菊苣干旱胁迫下内源激素的调节机制研究

[目的]探讨干旱胁迫对菊苣内源激素含量的影响。[方法]利用高效液相色谱法测定了3种抗旱性不同的菊苣(航天诱变选育新品系PA-82、PA-43和其原始品种普那菊苣CK)在不同干旱胁迫条件下内源激素(ABA、IAA和GA3)含量的变化。[结果]干旱胁迫下,3种菊苣叶片ABA含量呈增加趋势,其中抗旱性强的PA-82和抗旱性中等的CK在轻度干旱胁迫处理时ABA含量没有变化,在中度、重度干旱胁迫时ABA含量上升幅度较大,而抗旱性差的PA-43在各干旱胁迫处理下ABA含量上升幅度较均等。3种菊苣叶片IAA含量也均上升,其中PA-82随胁迫强度的增大其IAA含量增幅较大,而CK和PA-43增幅较小。3种菊苣叶片GA3含量均下降,其中PA-82和CK的GA3含量下降幅度大于PA-43。根据主成分分析,筛选出ABA作为今后菊苣抗旱鉴定的参考指标。[结论]为人工激素调控应用于菊苣抗旱栽培和育种奠定了基础。     

单一和复合乳酸菌添加对高丹草青贮效果的影响

【目的】研究单一和复合乳酸菌添加处理对高丹草青贮发酵效果的影响,为高丹草青贮菌剂的开发研制提供科学依据。【方法】利用前期筛选出的植物乳杆菌（保存编号LP06）、戊糖片球菌（保存编号PP02）和短乳杆菌（保存编号LBR02）添加至高丹草,乳酸菌总添加量约5×105 CFU/g,设8个处理:（1） CK（无乳酸菌）;（2） LP06;（3） PP02;（4）LBR02;（5） F-1（LP06:PP02=1:1）;（6） F-2（LP06:LBR02=1:1）;（7） F-3（PP02:LBR02=1:1）;（8） F-4（LP06:PP02:LBR02=1:1:1）。对8个处理青贮60 d后的感官品质进行评定,测定分析发酵品质、营养成分和主要微生物数量,并利用隶属函数法进行综合评价。【结果】高丹草青贮60 d后,LP06和F-1处理具有明显芳香果味,感官品质最优; F-2处理pH最低,为3.88; 7个乳酸菌添加处理氨态氮（NH₃-N）含量显著低于CK（P<0.05,下同）; LP06处理乳酸含量最高,为4.21%; LBR02、F-2、F-3和F-4处理乙酸含量显著高于其他处理; LP06、F-1和F-4处理乳酸菌数量较高,均在7.00×105CFU/g以上; LBR02、F-2和F-3处理未检测到酵母菌和霉菌,有害微生物生长抑制效果明显; 7个乳酸菌添加处理粗蛋白质（CP）含量显著高于CK,可溶性碳水化合物（WSC）含量显著低于CK,而干物质（DW）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）含量在8个处理间差异不显著（P>0.05）。根据隶属函数法综合评价结果,F-2处理隶属函数值最高（0.69）,青贮发酵效果综合表现最优。【结论】同型发酵乳酸菌LP06在提高高丹草青贮感官品质、降低NH₃-N含量、减少CP损失、增加乳酸含量和乳酸菌数量上表现更具优势,异型发酵乳酸菌LBR02在抑制有害微生物生长方面作用更显著,LP06和LBR02以1: 1比例混合添加青贮发酵效果综合表现最优。     

鹅γ-干扰素的原核表达及抗病毒活性研究

本研究采用RT-PCR方法从培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA中成功扩增到鹅IFN-γ基因。将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入原核表达载体pGEX-6P-1,得到重组质粒pGEX-6P-1-IFN-γ。重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后作SDS-PAGE分析,得到约43 ku融合表达蛋白特异条带。用GST亲和纯化柱对原核表达产物中目的蛋白进行纯化,得到1.2 mg/L的纯化蛋白。用100TCID50病毒量在鹅副黏病毒(GPMV)/鹅胚成纤维细胞系统上测定表达蛋白的抗病毒活性,观察不同处理组的细胞形态并用RT-PCR方法鉴定,发现表达蛋白稀释倍数小于104可抑制GPMV复制,按照Reed-Muench法计算表达的鹅IFN-γ抗病毒效价为2.0×103U/mL,表明表达蛋白具有良好的抗病毒活性。     

