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应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌 总被引:5,自引:0,他引:5
根据产vero毒素大肠杆菌(VTEC)产生的vero毒素1(VT1)和vero毒素2(VT2)的基因序列,合成了2对寡核苷酸引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增方法。共对4株产vero毒素大肠杆菌和其他7个属的41株肠道致病菌中的VT基因进行了检测,结果仅从用传统组织培养方法确定为VT阳性的产vero毒素大肠杆菌和痢疾1型志贺氏菌提取的DNA中观察到了PCR扩增产物,而从其他肠道致病菌提取的模板DNA中未扩增出任何DNA片段。用这2对引物可以清楚地区分产VT1、VT2或VT1/VT2的大肠杆菌。PCR扩增方法的检测敏感性为320pg全细菌DNA,用vt1引物可以检测出低达32pg的全细菌DNA。 相似文献
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本研究应用女贞子多糖给小鼠饮水,探讨其对四氯化碳诱导肝损伤的保护作用。试验分为对照组、模型组、女贞子多糖高、中、低剂量组和阳性药组,通过检测各组小鼠的生长性能、肝脏指数、血清生化指标和丙二醛(MDA)的表达量,综合评估女贞子多糖的保肝作用。结果表明:与模型组相比较,饮水中添加不同剂量的女贞子多糖对小鼠生长性能无影响(P>0.05),但可以显著缓解四氯化碳所致的肝脏指数(P<0.05)、肝功能指标(P<0.05)和肝脏血清MDA含量(P<0.05)。饮水中添加女贞子多糖可以有效缓解小鼠化学性肝损伤,这可能与调节肝脏MDA的表达,抑制脂质过氧化反应有关。 相似文献
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大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据大肠杆菌0157z4182基因设计1对引物,并在其5'端分别加入NcoI、XhoI酶切位点,用聚合酶链反应(PCR)从本试验用的大肠杆菌O157及1株产志贺毒素大肠杆菌(STEC)08、1株肠道聚集粘附大肠杆菌(EAggEC)和1株产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌株中也扩增出了803BP的DNA片段。以大肠杆菌0157菌株94H的DNA为模板,用上述引物做PCR,将其产物连接到载体质粒pET28a( ),然后转化到宿主菌大肠杆菌LE392,从该菌中提取重组质粒,再将其转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),用PCR,限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定,表明Z4182基因定向克隆到了载体质粒Pet28a( )。将转化子培养并经IPTG诱导后,做SDS-PAGE电泳,表明该菌株可以表达Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌O157Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。 相似文献
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将人工污染产ST大肠杆菌的鲜猪肉、鸡蛋和牛乳稀释液接种到铺在LB琼脂表面的硝酸纤维素膜上,经37℃6~10h培养和严格的去蛋白和RNA处理后,用生物素标记的编码大肠杆菌耐热肠毒素的DNA片段作为基因探针,检测了污染食品中的产ST大肠杆菌.本法具有高度特异性,其敏感性为100个细菌/g. 相似文献
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提取鼠伤寒沙门氏菌23566的染色体DNA,然后用核酸内切酶BamHⅠ或HindⅢ进行消化。将消化产物连接到质粒载体pBR325中,并转化大肠杆菌宿主HB101,最终获得51个重组克隆株。通过杂交试验表明,重组质粒pLS 2和pLS 3中的嵌入片段(分别约为3.0 kb和3.4 kb)能分别与被试验的33群72种146株沙门氏菌中的143株和144株发生杂交反应,而不与试验的51株肠道非沙门氏菌杂交。用这两个探针检测从临床和食品中新分离的29株沙门氏菌,均发生了阳性杂交反应;而与分离的19株非沙门氏菌未发生杂交反应。 相似文献
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用碱变性法提取重组质粒pEWD299,经Hind Ⅲ酶切后,进行琼脂糖凝胶电泳,用电洗脱法回收LT基因850bp的核酸片段,再用二步法缺口翻译反应制备生物素标记的LT基因探针.通过菌落杂交试验表明,在严格去蛋白和RNA的条件下,该探针与试验中所有产LT和ST,或仅产LT的ETEC发生杂交反应;而与所有仅产ST的ETEC、侵袭性大肠杆菌(EIEC)、普通大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结肠耶尔森氏菌、霍乱弧菌均无杂交反应.其检测提纯的LT—DNA的敏感性水平为25pg,检测食品模拟标本中产LT大肠杆菌的敏感性达到130个细菌/g的水平. 相似文献
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片球菌素基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从乳酸片球菌中提取质粒DNA作为模板,根据GeneBank公布的细菌素结构基因,设计一对特异性引物,进行PCR扩增片段,将该片段定向克隆到pTA2载体,测序,与发表的基因序列比较,同源性为100%,然后克隆到表达载体Pet-28a,转化到Escherichia coli DH5α,经过卡那霉素平皿筛选,质粒酶切,PCR两步验证,获得阳性重组质粒,并转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳,显示在4 600 Da处出现条带,与已报道的细菌素分子量大小符合.表达产物对单核细胞增多症李氏杆菌有抗菌作用. 相似文献