利用微卫星标记高效鉴定松浦镜鲤的亲缘关系

用37尾雌和14尾雄松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu构建37个血统明确的全同胞家系,同池、同条件养殖。用筛选出的9个多态性微卫星标记和建立的多重PCR检测方法进行子代群体(1 318尾)的亲权鉴定。9个位点共检测到53个等位基因,各位点均为高度多态(PIC0.5),平均期望杂合度为0.742,观测杂合度为0.755。亲本基因型信息的模拟分析显示,利用9个标记将子代分配到亲本对的成功率可达100%。实际鉴定结果:1 287尾个体准确鉴定到配组的亲本对,鉴定成功率为97.6%。以上结果表明:本研究提供的标记和检测方法可用于松浦镜鲤的亲本遗传距离分析和家系亲缘追溯,也适用于群体遗传多样性监测。     

用微卫星标记鉴定和分析德国镜鲤的家系及遗传结构

为选育抗疱疹病毒的德国镜鲤(Cyprinus carpio var.mirror carp)新品种,2012年在F1抗病家系基础上,构建27个家系,同池养殖。本研究采集经疱疹病毒感染存活个体,应用多态性微卫星标记对构建的27个德国镜鲤家系进行鉴定和遗传结构分析。结果显示:(1)4个位点累计排除率为99.9%,亲本与子代的配对率为100%(P=0.05);(2)在27个家系的4个位点中检测到32个等位基因,每个位点7~10个等位基因,期望杂合度为0.6796~0.8019,平均期望杂合度为0.7510;(3)8个家系处于Hardy-Weinberg平衡状态下,19个家系处于不平衡状态下(P<0.05),其中有15个家系为极显著不平衡(P<0.01);(4)27个家系间遗传距离为0.1751~0.8772,平均值为0.4425,聚类分析中,27个家系主要聚在两个分支上,其它家系分散于不同分支。结果表明:27个家系具有较高的遗传多样性,家系间遗传分化明显,大部分家系因病毒选择作用偏离Hardy-Weinberg平衡。家系群体遗传结构研究结果将为下一步品种选育工作提供重要的理论依据和技术支持。     

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)性腺分化的组织学观察

每天采样观察3~60日龄人工养殖的黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco性腺分化和发育的组织学。结果表明:在水温(20±4)℃下,黄颡鱼卵巢的分化明显早于精巢,性腺的分化型为雌性异体型。孵出后14d卵巢开始分化,原始性腺在横切面出现组织突起,逐步形成卵巢腔;雄性分化始于孵出后54d,主要标志是形成输精管原基,进而形成输精管。本研究成果为黄颡鱼的人工繁殖提供了理论依据。     

温度对两种鲤耗氧率、排氨率及窒息点的影响

为了揭示温度对鲤呼吸代谢影响,采用密闭流水法测定了不同温度下两种规格松浦鲤(Cyprinus carpio Songpu)与松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu mirror)的耗氧率与排氨率,密封进出水口测定窒息点。结果显示：两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点均随水温上升而增加,1龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率显著高于1龄松浦鲤的耗氧率与排氨率,2龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率低于2龄松浦鲤,但差异不显著。两种鲤的昼夜耗氧率与排氨率变化趋势基本一致。1龄松浦鲤与1龄松浦镜鲤的窒息点为0.38～0.60 mg/L,2龄松浦鲤与2龄松浦镜鲤的窒息点为0.11～0.37 mg/L,且各组间差异显著。结果表明温度对两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点影响较大,且1龄时期松浦镜鲤比1龄松浦鲤代谢旺盛,2龄时期两种鲤代谢程度相近。     

显微介导的远缘基因渐渗技术在鲤育种中的应用

以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外源DNA供体,运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾总DNA直接导人鲤(Cyprinus carpio L.)受精卵内,创建鲤外源DNA导人系,并利用AFLP分子标记技术和肌肉营养成分分析,对显微介导中国明对虾基因鲤进行外源DNA检测与蛋白质和氨基酸含量进行测定,结果表明:(1)在30对AFLP引物中,有8对所扩增带,其显微介导中国明对虾基因鲤亲本和子代中都有和中国明对虾基因相同而对照鲤没有的带.说明受体鱼中,肯定有一段序列与目的基因序列一致,研究证明了亲缘关系甚远的异源DNA片段的超远缘杂交的可行性.(2)导人中国明对虾总DNA片段的显微介导中国明对虾基因鲤的蛋白质含量分别为18.37%,18.47%,17.99%,均高于对照组(17.06%);而氨基酸的总量分别为17.16%,17.56%,16.92%,也高于对照组((16.13%),其中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸等4种鲜味氨基酸含量明显超过对照组,经数理统计分析,均有显著差异(P<0.05).说明直接导人中国明对虾总DNA对显微介导中国明对虾基因鲤的营养成分和氨基酸含量均产生影响,这可对鲤的品质改进,丰富鲤的遗传基础,为显微介导的超远缘杂交技术的应用提供思路.     

