、室内工厂化育苗等方面进行了研究.但随着红螯螯虾养殖业的发展,疾病也逐渐增多.笔者就国内外近几年对红螯螯虾病害方面的研究情况进行概述.     

抗水霉菌药物的筛选·研制及其防治作用

[目的]筛选出具有较强抑制真菌作用的药物。[方法]以水霉菌FD07为供试菌,测定了24种中药及化药对水霉菌生长的抑制作用,并测定了复方抗真菌药物对鱼受精卵孵化率的影响和对鱼的急性毒性,同时测定了复方抗真菌药对真菌病的防治效果。[结果]五倍子和CuSO4的抑菌效果最为理想。1.0 mg/L复方抗真菌药AF001对真菌的抑制率达100%,对鱼卵的96 h LD50为30 mg/L,安全浓度为3 mg/L。1.0 mg/L复方抗真菌药AF001对鱼的96 h LD50大于100 mg/L,安全浓度大于10 mg/L。1.0 mg/L药物对真菌的预防保护率为71.43%,治疗保护率为67.9%。[结论]该药可用于鱼或鱼卵真菌病的防治。     

网箱养殖大黄鱼假单胞菌病病原的分离与鉴定

浙江宁波、台州等地相继发生网箱养殖大黄鱼的大量死亡,主要症状为脾脏、肾脏有许多白色结节,大小为0.1～1mm。从病鱼体内分离出致病力极强的菌株GYCWS,人工感染试验证实为大黄鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)为8.5×104CFU/ml。对该细菌进行了形态、生理生化特性的测定,并进行了全自动微生物分析系统(ID32GN)及16S rRNA分子鉴定。经PCR扩增获得了大小约1.5Kb的16S rRNA部分基因片段,产物经回收纯化,克隆到pMD18-T载体,转化大肠杆菌TG1,对阳性克隆子进行酶切及PCR鉴定确认阳性重组质粒,将测定的序列递交NCBI进行BLAST同源序列比对,与恶臭假单胞菌的16S rRNA基因(DQ201403、AY785244)具有较高的同源性(99%),该序列在Genbank上的登录号为DQ648602。结合细菌的生理生化特性,GYCWS菌株属于恶臭假单胞菌(Pseudo monas putida)。药敏试验结果表明,病原菌GYCWS对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、氟派酸、四环素、链霉素药物敏感。     

富硒女贞子对乳腺上皮细胞增殖活性的影响

以富硒女贞子水煎液及其主要成分蛋白质、齐墩果酸、多糖为试验材料,探究其对体外培养的乳腺上皮细胞增殖活性的影响。采用MTT法测定富硒女贞子水煎液及其主要成分适宜乳腺上皮细胞生长的安全浓度,并测定在安全浓度下分别作用12、24、36、48 h各药物对乳腺上皮细胞增殖的影响。结果表明,富硒女贞子水煎液、蛋白质及齐墩果酸对乳腺上皮细胞的增殖活性均有显著促进作用(P0.05),且效果明显优于普通女贞子;富硒女贞子多糖并没有表现出促进乳腺细胞增殖的作用,且当浓度达到20μg/m L时对细胞的生长呈抑制作用。     

哈维氏弧菌灭活疫苗在养殖大黄鱼中的应用与评价

将分离自大黄鱼Pseudosciaena crocea的病原菌GYC1108-1,在体积分数为0.5%的福尔马林溶液中灭活24 h,制成灭活全菌苗（细菌含量为6×109cfu/mL）;用该灭活菌苗分别免疫小白鼠和大黄鱼,并检测小白鼠和大黄鱼血清中抗体效价及疫苗对鱼体的免疫保护力。结果表明：小白鼠经注射疫苗后28 d,血清中抗体效价最高达1∶4 000,大黄鱼经注射和浸泡免疫后,血清中最高抗体效价分别为1∶1 280和1∶320,免疫保护率分别为75%和65%;抗GYC1108-1的抗体与不同种属细菌间存在着交叉反应,其分类地位越近,交叉反应也越大;用研制的疫苗开展大黄鱼生产性免疫预防试验,受免疫组鱼存活率有较大提高,分别为85%和86%,而未免疫组鱼存活率仅有70%,表明疫苗可有效防治养殖大黄鱼细菌性病害。     

