嗜水气单胞菌拮抗菌的筛选

用平板划线法或点种法对212株分离自养殖水体和水产动物胃肠道的细菌进行筛选,得到1株对嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)有拮抗作用的细菌MLS-7。经过生理生化的初步鉴定,该菌为粪肠球菌(Entero-coccus faecalis)。MLS-7上清液抑菌试验和共培养试验表明其对嗜水气单胞菌有较强的抑菌作用。进一步对MLS-7抑菌谱进行测定,确认其对鱼源的病原菌有一定的抑菌作用。     

一株牛源嗜酸性乳杆菌体外抑菌试验研究

为了验证微生态活菌制剂候选菌株的益生特性,将筛选出的牛源嗜酸性乳杆菌NL0908进行体外抑菌试验,通过共培养和上清液抑菌试验,分析发现,菌株NL0908对病原菌大肠杆菌有较强的抑菌作用。将其上清液进行相应的热处理、蛋白酶处理、中和酸等,结果表明,其抑菌物质主要是由有机酸和抗菌小肽物质共同作用。     

加强实验教学改革 提高人才培养质量

为了适应社会对创新人才的要求,充分发挥实验教学在人才培养的重要作用,从实验教师队伍建设、实验教学模式、实验教学方法与手段及实验课考试形式等方面进行了分析与阐述,旨在改变现有的实验教学形式,为社会培养高素质人才。     

框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株鞭毛flaA基因的克隆与生物信息学分析

以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构.     

框镜鲤维氏气单胞菌的生物学特性

研究分别测定了维氏气单胞菌CY0806在液体LB中的生长曲线,培养温度、pH值、渗透压对其生长的影响,在不同培养基的生长状况,对小鼠和几种不同的养殖鱼类的致病力情况,以及毒力因子检测。结果显示:菌株CY0806在液体LB培养基中存在二次生长现象;其可以在营养琼脂、RS培养基、TSA培养基、麦康凯培养基、营养肉汤中生长良好;该菌株有较强的耐受性,可以在pH值3～11、培养温度20℃～40℃、氯化钠含量在0%～5%中生长;可以引发小鼠、鲢、团头鲂死亡,引起鲫、乌鳢发病;该菌株具有多种毒力基因:溶血素、气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、磷脂酶、丝氨酸蛋白酶、LuxS等。     

乌鳢主要病害的研究进展

乌鳢是我国外贸出口的重要淡水名贵鱼类,但其病害及防治尚处于起步阶段。文章对我国养殖乌鳢病害发生的现状、流行病学特点进行了概述,并详细介绍了乌鳢主要病害的病因及剖检变化,包括出血病、腐皮病、腹水病、结节病、水霉病、车轮虫病和肿瘤病等,同时对主要病害的防治进行了阐述,以期为科学研究提供参考。     

谷氨酰胺和精氨酸对乌鳢生长与免疫功能的影响

试验旨在探讨丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)和精氨酸(Arg)对乌鳢生长与免疫功能的影响。在乌鳢配合饲料中添加不同比例Ala-Gln和Arg,配成7种等氮(42.5%粗蛋白质)、等能(18.5 MJ/kg)饲料,以前期试验得到乌鳢生长最适需求量的Ala-Gln和Arg添加量(5.0 g/kg和20 g/kg)为100%,在此基础上等比例添加0%、20%、40%、60%、80%、100%、120%。饲喂初始体质量为(9.56±0.24)g乌鳢8周。结果表明:饲料中Ala-Gln和Arg添加量的比例在20%~60%时,乌鳢的增重率随着添加比例的增加而不断升高,60%添加组的蛋白质效率和饲料效率均显著高于对照组(P0.05);血清和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)随Ala-Gln和Arg的添加而逐渐升高,120%添加组的血清GSH-Px显著高于20%~60%组和对照组(P0.05);头肾和脾脏的溶菌酶(LZM)活性都随Ala-Gln和Arg的添加呈现先升高后降低或平稳的趋势,当添加量为40%~60%时,头肾的LZM活性显著高于对照组和20%的添加组(P0.05);白细胞介素1β(IL-1β)随Ala-Gln和Arg的增加而降低,60%添加组的IL-1β显著低于对照组、20%和40%添加组(P0.05),80%的添加组的IL-2显著高于对照组、20%~60%添加组(P0.05)。攻毒存活率随Ala-Gln和Arg的增加而升高,60%添加组的攻毒存活率显著高于对照组、20%~40%添加组(P0.05)。在本试验条件下,饲料中添加60%~68.76%Ala-Gln和Arg可以有效促进乌鳢生长、饲料利用和提高抗氧化、免疫保护的能力,以增重率和蛋白质效率为指标,经单因素方差分析和抛物线回归分析得出乌鳢饲料中Ala-Gln和Arg的适宜水平为3.0%~3.4%、12.0%~13.75%。     

鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建

为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。     

ELISA检测牛结核抗体时假阳性反应的消除

以草分枝杆菌作为吸收抗原处理待检血清 ,吸收其中的非特异性类属抗体 ,提高了牛结核 EL ISA的特异性     

锦鲫致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定长春市某水产养殖场发病锦鲫(Brocaded crucian)病原菌,本研究从患病锦鲫体内分离得到一株优势菌株,并对其进行了常规理化特性、分子生物学、人工感染试验及药敏检测。结果显示:分离菌株为革兰氏阴性短杆菌,其理化特性与维氏气单胞菌(A.veronii)特征相符,并且其16S r DNA基因、gyr B基因、dna J基因、rpo D基因与Gen Bank中A.veronii相应基因序列的同源性均高达99%,在系统进化树中与A.veronii聚为一族,将其命名为JLND-1611;人工感染试验结果显示,锦鲫感染7 d后全部死亡,临床症状与自然病例相似,而且对斑马鱼LD_(50)为1.51×10~(2.67)cfu/m L;毒力基因检测显示,从JLND-1611可以扩增出6种毒力因子:脂肪酶(lip)、核酸酶(exu)、密度感应系统调控基因(luxs)、粘附素(aha)、气溶素(aer)及氨酸蛋白酶(ser);综合检测结果表明该分离株为致病性A.veronii。药敏试验结果显示,分离株对19种抗菌药物中头孢曲松、头孢哌酮及多西环素等药物敏感。本研究为锦鲫感染A.veronii的鉴定及治疗药物的选取提供了参考依据。