一种简易的水质梯度发生装置

为了检测水质指标对鱼类孵化、生长和发育的影响，作者设计了一种简易的梯度发生装置。它由相邻的两个半圆柱腔体组成。一腔体上排列递减数量的小孔，另一腔体对应位置排列递增数量的小孔，腔体间对应小孔形成几个组合。向两腔体等压注人不同水源，每个组合汇流后引出一个等流量子水源，子水源呈现梯度性质。这种装置可以产生药剂、溶氧浓度和温度梯度等，以减少实验规模和操作误差。     

松浦红镜鲤形态学特征及主要经济性状的初步研究

将松浦红镜鲤(Cyprinus carpio Songpu red mirror)、散鳞镜鲤(Cyprinus carpio L.mirror)和荷包红鲤(Cyprinus carpio red var.Vuguanensis)抗寒品系乌仔各705尾放养到0.047hm~2池塘中,同塘培育到鱼种;春片鱼种各500尾放养到0.2hm~2池塘中;各池塘的投喂和饲养管理相同,按GB/T18654.2-2008和GB/T18654.3-2008标准测定鱼体质量和形态性状。结果显示,松浦红镜鲤体长/体高、体长/尾柄高、体长/头长、头长/吻长大于散鳞镜鲤和荷包红鲤抗寒品系;三个品种的8个可量比例性状主成分分析构建的3个主成分贡献率分别为:50.94%、17.08%、13.68%,累计贡献率达81.70%;主成分散点图显示,松浦红镜鲤聚成独立一簇,与其他品种明显区分;特定增重率、相对增重率、净增重、饲养成活率及越冬成活率等主要经济性状均显著高于荷包红鲤抗寒品系(P0.05),但与散鳞镜鲤无明显差异。     

TLR18基因在鲤感染CyHV-3中的表达模式及信号通路

以抗病镜鲤选育系F4和德国镜鲤选育系为实验材料,通过RT-PCR技术确定鲤受CyHV-3感染过程两组鱼脾脏组织中TLR18、接头蛋白MyD88及相应配体TRAF6、下游因子IRF5及P65基因的表达模式,并分析其在抗病镜鲤选育系F4中的相关抗病机制。结果显示： TLR18、MyD88、TRAF6、IRF5基因在两组鱼间均呈先上升后下降并趋于平稳趋势,在48h达到最高,而P65基因在未选育组呈先上升后下降并恢复初始水平趋势,在48h达到最高,在选育组呈下降后恢复初始水平趋势。在未感染CyHV-3时,TLR18与IRF5基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组,MyD88、TRAF6与P65基因相对表达量在选育组极显著高于未选育组;到CyHV-3感染早期,TLR18与P65基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组,MyD88、TRAF6及IRF5基因相对表达量在选育组显著高于未选育组。推测在CyHV-3感染过程中,TLR18基因通过依赖MyD88途径产生IRF5基因清除病毒的同时激活NF-κB信号通路,且选育组较未选育组通过产生较多IRF5基因清除病毒,而未选育组较选育组显著激活NF-κB信号通路产生相关炎症因子,这可能与选育组抗病性及抗病机制有关。该结果不仅验证了选育组在机体基础水平及先天免疫过程中对CyHV-3抗性的增强,还为深入研究选育组抗病机制及鱼类TLRs在病毒感染过程中的作用及其相关信号通路奠定基础。     

大鳞鲃鱼同工酶的研究

本实验采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了大鳞鲃鱼的肝、肾、眼3种组织中的醋酶（EST）、淀粉酶（AMY）、乳脱酸氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）4种同工酶。结果表明各种同工酶具有明显的组织特异性,肝脏酶活性最高,具有所有酶带。     

鲤疱疹病毒Ⅲ型(CyHV-3)诱导鲤肝组织自噬发生的研究

在鲤(Cyprinus carpio)感染鲤疱疹病毒Ⅲ型(CyHV-3)不同时期,通过分析鲤疱疹病毒标志基因TK和ORF72与自噬标志基因Beclin-1、LC3、P62的差异表达情况,探讨在CyHV-3感染中自噬的发生情况。研究表明:(1)抗病选育组与未选育组鲤TK和ORF72基因以及自噬标志因子Beclin-1、LC3、P62基因相对表达量均呈现先升高后降低的趋势; TK和ORF72基因相对表达量选育组均极显著低于未选育组(P<0.01)且在感染144 h达到最高;(2)选育组鲤Beclin-1、LC3、P62基因相对表达量在感染48h达到最高,且Beclin-1、LC3基因表达量极显著高于未选育组(P<0.001),P62显著高于未选育组(P<0.05);(3)未选育组鲤Beclin-1、LC3、P62基因相对表达量在感染96h达到最高且极显著高于选育组(P<0.001),而P62基因相对表达量持续在感染144h、192h极显著高于选育组(P<0.01),说明P62基因表达发生了聚集;(4) LC3蛋白表达趋势与基因相对表达量趋势一致。以上结果表明C...