猪A组轮状病毒Vp4全基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR技术，从猪A组轮状病毒总RNA中扩增了2331bp的Vp4全基因，通过T-A克隆技术，将PCR产物克隆至克隆载体pCEM-T中，转化至受体菌株JM109中，通过质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR、序列测定等方法鉴定，构建出重组阳性克隆质粒pCEM-T-Vp4。经DNASTAR软件分析核苷酸和氨基酸序列，结果显示该实验株与黑龙江株和美国株的同源性最高，均达到99％以上，并具有轮状病毒Vp4全基因的抗原表位区。     

重组基因工程乳酸菌的研究进展

乳酸菌作为人和动物体内的正常菌群,具有诸多益生功能.随着分子生物学研究的不断深入,重组基因工程乳酸菌研究取得了较快进展.在构建表达外源功能性基因的重组基因工程乳酸菌、表达保护性抗原蛋白质用以递呈黏膜免疫抗原的过程中,乳酸菌质粒载体起到了至关重要的作用.电转化技术的应用,简化了操作过程,推动了重组基因工程乳酸菌的研究与应用.     

供给侧结构性改革下渝北区土地储备制度转型研究

供给侧结构性改革是我国当前形势下主要研究课题。土地储备制度转型是土地供给侧结构性改革的重要内容之一,选取重庆市渝北区土地储备数据,实例阐述土地储备在城市发展、土地升值、用地结构调整等方面发挥的重要作用,分析土地储备存在的开发滞后、存量储备年度积压、储备结构不合理等问题,从具体落实"三去一降一补"5个方面提出土地储备制度供给侧结构性改革建议:规范储备机构,严格储备机制;加强储备计划管理,提高年度有效供应;多渠道筹集资金,加强风险预警;优化储备程序,去除冗余成本;创新储备制度,强化科学管理。     

限量哺乳诱导泌乳母猪发情受精和对仔猪性能的影响

试验由126头带仔母猪及所带仔猪组成7个试验小组,从分娩后21天开始进行限量哺乳(LN),目的是观测限量哺乳对母猪在泌乳期中的发情、受胎率以及对仔猪生产性能的影响情况。试验分两期进行,前三个试验小组为一个试验期,组内二分之一的母猪每天给自己的仔猪哺乳4次,每次30分钟,持续12天;后4个试验小组为一个试验期,组内二分之一的母猪先每天给自己的仔猪哺乳4次3天,后每天哺乳3次4天(限量哺乳7天);两个试验期剩余的母猪按常规哺乳。所有仔猪限量哺乳期结束时全部断奶。结果前3个试验小组内26头限量哺乳的母猪有8头在断奶以前发情,常规哺乳的泌乳期未发现发情的母猪(p<0.01),限量哺乳和常规哺乳的母猪从断奶到再配种的平均间隔时间是1.7天和6.6天(p<0.01);后4个试验小组内37头限量哺乳的母猪有5头断奶前发情,常规哺乳的泌乳期也没有发现有发情的母猪(p<0.07),限量和常规哺乳的母猪从断奶到发情的平均间隔时间是3.3天和4.3天(p<0.05);母猪的受胎情况:虽限量哺乳期和哺乳方法不同,但母猪受胎率都差不多。仔猪性能:主要研究了仔猪断奶及断奶后14天的增重情况和限量哺乳期仔猪补料的摄入情况,结果试验期母猪限量哺乳养育的仔猪比常规哺乳养育的仔猪增重低(p<0.01)、饲料摄入量多(p<0.01)。断奶后,前3个试验小组限量哺乳养育的仔猪比常规哺乳养育的仔猪增重快(p<0.05),后4个试验小组内限量哺乳和常规哺乳养育的仔猪增重情况却差不多。整个试验中不同限量哺乳期及不同哺乳方法哺育的仔猪死亡情况也基本相同。     

4味常见中药对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道菌群的影响

试验旨在研究4味中药对免疫抑制小鼠免疫功能和肠道菌群的影响,选取70只6周龄雌性昆明小鼠(18～20g),随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、玉屏风组、乌梅组、蒲公英组、党参组、石榴皮组。采用环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建免疫抑制病理模型,从喂药的第3天起,2～7组以75mg/kg体重腹腔注射Cy,每隔1天注射1次,共注射4次,注射期间正常给药,模型组灌胃0.9%生理盐水,直至停止注射Cy的第2天,共给药7d。检测4味中药对免疫抑制小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血液指标、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、IgG及肠道菌群的影响。结果显示,与模型组相比,党参、乌梅、蒲公英、石榴皮可显著提高免疫抑制小鼠体重(P<0.05),其中乌梅组效果最好;显著提高免疫抑制小鼠免疫器官指数(P<0.05),但不能达到正常水平,其中蒲公英组脾脏指数最高;各中药组可提高白细胞数目(WBC)、显著提高红细胞数目(RBC)(P<0.05),但不能达到正常水平;各中药组可显著提高免疫球蛋白数量(P<0.05),党参组sIgA、IgG显著高于空白对照组(P<0.05),且和玉屏风组差异不显著(P>0.05);各中药组可显著降低大肠杆菌数量(P<0.05),显著增加双歧杆菌和乳酸杆菌数量(P<0.05),提高免疫抑制小鼠肠道菌群的丰富性和多样性,其中党参和蒲公英组小鼠肠道菌群的丰富度和多样性较好。综上说述,乌梅、蒲公英、石榴皮、党参均能够颉颃Cy对小鼠体重、免疫功能及肠道菌群的影响,可用于免疫增强类药物的开发。     

