两种养殖模式鲮鱼生长、水质及胃肠道饵料生物结构比较研究

通过分析定期施用发酵猪粪和不施肥两种养殖模式麦瑞加拉鲮鱼(Cirrhina mrigola)的生长、水质及胃肠道饵料生物结构,探索发酵粪肥在鲮鱼高密度养殖中的应用价值。结果表明,适量的发酵粪肥投入池塘可以促进鲮鱼生长,肠道充塞度指标增加;投喂发酵粪肥可有效降低池塘水体氨态氮浓度,表明粪肥可以作为一种有机碳源补充,调节池塘水体碳氮平衡,促进异养细菌繁殖,但投喂粪肥池塘的悬浮固体物总量显著升高;投入粪肥池塘浮游动物枝角类数量显著性多于未投入粪肥的池塘,浮游植物藻类的数量也显著增加;投喂粪肥池塘的鲮鱼肠道内容物含量较未投喂粪肥的池塘呈现显著增加,鲮鱼肠道轮虫和原生动物数量在投入粪肥的池塘显著高于未投粪肥的池塘。     

草鱼MHC I区基因的表达特征

为全面了解草鱼MHC I区基因及其表达特征,利用已知斑马鱼MHC I区基因序列,通过本地Blast得到草鱼MHC I区的部分基因序列。采用RT-PCR技术,检测MHC I区BRD2、KNSL2、RXRB、TAPBP、FABGL、MHC Ia、PSMB9以及TAP2等8个基因在健康草鱼各组织的表达水平。结果表明,除FABGL在肾脏表达量最高外,其他基因都在血液中的表达量最高。通过实时荧光定量PCR检测草鱼在嗜水气单孢菌感染后4、12、24、48及96h,MHC I区免疫相关基因在脾脏和肾脏中的表达情况。结果发现,BRD2表达量分别在12h和24h在肾脏和脾脏中达到最高;MHC Ia表达量在脾脏和肾脏中都先上升后下降,并都在24h达最大值;PSMB9表达量在脾脏先上升后下降,在12h达最大值,在肾脏中则先下降后上升,在24h达最大值;TAP2在脾脏和肾脏中整体呈先下降后上升的趋势,在24h都达最大值,并最后都回调至正常范围。BRD2、MHC Ia、PSMB9、TAP2的表达量在攻毒后都有显著性变化,表明这4个基因在草鱼免疫方面具有重要的作用。     

翘嘴鳜不同月龄性状的主成分与判别分析

为研究翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)早期阶段形态性状的生长规律和生长特征, 并判定其最佳生长季节体格与月龄的关系, 采用主成分和判别分析的方法对2~6月龄翘嘴鳜的全长、体长、体高、头长、眼径、尾长、尾柄长、尾柄高和体质量等9个性状进行分析。结果表明: 翘嘴鳜各月龄各性状间均呈不同程度的正相关, 各月龄体质量、全长、体长和体高之间显著相关, 眼径与其他性状的相关系数均较小; 各月龄第一主成分始终指向翘嘴鳜的生长发育情况, 第二主成分有所不同, 2~4月龄指向眼睛发育情况, 5和6月龄分别指向头部发育和尾部发育情况。通过建立判别式来判断错过最佳生长季节翘嘴鳜的体格与大小相符的月龄, 判别结果表明, 总的判别准确率为98.87%。翘嘴鳜早期阶段的体长(L)–体质量(W)关系式为: W=2.58×10^–2L^2.9985(R²=0.994), 表明翘嘴鳜早期生长属于等速生长。本研究证明了体质量、体长和体高是影响翘嘴鳜早期生长阶段最重要的性状指标, 建立了翘嘴鳜早期生长阶段的判别式, 发现了翘嘴鳜早期生长阶段为等速生长, 为翘嘴鳜早期生长阶段的选育提供理论依据和理想的测量指标。

     

