鄱阳湖与青海湖地区野鸟H9N2亚型禽流感病毒的生物学特性

为了解我国野鸟中H9N2亚型禽流感病毒的分布与特征,2015—2016年对鄱阳湖与青海湖地区野鸟中的H9N2病毒进行监测,结果共分离到12株H9N2亚型禽流感病毒。对分离的病毒进行HA和NA基因序列测定、受体分析和SPF鸡、Balb/c小鼠的感染性试验,结果显示:12个分离株的HA裂解位点基序均为PSRSSR/GLF,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;HA蛋白受体结合位点处第226位氨基酸残基为亮氨酸(L),具有结合人样流感病毒受体的分子特征;受体结合试验表明,分离毒株既能结合禽样受体,也能结合人样受体;SPF鸡攻毒试验表明,分离株为低致病性毒株;Balb/c小鼠的感染性试验表明,分离株只在小鼠的上呼吸道鼻甲和肺中有限复制,未见明显临床症状。     

H9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速准确检测H9亚型禽流感病毒基因的检测方法,根据GenBank中H9亚型禽流感病毒血凝素编码基因进行荧光检测引物和探针设计,建立了一种针对H9亚型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测方法。利用该方法进行灵敏度和特异性检测,并用本方法和国家标准中的荧光RT-PCR检测方法,同时对临床样本进行检测。结果显示,仅H9亚型禽流感病毒出现了正常荧光检测曲线,而其他病毒及阴性对照均未出现;检测灵敏度为RNA终浓度10~(-4) ng/μL(1.30×10~4 copies/μL);临床样本检测结果与国标方法一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高,可用于H9亚型禽流感病毒检测。     

高通量测序技术检测鸽群中病毒感染状况

为了解我国鸽子病毒感染状况,采用高通量测序方法,对华东地区肉鸽携带的病原进行了检测,共检测到5种主要感染病原,包括禽轮状病毒、鸽圆环病毒、鸽星状病毒、鸽冠状病毒和鸽微RNA病毒B。除鸽圆环病毒外,其余4种病毒均在我国鸽群中首次被发现。该检测结果对我国的鸽群疫病监测和防控具有重要意义,同时证实高通量技术能够检测出动物群体中的主要感染病原,是动物疫病检测的新思路,有利于全面掌握动物病原感染状况,及时预警、处置和防控动物疫病的发生。     

禽星状病毒研究进展

禽星状病毒（avian astrovirus,AAstV）属于星状病毒科,包含多种亚型,可以引发禽肾炎、鸭肝炎以及火鸡腹泻等多种疾病,禽类感染后表现生长发育迟缓、产蛋下降,严重时可导致死亡,给养殖业造成一定的损失。此外,AAstV具有感染人的潜在风险。目前AAstV的致病机理暂不清楚,只有火鸡星状病毒引发肠炎的致病机制可作为参考。许多方法已用于AAstV检测,如电镜检测、酶联免疫吸附试验、细胞培养和病毒分离以及分子技术检测等。AAstV亚型较多,疫苗和药物研发存在较大难度,给该病防治带来一定的挑战。本文围绕AAstV的病原学、国内外流行情况、感染后临床症状及致病机制以及检测方法和控制措施等进行了综述,以期为后期进一步研究提供参考。     

等温扩增技术概述及其在动物病原检测中的应用

等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行体外核酸扩增的技术,近几年其研究热度很高。本文从技术原理、优缺点及在动物病原检测应用等方面,对环介导等温扩增技术（LAMP）、重组酶等温扩增技术、依赖核酸序列扩增技术（NASBA）、交叉引物等温扩增技术（CPA）和赖解旋酶等温扩增技术（HDA）等5种常见等温扩增技术进行了综述。LAMP技术操作简单,不依赖特殊设备,但引物设计较为复杂,研发多重LAMP检测方法有很大困难。重组酶等温扩增技术不受场地条件约束,扩增时间短,但容易造成气溶胶污染,因此一般用于实验研究。NASBA技术扩增效率高,不易产生污染,但成本偏高,操作相对复杂,在目前疫病检测研究中的应用逐渐减少。CPA技术操作相对简单,灵敏度高,特异性好,但结果判断受主观因素影响易造成假阳性或假阴性。HDA技术引物设计相对简单,但反应体系较为复杂,因此不适合扩增长序列。不同的等温扩增技术需要根据实际需求和场景条件来选择。等温扩增技术作为一种新兴技术具备许多优点,但仍需要不断改进,未来与微流体芯片、纳米金、CRISPR等技术联合应用,将会实现更加快捷、准确、简便的检测,从而为动物疫病检测提供更好的服务。     

