CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立

试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。     

不同叶面肥在棉花上的施用效果

一、材料与方法1.供试材料供试叶面肥5种,设6个处理,处理1:菌福农生物菌液;处理2:漯效王液肥;处理3:太得肥多元肥;处理4:磷酸二氢钾;处理5(CK1):清水对照;处理6(CK2):55%磷酸钾铵。供试棉花品种99-1。2.试验设计试验设6个处理,其中2个对照,每个处理设3次重复,小区随机排列,小区面积20米2,试验区面积     

西部少数民族地区土地流转现状与对策

在回顾有关土地流转研究文献的基础上,利用2010—2011年获得的226个农户实地调查数据,对西部少数民族地区农村土地流转的现状及制约因素进行分析,在分析的基础上,提出通过加强农村教育、提高农民收入、完善农村养老保障制度等对策,促进西部少数民族地区土地健康、适度流转。     

大孔树脂吸附分离米糠中ACE抑制肽工艺

采用大孔吸附树脂对米糠ACE抑制肽进行分离,比较6种大孔吸附树脂对米糠蛋白中肽的静态吸附和解吸效果,从中筛选出适合该米糠蛋白中肽分离纯化的树脂。结果表明,筛选出HPD-400型树脂最适合米糠蛋白中肽的混合物的纯化。通过对影响树脂吸附解吸的各种因素进行系统地研究,确定工艺参数。HPD-400树脂对米糠多肽的静态吸附4h左右基本达到吸附平衡,选择吸附温度45℃较为适宜;吸附时间达到2h后HPD-400型树脂对米糠蛋白肽的吸附量已达到饱和;在pH4．0时吸附效果好,吸附率达85．4％。解吸液为pH8．0的70％乙醇溶液,洗脱时间确定为30min。通过动态吸附分离实验得出,该树脂可以达到分离纯化米糠ACE抑制肽的目的。     

高渗葡萄糖加速尿治耕牛青叶中毒见效快

我县许多乡、镇处在青树广泛分布的地区,每年开春,青树幼苗总较其它植物发叶早,春季放牧时,耕牛会大量采食青树幼叶从而引起耕牛中毒。笔者曾多次在惠水县长田乡、高镇镇、大坝乡等地就诊,现将其中3例的治疗报告如下。1发病原因每年开春青树叶早发,村民对放牧地区选择不当,让耕牛有机会采食大量的青树幼叶而发生中毒。2中毒症状及诊断耕牛中毒后主要表现为水肿,一般中毒后2~3天开始出现水肿,水肿主要表现部位是公牛的包皮、腹下,母牛的阴户、肛门、臀部等处,肿块触之无痛、无热、有波动感,针刺有清液流出,中毒严重者无此症状。病…     

马生长激素基因的克隆与5′侧翼区序列分析

利用PCR技术首次扩增、克隆了6个具有不同生长速度马的生长激素基因。6个品种分别为:1个体格高大健壮的引入品种英纯血马,1个中等体高的中国驰名培育品种三河马,3个中等体高的蒙古马(乌审马、乌珠穆沁马、锡尼河马),1个体格矮小的广西矮马。马GH基因大小1923bp,包括了转录起始位点5′侧翼区序列250bp、1个可能的TATA框,组织特异性转录因子结合位点,全部5个外显子和4个内含子及部分3′侧翼区序列。分析6个品种马GH基因5′侧翼区序列并与乌审马序列相比,均在第210位出现由胞嘧啶C颠换为腺嘌呤A,在249位由胞嘧啶C颠换为鸟嘌呤G。6个品种之间的比较显示,马GH基因5′侧翼区具有极高的保守性,体格和体高具有显著差异的马品种间几乎未有差异。说明不同品种马生长速度和成年体重的差异,并非是其GH基因5′侧翼区变异造成的,马GH基因表达的差异可能受到内含子或3′侧翼区序列的影响。     

高渗葡萄糖加速尿治耕牛青(枫)叶中毒见效快

我县许多乡、镇处在青桐树广泛分布的地区,每年开春,青桐树幼苗总较其它植物发叶早,春季放牧时,耕牛会大量采食青桐树幼叶从而引起耕牛中毒.笔者曾多次在惠水县长田乡、高镇镇、大坝乡等地就诊,现将其中3例的治疗报告如下.     

蒙古马生长激素基因的克隆及部分序列的PCR-SSCP分析

通过PCR-SSCP方法对7个品种285匹马的生长激素基因做了多态性分析,在所检测的5′端侧翼区、第一内含子、第二外显子和第五外显子4个位点中,仅第五外显子检测到多态,该多态位点由A和B两种等位基因控制.GH基因第1 719处1个T→C的突变和1 743处G→A的突变,导致等位基因B变为等位基因A.除纯血马外,A基因在各品种中均为优势等位基因,B基因为纯血马的优势基因.在此多态位点,乌珠穆沁马、乌审马和巴尔虎马处于Hardy-Weinberg平衡状态,纯血马、三河马和锡尼河马则未达到Hardy-Weinberg平衡状态.     

中国蒙古马mtDNA D-Loop高变区序列分析

对5匹中国蒙古马mtDNA D-Loop高变区400bp核苷酸序列的变异情况进行分析。结果发现5匹中国蒙古马mtDNA D-Loop高变区的平均核苷酸变异率为3．65％，其核苷酸变异类型包括转换、颠换和缺失3种形式，其中以转换最为常见。核苷酸变异位点较多，且个体之间差异大，说明该5匹中国蒙古马的mtDNA D-Loop高变区多态性丰富。     

一种判定微量中和试验的新方法

某些传染病的诊断,如伪狂犬病,猪传染性胃肠炎、赤羽病、牛传染性鼻气管炎、病毒性腹泻——粘膜病等,均需借助细胞做血清——病毒中和试验。目前,特别是微量中和试验的应用更为普遍。判定微量中和试验的结果,一般是借助显微镜观察细胞产生的CPE,这种方法往往夹杂一些主观因素,而且只能逐孔检查,孔与孔之间很易引起错误,造