浅析利用种子贮藏蛋白鉴定品种纯度

1种子贮藏蛋白电泳技术 贮藏蛋白是种子的主要成分，也是基因表达的产物，几乎所有作物种子贮藏蛋白都具有特异性，且容易分离和提取。此技术就是根据种子贮藏蛋白的这些特点利用电泳中谱带的多态性来鉴定品种的真实性和纯度。通常种子中所含蛋白质可分为4类，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。每一类蛋白质的比例因作物种类不同而有差异，如水稻含有高水平的谷蛋白，     

细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗基因表达差减文库的构建及EST分析

利用细极链格孢菌蛋白激发子粗提蛋白液诱导棉花苗期相关基因表达,以清水喷施为对照样本,进行抑制差减杂交,构建棉花苗期基因表达文库.结果显示,插入片段的大小主要集中在200～1000 bp.随机选取150个克隆进行菌液PCR检测与测序,并将所测序列与Gen-Bank dbEST库进行比对,共得到104个单一序列.其中,78个EST与其它物种已知基因部分区域的同源性为48.54%～100%,占总EST的75%;6条EST序列能在数据库中检索到同源性序列,但其功能尚不清楚,占5.77%;10个EST能在数据库中发现为推测蛋白,占9.6%;10个EST在GenBank中没有查到对应的同源序列,可能是新基因,占9.6%.同时,将所得到的104条EST序列在WEGO网站上进行功能分类,通过Gene ontology确定具体EST的分子功能.其中,在生物途径分类中,与生理途径和细胞过程相关的EST最多,分别为48个和45个;在细胞组份功能分类中,与细胞相关的EST最多,达到44个;在分子功能分类中,催化功能与分子绑定相关的EST数量最多,分别达到了30个和28个.由此可见,细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗时涉及到植物的生理生化的多条途径,受到多个基因的调控,可能包括抗病与防御蛋白、信号传导蛋白、转录因子、能量代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白、细胞保护机制蛋白、功能未知及其它蛋白等相关蛋白.     

营养对五龙鹅基因表达影响的研究

对著名的地方特色品种五龙鹅进行不同营养水平试验,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)PAGE技术,分析血液中脂酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)及蛋白质的多态.结果表明 试验组蛋白质结构新出现S1,S3,S4亚基组分、存在丰富的多态变化.EST同工酶快区Es-1位点,由于等位基因控制,消减Es-1D、Es-1F同工酶谱带,其活性下降20.7%.LDH同工酶基因表达调控A和B亚基的构成,出现LDH1亚基,其活性上升99.6%.提示营养环境直接或间接调控基因表达水平,与生长性能呈正相关.     

铜、锌离子影响丹参金属硫蛋白MT2基因表达

植物金属硫蛋白在金属离子的储存、运输和代谢及降低重金属离子的毒性等方面起着重要作用本文研究了Cu2 、Zn2 对丹参毛状根中金属硫蛋白基因表达的影响.以6,7-V为液体培养基,分别以缺乏正常及原培养基100、500、1 000倍的cu2 、Zn2 处理,采用半定量PCR法检测不同时间点时金属硫蛋基因的表达情况.结果发现Cu2 、Zn2 诱导金属硫蛋基因的表达量分别在100倍处理量时的9 h和6 d达到峰值Cu2 、Zn2 能显著诱导丹参金属硫蛋白基因的表达,该基因可能在丹参对铜、锌元素的吸收方面发挥着重要的作用.     