我国部分地区H1亚型禽流感病毒分子流行病学分析

[目的] 国内外对于H1亚型禽流感病毒缺乏系统的流行病学调查,对其流行状况和风险知之甚少。本研究旨在通过根据流行病学调查,分析该病毒流行状况和风险。[方法] 2011–2013年间,在中国系统地开展了7次H1亚型禽流感病毒流行病学调查,共从24省（自治区、直辖市）949个场点采集38435份禽拭子样品,进行病毒分离、RT-PCR、序列测定等。[结果] 共检出H1亚型禽流感病毒12株（5株H1N2、3株H1N3和4株H1N8）,样品总阳性率为0.03%,鸡、鸽、鸭、鹅样品阳性率分别为0.00%（0/28786）、0.00%（0/646）、0.19%（11/5793）和0.06%（1/1131）。基因序列表明,这些病毒均属于东半球分支,均为低致病性禽流感病毒,且仅结合禽型受体。[结论]中国H1亚型禽流感病毒在家禽中感染率较低,主要分布在水禽中,未发现易于结合人型受体的突变,提示H1亚型禽流感病毒对中国家禽和公共卫生威胁较小。     

H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析

为深入了解我国H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原性变异情况及其规律,对我国2012—2015年分离的H5亚型高致病性禽流感病毒进行了HA基因的扩增、测序与遗传进化分析。结果发现这些流行毒株主要分布在第2.3.2.1分支、第2.3.4.4分支和第7.2分支。制备流行毒株的单因子阳性血清,与相应疫苗株进行交叉血凝抑制试验,计算抗原相关系数,并对各分支流行毒与相应疫苗之间的HA1主要抗原位点差异进行分析。结果表明,Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8疫苗株之间的血凝抑制抗原相关系数在0.17~0.67之间,表明不同分支之间的抗原性有较大差异。随着时间的推移,分支内流行毒与疫苗之间的血凝抑制抗原相关性差异会越来越大,抗原性变异程度增加,这与HA1主要抗原位点差异分析的结果一致。因此,要取得理想的防控效果,必须及时更新疫苗,使用与流行毒匹配性更好的疫苗。这些数据为深入了解H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原变异和对该病毒的防控提供了技术支持。     

临床样本中水貂嵌杯病毒的全基因组分析

为分析水貂嵌杯病毒中国株的特性,采用高通量测序方法测定青岛某养殖场检测的水貂嵌杯病毒的基因组,并对其进行特性分析与比较基因组研究。结果显示,该病毒全基因大小为8 427bp,具有与其他嵌杯病毒相似的结构和基因顺序,5′端具有帽子结构,3′端具有A尾,其与19株代表性毒株的全基因组和衣壳蛋白氨基酸序列同源性分析都证实该病毒与我国2011年报道的水貂嵌杯病毒同源性高,BLAST进一步确认该病毒不属水貂肠道嵌杯病毒,分析结果也对了解嵌杯病毒中各种未分属病毒的分类提供参考。     

H5、H7和H9亚型禽流感病毒四重荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

旨在提高对禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）检测效率，及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域，设计并合成了相关探针和引物，建立了禽流感病毒（AIV）四重荧光RT-PCR检测方法，该方法可在检测禽流感病毒（AIV）的同时，确定病原是否为H5、H7和H9亚型。结果显示，该检测方法耗时短、特异性好、检测下限达到10^-5 ng·μL^-1。采用该方法检测临床采集的13个活禽交易市场的384份禽咽喉和泄殖腔双拭子样品，经检测，其中有60份样品为流感病毒阳性，且全部是H9亚型，该结果与行业标准方法（NY/T 772—2013）检测结果一致，κ值为1（P<0.001）。本方法能实现对禽流感病毒及H5、H7和H9亚型的高通量快速检测，将在AIV快速检测中发挥重要作用。