细菌分离与基因扩增确诊水貂出血性肺炎

经细菌分离培养与小鼠接种实验,从急性死亡、鼻孔流血和剖检表现为出血性肺炎的急性死亡水貂脏器中分离获得可使小鼠死亡的革兰阴性,单个、成双或呈短链状的中等大小杆菌。应用绿脓杆菌16S核糖体DNA引物进行PCR扩增与序列分析,得到与预期片段大小相一致的片段,经序列测定证明与假单胞菌属的绿脓杆菌16S核糖体DNA序列相一致。药敏试验表明该细菌对氟苯尼考敏感,临床应用该药后疫情得到迅速控制。     

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株（CCVDXMV）纤突蛋白（S）、膜蛋白（M）和核蛋白（N）基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切，回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞，通过RT—PCR法进行转录水平的检测，并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36h后就可检测到目的基因的转录；在转染72h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明，3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答，这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。     

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物，发现冠状病毒样粒子，超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明，DXMV核酸类型为RNA，对氯仿、乙醚敏感，可耐受1％胰蛋白酶的作用，具有一定的耐酸性和耐热性，可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖，无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明，DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片，可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物，可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明，该病毒为犬冠状病毒，大熊猫可被犬冠状病毒感染。     

果子狸细小病毒的分离与鉴定

用F81细胞从河南送检的患有肠炎的果子狸粪便样品中分离出一株病毒，经形态学、理化学、生物学和分子病毒学实验鉴定是一株CPV-2a的突变株。此毒株在F81细胞上生长，能产生CPV感染的特征性细胞病变，细胞肿胀、变圆、破碎、脱落；病毒粒子二十面体立体对称，直径为20～24nm；无囊膜，能抵抗氯仿的处理，耐酸，耐热，但能被5-IUDR抑制。可凝集猪红细胞，不凝集鸡、豚鼠、大鼠、兔、人“O”型红细胞，能被抗CPV抗体所抑制。设计特异性细小病毒引物扩增VP2基因的两个片段，并进行测序，分析结果表明，该毒株是在CPV-2a的基础上其VP2的第297位氨基酸发生A→S突变，第300位氨基酸发生G→S突变，第301位氨基酸发生T→A突变。该毒株暂定名为PV／GZL/H／1／02。该病毒能感染犬。     

辽宁部分地区宠物犬犬瘟热病毒分子流行病学调查与分析

为了解犬瘟热病毒(CDV)遗传变异情况,先后从辽宁省沈阳、锦州、辽阳等地区的9个宠物医院收治的临床疑似犬瘟热(CD)病犬中采集了165份拭子样品及组织病料。利用CD抗原检测试纸条、RT-PCR检测方式筛选到8份阳性样品。H基因序列分析结果显示该8株CDV野毒株之间的H基因同源性为97.6%~99.9%,与疫苗(Onderstepoort)同源性为89.1%~90.9%;基因遗传进化显示,该8株毒株属于国内当前流行的Asia-1型,来源于沈阳的SY-35株与在北京发现的CDV强毒株BJ-09在同一进化分枝,其余来源于沈阳、锦州和辽阳的7株与东北地区流行的CDV在同一进化分枝;氨基酸序列比对结果显示,H蛋白在氨基酸235~245,415~425,595~605等处存在高变异,H蛋白3 555位置氨基酸的非同义置换概率相对比较高;糖基化位点以及抗原表位预测分析显示该8株CDV的H基因糖基化位点和抗原表位方面均与Asia-1型CDV野毒株相似,但与疫苗株相比变异较大,特别是我们发现JZ-6株丢失了1个潜在N-糖基化位点。结果表明:辽宁地区宠物犬CD流行以Asia-1型CDV为主,不同病毒株间存在遗传多样性。     

禽流感病毒的分子致病机理及其跨种传播的分子机制研究进展

禽流感病毒是引起家禽及野生鸟类禽流感的病原,能够跨种间传播给人类及虎等哺乳动物,给养禽业造成巨大的经济损失,也严重威胁人类健康。文中综述了近些年来禽流感病毒分子致病机理及其跨种间传播分子机制的国内外研究成果,以期为禽流感的科学防控提供参考。     

吉林省部分地区野禽携带新城疫病毒情况调查

为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒ClassⅠ群基因3型。本次对吉林省新城野禽携带新城疫病毒调查结果中未见新城疫强毒株。     

虎源流感病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用研究

为临床上能快速诊断虎流感,通过对已分离获得的虎源H5N1流感病毒和GenBank中报道的A型H5N1亚型流感病毒的NP、HA、NA序列,设计合成各个基因的特异性PCR扩增引物和A型流感病毒通用反转录引物。通过优化反应体系及条件,建立一步法可同时扩增出3个基因的联合RT-PCR检测方法。将该方法用于临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法进行比较。结果,NP、HA、NA基因的扩增片段大小分别为464bp、581bp、173bp,其检测的敏感性约100个TCID50。该方法的检出率和病毒分离结果相符,高于电镜负染和HA/HI试验。结果显示,该方法可用于虎源流感病毒的临床或实验室检测。     

动物干扰素的研究进展

1980年国际干扰素委员会定义了干扰素:干扰素是一类在同种细胞上具有抗病毒活性的蛋白质,其活性的发挥又受细胞基因组的调节和控制,涉及RNA和蛋白质的合成。本文就动物干扰素的研究现状做以概述,为动物干扰素的研究奠定理论基础。     

中国H5N1亚型禽流感的流行现状与防控策略

编者按：“禽流感”——这个让养殖者和消费者“闻之变色”的传染病,不仅因其高度的传染性和致死率给家禽养殖者造成直接的经济损失,更因其“人畜共患”的特点给消费者造成恐慌,从而间接影响整个养禽产业的发展。从2004年,我国首次报道“禽流感”疲情以来,虽然政府采取了一系列的措施,