徐州地区9株新城疫病毒的分离鉴定

为了解徐州地区鸡新城疫流行现状及防治效果，采集该地区鸡新城疫疑似病料，通过血凝试验和血凝抑制试验，对病料进行病毒分离与鉴定，为鸡新城疫病防治提供参考。结果表明，疑似病料经分离培养、血凝试验和血凝抑制试验，获9株鸡新城疫病毒；1日龄雏鸡脑内接种致病指数表明．其中6株病毒为强毒株（SN03—2012、SN12—2012、SN05—2012、SN012012、LB05—2012、SN04—2010）。     

牛呼吸疾病综合征及其防治

牛呼吸疾病综合征是严重危害国内外肉牛养殖业的一种重要传染病,该病的致病因素复杂,包括支原体、病毒和细菌等特异性病原以及运输应激等多种因素。美国等发达国家对该病的攻关研究开始于上世纪80年代初,其研究和临床防控均已达到较高水平,但仍认为该病将是未来10～20年养牛业所面临的主要疾病。我国对该病的认识和研究尚处于起步阶段,借鉴世界上发达国家的先进经验将有助于提升我国对该病的防控水平。     

A simple and rapid method for isolation of caliciviruses from liver of infected rabbits

Rabbit Haemorrhagic Disease Virus (RHDV), a member of the Caliciviridae family, is the etiologic agent of Rabbit Haemorrhagic Disease (RHD); this viral disease is highly contagious and kills more than 90% of infected adult rabbits. Research on experimental calicivirus infection uses inocula obtained from livers of rabbits dying from calicivirus infection. This implies that caliciviruses have to be purified from liver homogenates. Current methods to isolate caliciviruses from rabbit livers are time consuming. We propose here a new procedure for fast purification of rabbit caliciviruses from liver homogenates that uses centrifugation through an iodixanol gradient. This method offers in approximately 2 h a sample with a high degree of calicivirus purity, as shown by its biochemical and immunocytochemistry analysis, which is also able to kill adult rabbits from RHD within 48 h of inoculation.     

表达外源基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆的构建及病毒拯救

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片段的克隆、拼接,构建了含有外源标记基因的感染性的PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ52+NP49。用限制性内切酶SwaΙ将psk-HuN4-F112-Δ52+NP49线性化后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法将病毒RNA转染叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)包装出病毒粒子,再转接到猴胚胎肾上皮细胞(MACR-145)传代拯救病毒。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(病毒基因组14667位人工产生的MluⅠ酶切位点)和插入的标记基因序列。间接免疫荧光试验表明,外源基因NP49在拯救的PRRSV中表达,且能够在PRRSV传代过程中稳定遗传。病毒生长特性比较显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了含有标记基因PRRSV的感染性克隆并获得了拯救病毒,为进一步开发新型PRRS疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。     

猪繁殖-呼吸综合征病毒上海株的分离鉴定

从上海地区５个发病猪场的病料中，分离到３株致Ｍａｒｃ－１４５细胞病变的病毒：ＳＨ１、ＳＨ２和ＳＨ３，理化特性研究表明，３株分离毒均对氯仿、乙醚、甲醛、热（５６℃）、酸（ｐＨ６以下）、碱（ｐＨ８以上）敏感。负染可见病毒以大小不等的具囊膜的球形粒子为主，囊膜上有纤突，直径为６０￣１００ｎｍ；超薄切片可见病毒粒子分散在细胞浆内，直径为４５￣８０ｎｍ。间接免疫荧光试验表明，３株分离毒均与ＰＲＲＳＶ高免血清呈强阳性反应，而与ＨＣＶ、ＰＰＶ、ＰＲＶ、ＴＧＥＶ高免血清的反应均呈阴性。综上可见，所分离的病毒为ＰＲＲＳＶ。     

西伯利亚百合脱毒技术研究

运用茎尖培养、热处理结合茎尖培养、病毒唑结合茎尖培养、热处理加病毒唑结合茎尖培养4种方法，脱除西伯利亚百合品种CMV、LSV和LMoV病毒，分析了4种处理后的成苗率和脱毒率。结果表明：以热处理加病毒唑结合茎尖培养法效果最为明显。     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。     

西尼罗病毒病及其病原的研究进展

概述了西尼罗病毒病在国外的流行状况、危害及我国的研究现状,着重阐述了近年来在其基础病毒学、诊断技术、疫苗及防治方面的研究进展,为该病的深入研究提供了参考。     

东北亚四国（地区）SMV株系毒力比较

将我国，韩国，日本及俄罗斯远东地区的ＳＭＶ株系与鉴别寄主交互接种测定其毒力。结果指出采用外国的株系鉴别寄坟难以区分我国株系毒力。同样，用我国鉴别寄坟也难以区分外国毒株的毒力，所测定的我国９个株系的１３个代表毒株全部能侵染最抗病的鉴别寄主韩国的Ｂｕｆｆａｌｏ和日本的Ｈａｒｏｊｏｙ。     

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡外周血液T,B淋巴细胞数量变化

应用ＳＰＡ菌体花环法检测网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ雏鸡外周血液Ｔ、Ｂ淋巴细胞数量动态变化。结果发现，１日龄ＳＰＦ雏鸡感染ＲＥＶ后７～４９ｄ外周血液Ｔ淋巴细胞数量，１４～４９ｄＢ淋巴细胞数量均明显低于对照组。表明感染ＲＥＶ的ＳＰＦ雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫水平均下降。