4味常见中药对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道菌群的影响

试验旨在研究4味中药对免疫抑制小鼠免疫功能和肠道菌群的影响,选取70只6周龄雌性昆明小鼠(18～20g),随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、玉屏风组、乌梅组、蒲公英组、党参组、石榴皮组。采用环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建免疫抑制病理模型,从喂药的第3天起,2～7组以75mg/kg体重腹腔注射Cy,每隔1天注射1次,共注射4次,注射期间正常给药,模型组灌胃0.9%生理盐水,直至停止注射Cy的第2天,共给药7d。检测4味中药对免疫抑制小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血液指标、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、IgG及肠道菌群的影响。结果显示,与模型组相比,党参、乌梅、蒲公英、石榴皮可显著提高免疫抑制小鼠体重(P0.05),其中乌梅组效果最好;显著提高免疫抑制小鼠免疫器官指数(P0.05),但不能达到正常水平,其中蒲公英组脾脏指数最高;各中药组可提高白细胞数目(WBC)、显著提高红细胞数目(RBC)(P0.05),但不能达到正常水平;各中药组可显著提高免疫球蛋白数量(P0.05),党参组sIgA、IgG显著高于空白对照组(P0.05),且和玉屏风组差异不显著(P0.05);各中药组可显著降低大肠杆菌数量(P0.05),显著增加双歧杆菌和乳酸杆菌数量(P0.05),提高免疫抑制小鼠肠道菌群的丰富性和多样性,其中党参和蒲公英组小鼠肠道菌群的丰富度和多样性较好。综上说述,乌梅、蒲公英、石榴皮、党参均能够颉颃Cy对小鼠体重、免疫功能及肠道菌群的影响,可用于免疫增强类药物的开发。     

犬种布鲁氏菌研究进展

犬种布鲁氏菌属于6个经典种布鲁氏菌之一，为天然粗糙型，毒力较弱。长期以来，由于犬种布鲁氏菌对人类致病性较低，其危害一直被忽视。自1966年在美国发现该菌以来，已传播至世界多地。近年来，随着养犬业的不断发展及宠物犬数量的增多，犬布鲁氏菌病发病率不断上升，在某些地区已成为流行性疫病，且对人类公共卫生安全的威胁也日益加重。目前，犬种布鲁氏菌感染导致的犬布鲁氏菌病尚无可靠的诊断方法及有效的疫苗。鉴于此，在查阅相关文献的基础上，笔者对犬种布鲁氏菌的病原学、流行病学、致病机理、检测方法、疫苗研究等方面的相关研究进展进行综述，以期为犬布鲁氏菌病的深入研究和防控提供参考。     

猪A组轮状病毒Vp4基因与乳酸菌双标记表达载体的重组及其原核表达

用Sal Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切克隆质粒pGEM-T-Vp4和(以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)及红霉素基因(Erythromycin)为选择压力的双标记的可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的)质粒载体pW425et,并将纯化回收的Vp4基因亚克隆至表达载体pW425et中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425et-VpC,并将pW425et-Vp4分别转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coli X13和乳酸杆菌感受态中,经生长功能弥补筛选阳性克隆,SDS-PAGE分析,可见约87 ku的融合蛋白.Western-blot分析结果表明,该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性.     

鸡球虫重组活载体疫苗研究进展

对细菌和病毒为载体的鸡球虫重组活载体疫苗研究进行了综述,旨在为鸡球虫病的免疫预防提供新思路和参考.     

猪源A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌的制备及其免疫原性分析

为了解猪轮状病毒(RV)Vp4基因工程乳酸菌口服免疫小鼠是否能产生有效的免疫保护作用,本研究应用电转化技术将猪源A组RV重组质粒pW425et-Vp4转化至嗜酸乳杆菌中,重组菌经SDS-PAGE分析可见约87 ku的重组蛋白.Western blot分析表明该蛋白能与猪RV多克隆抗体反应.大量培养pW425et-Vp4乳酸菌,经离心加入灭菌脱脂乳液给BALB/c小鼠灌服;应用ELISA方法检测血清抗体水平,试剂盒检测肠黏膜SIgA水平,最后进行小鼠免疫保护性试验.结果表明pW425et-Vp4乳酸菌能增强小鼠的黏膜免疫反应,对猪PV强毒株的攻击具有一定的保护作用,为下一步在猪体内进行试验奠定基础.