白鹭源禽I型副粘病毒L基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV—SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT—PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒（W13株）L基因的IJA（1121bp）、LB（1481bp）、LC（1439bp）、LD（1476bp）、LE（1608bp）5个片段,用DNAStar软件比较分析后进行拼接,获得长约6760bp包含有L基因全长的核苷酸序列,而W13株L基因的mRNA全长为6704bp、开放阅读框（ORF）为6615个碱基、编码2204个氨基酸。氨基酸同源性分析表明：W13株I基因与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过97．0％;而核苷酸同源性分析表明：W13株L基因与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过93．0％。可见,W13株与鹅源SF02、ZJI、NA-1株及鸡源Guangxi7株的亲缘关系较近。     

5份西南野生马蹄金材料的光合特性比较

以5份西南野生马蹄金Dichondra repens(SD09、SD10、YD03、GD03、SD11)为材料,用美国LI-6400便携式光合测定系统测定其光合日变化,比较5份西南野生马蹄金材料光合特性差异。试验结果显示:1)在自然光照条件下,5份材料的净光合速率(Pn)日变化均呈双峰型,高峰和次峰分别出现在12:00和16:00,有典型的"午休"现象。2)5份材料的单位面积蒸腾速率(Tr)和有效水分利用率(WUE)日平均值均存在差异,其中,SD10 Tr日平均值远高于其他材料,属于强蒸腾材料;SD11的WUE最高,该材料能在吸收等量水分的情况下,比其他材料生产出更多的生物量。5份野生马蹄金材料对光适应性不同,其中GD03的光饱和点(LSP)和光补偿点(LCP)分别为1 051和28.2μmol/(m2.s),为高LSP、低LCP植物,既具备优越的耐荫能力,又能适应较强的阳光辐射,且其坪用特性优异,可作为优良草坪草种质资源进一步研究。     

5份野生马蹄金选系的水分利用效率及坪用价值

对西南地区5份优良野生马蹄金选系的水分利用效率(WUE)及坪用价值进行初步研究,以期为抗旱、适应性强、坪用价值优异的草坪草新品种的选育提供参考。结果表明,1)5份野生材料中,GD200503、SD200309和SD200411具有较强的净光合速率(Pn)和较小的蒸腾速率(Tr),WUE大于对照,具有较强的抗旱潜力。2)5份野生材料中,GD200503、YD200503和SD200310的草层低矮、质地细腻、均一性高、叶色碧绿以及绿期较长,坪用价值综合评分均高于对照。综上认为,GD200503净光合速率较强,水分利用效率高,坪用价值高,极具草坪开发利用前景。     

山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立及应用

为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位~652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739 bp的目的片段后,再用限制性内切酶Bsp1407Ⅰ进行酶切分析,疫苗株可以切成135 bp和604 bp 3个片段,广西分离株可以切成135、226、378 bp 3个片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。     

山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR—RFLP鉴别方法的建立及应用

为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位～652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp 1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739bp的目的片段后,再用限制性内切酶BsP1407 Ⅰ进行酶切分析。疫苗株可以切成135hp和604bp3个片段,广西分离株可以切成135、226、378bp3个片段。结果表明,所建立的PCR—RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。     

鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析

采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析.结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸.经同源性和系统进化树...     

鹅细小病毒广西株的分离鉴定

将广西某养鹅场5日龄发病的雏鹅肝脾处理后接种于10日龄的鹅胚,分离到一株病毒,对死胚收集的尿囊液进行荧光PCR确诊后,对其VP3基因进行扩增测序,通过与GDFSH株(Guangdong)、82-0308株(Taiwan)、HLJ01株(Heilongjiang)和HBZF07株(Hebei)VP3基因序列分析,核苷酸序列同源性在96.2%以上,从分子水平上鉴定该分离株是鹅细小病毒.