鳜不同亚型瘦素受体基因克隆与表达分析

以鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,使用cDNA 3′末端快速克隆法扩增瘦素受体基因(lepr)cDNA序列,获得了由mRNA 3′端可变剪切产生的鳜lepr的4个不同亚型,包括编码序列(coding sequence, CDS)长度为3 474 bp、编码1 157个氨基酸的长型受体亚型lepr-L,以及3个短型受体亚型lepr-S1、lepr-S2和lepr-S3,CDS长度分别为1 512、945和915 bp,分别编码503、314、304个氨基酸。对氨基酸序列进行结构域分析和多重比对发现,鳜lepr长型受体亚型包含完整的功能域,短型受体亚型无跨膜区及胞内结构,鳜lepr及其leptin结合域(leptin binding domain, LBD)序列保守程度高。鳜lepr在鳃中表达最高,其次是肾和垂体,腹腔注射鳜leptin B而非leptin A的同源重组蛋白2 h后引起脑lepr表达量的升高(P0.05)。以上结果表明,鳜leptins能引起组织中lepr表达的不同变化而发挥独特的生理功能。     

鳜鱼饲料可控养殖技术

鳜鱼是我国名贵的淡水经济鱼类,不仅肉质好,没有肌间刺,且富含高不饱和脂肪酸,由于其绝佳的口感及极高的营养价值,鳜鱼在2019年年产达29.8万吨,而产值接近200亿元。目前我国以养殖翘嘴鳜为主,自20世纪80年代起,鳜鱼人工催产、人工繁殖、鱼苗及商品鳜养殖等关键性技术已经得到解决。     

草鱼神经肽Y受体对神经肽Y的响应机制及信号通路探究

为探究草鱼（Ctenopharyngodon idellus）神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）与神经肽Y受体（NPY receptor，YR）的相互作用及信号传递机制，对草鱼YR的基因结构、组织表达和细胞信号传导途径进行分析。结果显示，在草鱼基因组中获取了7个YR基因的序列，分别为Y1R、Y2R、Y2-2R、Y4R、Y7R、Y8Ra和Y8Rb。对草鱼YR进行同源性分析，发现7个YR编码的氨基酸序列在硬骨鱼类中高度保守。组织表达结果显示，草鱼YR主要在中枢组织表达，但也可以位于外周组织，包括眼睛、鳃和肠道。NPY可以激活人胚胎肾细胞（HEK293t）中Y2R、Y4R和Y8Rb的表达，Y2R与cAMP/PKA信号通路偶联；Y4R与MAPK/ERK信号通路偶联；而Y8Rb可激活cAMP/PKA和MAPK/ERK 2条信号通路。脑室注射NPY可引起Y1R、Y2R、Y4R和Y8Rb表达量显著升高。研究结果表明，草鱼Y2R、Y4R和Y8Rb具有功能性，能够有效传递信号，NPY的作用很可能由这些受体介导。     

广东与江西翘嘴鳜养殖与天然种群的遗传多态性分析

对翘嘴鳜4个人工繁殖群体［江西南昌国家级翘嘴鳜原种场(1个群体)、广东南海人工繁殖群体(2个群体)、广东惠州人工繁殖群体(1个群体)］及2个天然群体(江西鄱阳湖养1个月；江西鄱阳湖养2~3 d)共60尾的线粒体控制区（D-loop）核苷酸序列进行扩增后测序和遗传多态性分析。采用特异性引物对翘嘴鳜基因组进行PCR扩增，得到翘嘴鳜线粒体DNA控制区基因的全序列(833 bp)。分析得到的D-loop区碱基序列中60个个体共检测到65个变异位点，其中43个是单一变异位点，22个为简约信息位点。60个个体共检测出22个单倍型。分析结果表明，江西两个天然群体基因交流充分，未出现遗传分化，但相对江西省翘嘴鳜原种，广东省翘嘴鳜养殖种群多态性偏低。因此，广东省从其他省鳜鱼原种场引进翘嘴鳜原种是非常有必要的，这对我国集约化主产区广东省的鳜鱼产业向高效、优质的方向持续健康发展具有重要意义。     