不同免疫增强剂对青虾免疫功能影响的研究

以添加不同量银耳菌丝体多糖(0.1%、0.12%、0.15%),酵母细胞壁多糖(0.005%、0.01%、0.02%),黄芩苷(0.01%、0.02%、0.04%)的饲料投喂初体质量为0.227g±0.017g的青虾60d,研究其对青虾的生长及免疫因子的影响。各组青虾肝胰脏中SOD活力均被抑制。与对照组相比,0.1%添加量的银耳菌丝体多糖对青虾肝胰脏中的ACP活力的提高最明显;0.02%添加量的酵母细胞壁多糖组对虾肝胰脏中的AKP活力的提高最明显;0.005%添加量的酵母细胞壁多糖组对虾肝胰脏中的POD活力的提高最明显;银耳菌丝体多糖和酵母细胞壁多糖各添加量组对青虾生长有明显提高。实验结果表明,添加适当剂量的银耳菌丝体多糖和酵母细胞壁多糖可以促进青虾的生长及增强青虾的免疫能力。     

抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.     

免疫增强剂对中华绒螯蟹免疫功能的影响

用3种不同免疫增强剂多糖(laminarin)、灭活细菌苗、壳聚多糖(chitosan)注射(分别为A、B、C组,对照为D组)和添加饵料饲喂中华绒螯蟹(多糖为E组,灭活细菌苗为F组,壳聚多糖为G组,对照为H组),在不同时间取样测定中华绒螯蟹血清中非特异性免疫指标的变化及中华绒螯蟹的免疫保护率.结果表明:注射后48 h, A、B、C组中华绒螯蟹血清中溶菌酶活力分别为0.185,0.234,0.233,对照组为0.094,经t检验,差异不显著;超氧化物歧化酶(SOD)的活力分别为283.2,263.5,289.8,对照组为120.15,经t检验,A、B组血清中SOD活力差异极显著,C组差异显著.口服免疫增强剂后第9天,血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶(SOD)的活力明显高于对照组,经t检验,各组血清中溶菌酶活力与对照相比,差异极显著;SOD的活力与对照相比,E组差异极显著,F、G组差异显著.注射免疫增强剂组蟹的免疫保护率达75%,而口服免疫增强剂组与对照组相比较,蟹的免疫保护率没有明显的差异.壳聚糖经生产性试用,能较好地预防病害的发生,中华绒螯蟹成活率比对照组提高10%以上.     

罗氏沼虾诺达病毒TAS-ELISA检测法的建立及应用研究

罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases of Macrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1:50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000-2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践.     

嗜水气单胞菌BSK－10株的优化培养条件研究

用正交试验研究了嗜水气单胞菌BSK－10株的优化培养条件。结果表明：葡萄糖、甘油对BSK－10株有显著的促生长作用;各种无机离子中,HPO4^2-,Fe^2 ,Ca^2 ,(NH4)2SO4,Mg^2 ,Zn^2 ,Mn^2 对BSK^-10生长有显著促进作用,而Cu^2 ,Co^2 则表现为抑制作用;Na2HPO4与各种离子间存在交互作用,Fe^2 ,Mg^2 ,Zn^2 ,Mn^2 的促生长作用在Na2HPO4的存在时表现得极为明显,而（NH4）2SO4,Mn^2 在Na2HPO4存在时有轻微抑制作用;葡萄糖对不同来源的鱼类嗜水气单胞菌致菌株有不同的效应。BSK－10的生长动态研究表明,不同温度下BSK－10株达到对数生长及最大菌量的时间不同,以30℃为最佳。