一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的制备

【目的】为证明采用4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体.【方法】将硫酸沙丁胺醇(SAL)与4-溴丁酸乙酯反应制备半抗原(SAL-HS);通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原与包被原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和质谱方法对沙丁胺醇免疫原及包被原进行鉴定.免疫原免疫Balb/c小鼠,采用融合技术产生杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.【结果和结论】筛选出1株杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价达1∶128 000,腹水效价达1∶2 560 000,免疫球蛋白亚型鉴定为IGg1;抗体对沙丁胺醇的半数抑制浓度(IC50)为:0.746 ng/mL;与其他同类结构药物的交叉反应率均小于0.015%.     

具有两类靶细胞的病毒感染模型的全局稳定性

研究了具有两类靶细胞和CTL免疫应答与抗体免疫反应的时滞病毒感染模型的动力学行为.模型描述了病毒和两类细胞的相互作用：CD4＋T淋巴细胞与巨噬细胞.通过构造适当的Lyapunov泛函,使用LaSalle不变性原理,证明了CD4＋T淋巴细胞和巨噬细胞的基本再生总数R0、CTL免疫再生数R1、抗体免疫再生数R2、CTL免疫竞争再生数R3和抗体免疫竞争再生数R4决定了模型的全局性态.若R0≤1,病毒在体内清除.若R0〉1,正解在R1≤1,R2≤1时趋于无免疫平衡点,在R1〉1≥R4时趋于CTL主导平衡点,在R2〉1≥R3时趋于抗体主导平衡点,在R3〉1且R4〉1时趋于正平衡点,获得了无病平衡点、无免疫平衡点、CTL主导平衡点、抗体主导平衡点和正平衡点全局渐近稳定的充分条件.     

重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)重复给药导致大鼠和食蟹猴产生结合抗体

限制大分子药物使用的关键因素之一为诱导抗体产生。新药安全性评价时往往不得不采用多种动物评价人源蛋白的安全性,因此,测定动物产生抗体水平是正确评价大分子药物的前提。为了检验重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)在动物体内的安全性,采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定rhIL-1Ra结合抗体,以纯化抗原作为包被载体,加入供试品后再加酶标抗体,用底物显色并在酶标仪上读取结果。结果显示,抗原包被浓度为10μg/mL、酶标二抗工作浓度为1∶5 000、阳性对照工作浓度为1∶10 000、待检血清样品稀释度从1∶100开始较为合适。SD大鼠肌肉注射给予rhIL-1Ra 4周试验中,剂量分别为0、5、15和30mg/kg。结果表明,剂量≥5mg/kg时给药2周后可诱导产生结合抗体。食蟹猴每天1次连续给药4周,剂量分别采用0、2.5、7.5和15.0mg/kg,当剂量≥2.5mg/kg时可诱导产生结合抗体。     

牙鲆淋巴囊肿病毒一抗原蛋白的确认及定位

以牙鲆淋巴囊肿病毒（LCDV）为抗原免疫Balb/c小鼠，而后将小鼠脾细胞与P3U1骨髓瘤细胞融合，以囊肿组织冰冻切片的免疫荧光染色筛选杂交瘤细胞，阳性结果显示特异性块状荧光信号集中在囊肿细胞的细胞质边缘部分，且多个荧光信号相连呈现链圈状，有限稀释 法克隆阳性杂交瘤细胞，三次克隆后获得4株稳定产生抗LCDV抗体的单克隆杂交瘤细胞株（1A8、1D7、2B6、2D11）。应用Western-blotting法分析单抗识别蛋白的分子量，结果显示，单抗1D7 和2B6均能特异性结合一条分子量116 kD病毒多肽；应用免疫电镜技术定位单抗识别的抗原决定簇，结果发现胶体金颗粒集中吸附在病毒粒子衣壳周围，且背景清洁，无散在的金颗粒或其他污染物。实验结果说明分子量约为116 kD的蛋白多肽为LCDV病毒衣壳蛋白，且具有线性抗原决定簇。     

应用间接荧光抗体技术快速检测花鲈病原菌——鳗弧菌

以花鲈（Lateolabrax japonicus)弧菌病的病原菌-鳗弧菌（Vibrio anguillarum)W-1为抗原，制备兔抗血清；利用异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔免疫球蛋白（FITC-IgG）为荧光标记二抗，并以罗丹明标记的牛血清白蛋白为背景染色，建立检测鳗弧菌的间接荧光抗体快速检测技术。应用该技术对人工感染后的花鲈组织（肌肉、鳃、肠、肾）样品和养殖水体样品进行了鳗弧菌检测，结果显示间接荧光抗体技术不仅可以用于诊断发病的感染花鲈，也可用于检测带菌状态或未发病的感染花鲈。     

基于单克隆抗体的南方菜豆花叶病毒血清学检测技术

为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单抗效价均达到10-7,且3个单抗与感染SBMV大豆叶片组织粗提液有强烈的特异性免疫反应,而不与感染南方豇豆花叶病毒(southern cowpea mosaic virus,SCPMV)的豇豆、健康的大豆、毛豆、豌豆、蚕豆和菜豆叶片组织粗提液发生免疫反应。以制备的单抗为核心,建立了检测植物中SBMV的ACP-ELISA和dotELISA两种血清学方法。3个单抗中19H9单抗的检测灵敏度最高,以其建立的ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测大豆病叶粗提液的灵敏度分别达到1∶163 840和1∶10 240稀释浓度。利用建立的dot-ELISA方法可从上海口岸截获的大豆种子中检测出SBMV,且该检测结果得到RT-PCR方法验证。表明制备的SBMV单抗及建立的SBMV血清学检测技术可有效用于我国SBMV的口岸检验检疫。     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

羊群绵羊肺炎支原体抗体间接ELISA 检测方法的建立

利用绵羊肺炎支原体国际标准株Y-98,制备全细胞抗原,作为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法。对4个不同羊场进行了血清学调查,确定了MoP抗体阳性率各为90%、70%、83.3%和73.9%。同间接血凝试验和鼻腔拭子培养结果相比,间接ELISA方法更加特异敏感,检出率更高,从而对该病的诊断和免疫程序的制定具有重要意义。     

瑞博·康思农蜂胶片对小鼠B细胞生成抗体的影响

将蜂胶片剂分成低、中、高剂量,分别对受试动物昆明小鼠进行实验,研究了蜂胶片对小鼠B细胞分化产生抗体能力的提高效果。试验结果表明,瑞博·康思农蜂胶片有明显增强B细胞产生抗体细胞的效果,具有增加机体免疫力的效果。