翘嘴鳜学习记忆相关基因c-fos对食欲基因的调控

学习记忆在动物获得新的觅食技巧和食物偏好方面扮演着重要的角色。为评估学习记忆对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)摄食调控的影响, 构建翘嘴鳜学习记忆相关基因 c-fos 及 zif268 荧光过表达载体, 并以 pcDNA3.1-EGFP 载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验, 优化电压、脉冲时间、质粒浓度和电击次数等电转条件, 确立最佳条件。利用电击的方式转染翘嘴鳜脑细胞, 检测食欲基因 mch、agrp、pomc、npy 表达变化。结果显示, 成功构建了学习记忆过表达载体 pcDNA3.1-c-fos-EGFP、pcDNA3.1-zif268-EGFP。翘嘴鳜脑细胞电转染的最适条件: 细胞密度 1×106 /mL、电压 240 V、脉冲时间 5 ms、质粒 6 μg、电击 1 次、转染 48 h, 可见大部分荧光蛋白表达, 转染率较高, 表明 pcDNA3.1-EGFP 在体外成功转染翘嘴鳜脑细胞。过表达 c-fos 基因后, 食欲相关基因 pomc 和 npy mRNA 水平均显著上升。而过表达 zif268 基因后, 并未发现食欲基因有差异表达。以上结果说明, 翘嘴鳜学习记忆相关基因 c-fos 的表达影响了食欲相关基因 pomc 和 npy 的表达。     

光强和光谱对鳜摄食、生长及相关基因表达的影响

为了探讨光强和光谱对鳜(Sinioerca chautsi)行为、摄食和生长性能的影响, 对不同光强和光谱条件下养殖 8 周的鳜的摄食、生长进行观测，并检测相关基因的表达情况。对鳜摄食的影响研究发现, 光强在 10、25 和 50 lx 下时鳜的摄食比例较高, 显著高于 5、300 和 500 lx 组(P＜0.05); 不同光谱下, 在绿光条件下摄食比例最高(P＜0.05)。 光强和光谱条件对鳜生长的影响结果显示, 10 lx 的光强可以极大地改善鳜的生长, 该组中增重率、特定生长率都显著高于其他组(P＜0.05), 同时饲料系数显著降低(P＜0.05); 200 和 500 lx 条件下生长性能提升不显著(P＞0.05)。另外, 10 lx 光强下生长相关基因 igf1 在肌肉中的表达量显著高于其他组, 同时促食欲基因 npy 和 agrp 显著上调(P＜0.05), 抑食欲基因 cart 和 pomc 下调; 而在 200 和 500 lx 条件下, npy 和 agrp 表达水平与对照组相比不显著(P＞0.05), 500 lx 条件下 pomc 表达显著高于 10 和 200 lx 组(P＜0.05)。绿光组的增重率和特定生长率显著升高(P＜0.05), 观察到生长性能的改善。在红光条件下观察到了相反的结果, 增重率和特定生长率显著低于其他组(P＜0.05), 肝体比显著大于其他各组(P＜0.05)。此外, 红光和绿光组 igf1 在肝脏中的表达量显著高于蓝光组(P＜0.05)。促食欲基因 npy 表达在绿光组中显著升高(P＜0.05), agrp 在红光、绿光和蓝光组中的表达量均显著低于白光组(P＜0.05)。综上所述, 鳜更加偏好低光强和短波长的光, 并且在这种光照条件下摄食行为更加活跃且具有较好的生长性能。     

鳜脂蛋白脂酶和肝脂酶基因结构与组织表达

为了研究鳜(Sinioerca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列.鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 548 bp,编码515个氨基酸.鳜HL基因cDNA全长为1 964 bp,其中ORF为1 494 bp,编码497个氨基酸.进化树分析显示,鳜LPL与HL基因与其他脊椎动物的LPL、HL基因各自聚集成簇.对鳜基因组进行PCR获得鳜LPL与HL全基因组DNA序列,与其他脊椎动物基因结构相似,鳜LPL基因由10个外显子和9个内含子组成,全长7 392 bp;鳜HL基因南9个外显子和8个内含子组成,全长8 837 bp.应用Genome Walker方法在鳜克隆得到一段长为1 071 bp的LPL和一段长为2 173 bp的HL基因5'侧翼Ⅸ序列,并利用相关软件预测其中具有多个保守的顺式调控元件.组织表达研究显示与易患动脉粥样硬化的人类LPL不同,鳜LPL基因在所有被检测组织中均有表达:在脂肪组织中大量表达,其次是肝脏、脑、肠道、肌肉,在脾中表达量最低;而鳜HL基因的表达则与人类相似,只在肝脏中表达.本研究将为深入探讨机体脂质代谢调节机制以及LPL、HL在防治动脉粥样硬化中的作用奠定良好基础.