PAS-ELISA检测GFLV和GLRaV-3技术的研究

以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究。从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检测部位对结果的影响,建立了一套完整的ELISA检测GFLV和GLRaV-3程序;通过试验分析,该方法快速,简便,经济且灵敏度高,不失为葡萄病毒检测的一种新方法。通过检测,还了解到GFLV的发病高峰在春季,主要发病部位在上部叶片,而GLRaV-3的发病高峰在秋季,重要发病部位在下部叶片。     

IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的研究

结合ELISA和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的特点,引入了另外一种方法,即免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)对葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了检测。从免疫捕捉病毒、释放RNA到反转录成cDNA,最后扩增出了约300bp的预期目的片段。为了进一步明确PCR扩增的特异性,将PCR产物连接到pGEM-T载体上,转化大肠杆菌E.coliJM109菌株,通过蓝白斑筛选,获得重组质粒,提取质粒DNA,经酶切对重组质粒进行鉴定,结果得到了含有目的片段的重组质粒。由此证明,IC-RT-PCR检测GLRaV-3结果准确可靠。最重要的是它弥补了ELISA易出现假阴性、假阳性以及RT-PCR提取RNA难等的缺点,不失为病毒检测的新型方法。     

人工接种法鉴定评价西瓜枯萎病抗性新品种

西瓜枯萎病是西瓜产业中最为重要的土传病害之一，利用抗病品种仍然是最理想的防治途径，然而新培育的抗病品种引入其他地区后抗性容易丧失，因此了解新品种抗性特点有助于品种推广应用。本试验通过菌土接种法鉴定了8 个西瓜品种对枯萎病生理小种1 的抗性，并利用分子标记进行验证。结果显示，6 个供试西瓜新品种表现为中抗，与分子标记检测结果一致。其中申选958、申蜜968 和申蜜6 号在3 次不同时间的重复试验中抗性表现差异较大，表明其抗性对环境因子尤其是温度和湿度较敏感。申抗988 与申选958 具有相同的抗病亲本，且分子标记检测基因型一致，但在相同环境条件下二者抗性表现差异也较大，表明由于亲本材料不同，品种间可能存在不同的微效基因或基因互作方式。     

西瓜部分品种抗枯萎病特性在F_1代中遗传表现的初步探讨

<正> 西瓜枯萎病在世界各国均有发生,轻则使西瓜减产,重则绝收。致病的尖孢镰刀菌(Fusarium oxyspoyum f.sp.niveum)在土壤中可存活5～6年之久。其化学防治工作尚处于试验研究阶段,目前采用的防治对策多为轮作,在我国人多地少,适合种瓜的地区和土质又有一定限制,且近年来农村经济发展迅速,西瓜面积逐渐扩大,使重茬增多,病害加重,西瓜镰刀菌枯萎病已成为西瓜生产的主要障碍之一。为了获得高产且无药剂污染的西瓜,选育抗病品种已成为当前急需解决的问题。为此必须摸清西瓜抗枯萎病的遗传规律。世界上对西瓜抗枯萎病的遗传规律报道     

西瓜辐射诱变获无杈、轻抗枯萎病新种质

辐射诱变是西瓜育种方法之一。在本试验中用６０Ｃｏγ照射西瓜种子，适宜的剂量为３７６Ｇｙ，剂量率为０．９４—１．９８Ｇｙ／ｍｉｎ。处理西瓜干种子容易操作、本试验未能获得理想的抗病突变体，但获得了１个无权有用的突变体。     

葡萄病毒病研究进展

综述了近5年来国际葡萄病毒病最新确立的病毒属、鉴定的新种及几种重要葡萄病毒形态、基因组、病原、病毒检测技术及防治策略。葡萄病毒已由1999年的17个属,47种增加到2003年的20个属,55种。其中葡萄病毒属(Vitivirus),凹陷病毒属(Foveavirus)、葡萄斑点病毒属(Maculavirus)和葡萄卷叶病毒属(Ampelovirus)为新确定的4个属。已完成葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄斑点病毒(GFkV)的全序列测序(2001年)。新发现葡萄卷叶相关病毒-9号(GLRaV-9)(2002年)。新增加GLRaV-8和葡萄D病毒(GVD)的单克隆抗体和沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)的多克隆抗体。RT-PCR技术已成功地应用于GRLaV-1、GRLaV-2、GRLaV-3、GRLaV-4、GRLaV-5、GRLaV-6、GRLaV-7、GVB、GVA、GVD、GRSPaV、葡萄拟卷叶病毒(GFkV-likeviruses)、GFLV和南芥菜花叶病毒(ArMV)等病毒及葡萄病毒属(Vitivirus)和凹陷病毒属(Foveavirus)病毒的检测。GFLV、ArMV、GVA及GVB和GVA、GFLV、GLRaV-2、GLRaV-3外壳蛋白(CP)基因已分别导入到欧洲葡萄(Vitisvinifera)和沙地葡萄(Vitisrupestrsis)及其他砧木中,目前仍在检测阶段。     

DAS-ELISA、RT-PCR和IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的比较研究

在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA的检出率明显低于RT-PCR和IC-RT-PCR方法。RT-PCR可以检测出RNA提取液为1:10-4的GLRaV-3病毒,但它受到了提取RNA难以及其它物质(如蛋白质、DNA等)干扰的影响,检测难度增加。从检测的灵敏度来看,RT-PCR和IC-RT-PCR比DAS-ELISA灵敏;并且,IC-RT-PCR比其它两种方法较快,整个过程仅需8h。     

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析

 以小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)的中国分离物(CH-87)接种发病的叶片中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得ZYMV CP基因,将其克隆到pUCm-T质粒上进行序列分析。结果表明该CP基因由837个核苷酸组成,编码279个氨基酸。与已发表序列相比较,该CP基因与国际上已报道的4个基因型不同,应属于新的基因型,暂命名为基因型Ⅴ。     

5种病毒侵染葫芦科作物的症状观察

对小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)和南瓜花叶病毒(SqMV)人工接种侵染7种葫芦科作物后的症状反应进行了初步的观察和探讨,初步筛选出SqMV与南瓜(耳突)、西葫芦(锯齿状叶缘),ZYMV与西葫芦(蕨叶),丝瓜(锯齿状叶缘),CMV与丝瓜(子叶早期褪绿斑)、西葫芦(后期叶片坏死斑)等几种具有比较鉴定作用的植物与病毒的组合。