鸡caveolin-3 cDNA克隆与表达分析

用RT-PCR法克隆了鸡(Gallus gallus)caveolin-3cDNA。测序结果显示，克隆的鸡caveolin-3 cDNA与GenBank已发表的序列一致。序列相似性比较表明，鸡与大鼠、小鼠和人的caveolin-3cDNA有78％左右的相似性，而氨基酸序列相似性约为80％。对鸡caveolin-3的组织特异性和体内不同发育阶段的Northern blot分析结果表明，鸡的caveolin-3为横纹肌特异性表达．同时在1～10周的不同发育阶段中没有表现出明显的变化。     

甘蓝黑腐病菌rPf基因簇对胞外蛋白酶Ⅰ基因表达的调控

甘蓝黑腐病黄单胞菌（ＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＰｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）产生的胞外蛋白酶Ⅰ在致病的早期阶段起重要作用，该酶以及其它胞外酶和胞外多糖的合成受一致病因子调控基因簇（ｒＰｆ基因簇）的正向调控。本研究利用带有β－半乳糖苷酶报道基因（ｌａｃＺ）的转座子Ｔｎ５－Ｂ２０诱变蛋白酶Ⅰ基因克隆，获得了ｌａｃＺ在蛋白酶Ⅰ基因启动子控制下表达的Ｔｎ５－Ｂ２０插入突变质粒。通过将这种突变质粒导入野生型和各ｒｐｆ基因突变体菌株后，测定ｌａｃＺ基因在细胞生长周期中的表达水平，不仅进一步证实了这些ｒｐｆ基因对蛋白酶Ⅰ基因的正向调控作用，而且明确了它们的调控水平．发现ｒｐｆＡ、ｒｐｆＣ、ｒｐｆＥ、ｒｐｆＧ或ｒｐｆＨ突变后，蛋白酶Ⅰ基因的转录会降低９０％左右，而ｒｐｆＢ突变后，蛋白酶Ⅰ基因的转录只降低４８％。     

TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解及其相关基因转录表达的影响

为探讨TNF-α对猪脂肪细胞脂肪分解的调控作用及其机制,用1、10、100 ng·m-1种剂量TNF-α作用体外培养的猪原代脂肪细胞24 h,及10 ng·mL-1TNF-α处理脂肪细胞1、6、12、24、48 h.使用甘油试剂盒,检测细胞甘油的释放量,RT-PCR检测ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipinA表达量变化.结果表明,TNF-α以浓度和时间依赖性的方式促进猪原代脂肪细胞甘油的释放(P<0.05);同时下调ATGL、TGH-2、HSL、LPL、MGL和perilipin A mRNA表达量.说明:TNF-α主要通过下调perilipin A的表达,降低其对脂滴的保护作用,增加脂肪分解酶和脂滴的接触,促进了猪脂肪细胞的脂解作用.     

日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响

选择年龄、体质量相近的杂交母羊(萨福克♂×小尾寒羊♀)24只,随机分为3组,分别饲喂不同蛋白水平的日粮(中蛋白日粮,低蛋白日粮和高蛋白日粮).采用半定量RT-PCR方法,检测日粮不同蛋白水平对绵羊脂肪和肌肉中IGF-Ⅰ基因表达的影响.结果表明:日粮的蛋白质水平影响绵羊腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪和半腱肌组织IGF-Ⅰ基因的表达,随着口粮蛋白质水平的升高IGF-Ⅰ表达量增加.但表达具有组织特异性,在腹部皮下脂肪、肠系膜脂肪中,中蛋白组和高蛋白组均显著高于低蛋白组(P<0.05),在半腱肌组织中,高蛋白组极显著高于低蛋白组(P<0.01),而中蛋白组与高蛋白组和低蛋白组间均无显著差异(P>0.05).     

营养基因组学的研究进展

营养基因组学是研究日粮或营养物质在基因学范畴中,在某个特定时刻,对细胞、组织或生物体的转录组、蛋白质组和代谢组产生影响的一门学科。从20世纪80年代开始,人们逐渐意识到营养素也是一种基因表达的调控物质,可直接或独立地调控基因表达。随着人类基因组计划的完成及正在开展的家畜基因组测序工作的顺利进行,营养科学已经从机体代谢和组织细胞的层面发展到基因层面上来;且从研究营养素对单个基因的表达及作用开始向基因组及表达产物在代谢调节中的作用,即营养基因组研究方向发展。本文将就营养基因组学的概念、所涉及到的主要技术、主要研究进展及其在动物生产领域的应用前景做一综述。