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根据已发表的拟南芥基因组序列设计合成1对引物,以拟南芥基因组DNA为模板克隆AtNUDT2上游非编码区,并将其与pBAR-GUS3相连,构建了植物表达载体pNUD12P-GUS,采用以农杆菌GV3101介导的渗透法转化野生型拟南芥,通过除草剂筛选获得了一批抗性纯合子转基因植株。然后对转基因植株(2周幼苗)进行GUS活性的组织化学染色分析,并对3.5~4周的转基因植株叶片进行病原菌诱导表达分析。结果表明,已获得AtNUDT2启动子,且该启动子为组成型表达启动子;病原菌Pst.DC3000及风t.DC3000 AvrB对该启动子没有诱导作用。 相似文献
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[目的]对橡胶树不同品系橡胶粒子蛋白进行比较研究。[方法]以11个橡胶树品系为试材,采用不同离心速度分级分离方法,获得不同直径大小的纯化橡胶粒子,分别洗脱其膜蛋白并作电泳SDS-PAGE分析,并比较了高产品系和低产品系胶乳中的大橡胶粒子膜蛋白质谱。[结果]14.5、24.02、7.0、32.0、34.0和49.0 kD等蛋白条带的含量在不同直径大小的橡胶粒子上有明显变化,其中14.5 kD蛋白是橡胶延长因子,24.0 kD蛋白是小橡胶粒子蛋白。橡胶树各个品系具有各自独立的特征蛋白谱带,主要表现为在品系之间存在某些谱带表达量上的差异,其中27.0 kD橡胶粒子膜蛋白在耐乙稀利刺激的PR107中的丰度要显著高于不耐乙稀利刺激的海垦1号。[结论]橡胶粒子膜表面的一些蛋白条带可能跟橡胶粒子直径大小或发育相关。 相似文献
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以文心兰根尖为材料,采用常规制片法,对染色体制片的取样时间、预处理液、固定液、解离时间、染色液及染色时间进行了研究。结果表明:文心兰组织培养苗培养温度为25℃;适宜的取样时间为5~6月的上午10:00;材料放入1g·L^–1的秋水仙素+0.002mol·L^–1的8-羟基喹啉混合液中室温预处理4h的效果最好,用卡诺氏液固定12~24h,可获得较多的细胞分裂相,1mol·L^–1的盐酸60℃水浴锅中恒温解离8min的效果较好,用改良的苯酚品红染色制片效果最好。 相似文献
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橡胶延长因子基因的原核表达及其多克隆抗体的制备(英文) 总被引:6,自引:1,他引:5
[Objective] The aim of this study was to prepare the recombination protein of rubber elongation factor and its polyclonal antibodies.[Method] The encoding gene of rubber elongation factor(REF)was amplified by RT-PCR,and cloned into the prokaryotic expression vector pDEST17 to transform into Escherichia coil BI2I-AI.The recombinant protein induced by L-Arabinose was purified by the affinity chromatography.As the immunogen,the recombination protein was used to immunize mice for preparing polyclonal antibodies,while ELISA and Western blot hybridization were used to detect the titers and specificity.[Result] The purified recombination protein of REF with high expression was used to immunize house mice for preparing polyclonal antibodies with high titer and specificity.The western blot hybridization showed that the antibody could recognize the natural REF from latex.[Conclusion] The recombination protein of REF was successfully obtained and the mouse anti REF antibody with high titer and specificity was prepared,which lays a basis for further studies on biological functions of rubber elongation factor and other membrane proteins in rubber particles. 相似文献
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橡胶延长因子是一种在胶乳中与橡胶粒子紧密结合的蛋白,约占整个胶乳中总蛋白的10%~60%。它是异戊二烯转移酶催化多聚异戊二烯单元添加到橡胶分子上必不可少的成分,在橡胶分子聚合中起着重要作用。从胶乳中克隆的编码橡胶延长因子的cDNA与从叶片中分离的编码橡胶延长因子的cDNA在序列上完全一致。 相似文献
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番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。 相似文献