猪肌肉生长抑制素(MSTN)前肽定点突变载体的构建及其原核表达

肌肉生长抑制素(MSTN)能够限制肌纤维的增粗增大,而突变的肌肉生长抑制素前肽(Pro-MSTN-D75A)能阻止MSTN与相应受体的结合,从而解除MSTN对肌纤维的抑制作用。猪是我国最重要的肉用家畜,通过操作MSTN提高其瘦肉产量,将对我国生猪生产具有特殊意义。本研究用通城猪妊娠3个月的胚胎为材料,提取背最长肌RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增猪MSTN前肽cDNA序列(不含信号肽),并将其连接到原核表达载体pGEX-6p-1上。通过定点突变将编码天冬氨酸的密码子变为丙氨酸密码子(D75A),构建了原核表达载体pGEX-ProM(SP-)和pGEX-ProM(SP-)D75A。重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21感受态细胞并经IPTG诱导表达,结果表明,转化pGEX-ProM(SP-)质粒的E.coliBL21工程菌用终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导5h表达情况最好;而转化pGEX-ProM(SP-)D75A的工程菌在1mmol/L的IPTG诱导6h的条件下表达情况最好。用GST-Trap蛋白纯化系统纯化回收总分子量大小约为51kD融合蛋白(GST蛋白标签分子量为26kD,MSTN前肽蛋白分子量为25kD)。纯化蛋白的浓度ProM(-SP)为1.87mg/mL,ProM(-SP)D75A为1.21mg/mL。本研究建立了大肠杆菌表达猪MSTN前肽的最佳条件,提高了生产效率,并为研究MSTN前肽在动物体内的生物学功能以及制备单克隆抗体提供基础资料。     

可溶性玉米须多糖的提取与纯化

本试验采用水提醇沉法提取玉米须多糖,在不同的煎煮时间、提取温度、水料比条件下,探索最佳提取条件。并用不同体积的乙醇沉淀多糖,得出最佳醇沉体积比。水提后的玉米须残渣用β-葡聚糖酶和木聚糖酶酶解提取,比较用不同的酶量酶解条件下的最适提取条件,提取的粗多糖用三氯乙酸(TCA)法除多糖蛋白,用紫外扫描检验蛋白是否除尽。结果表明,玉米须多糖提取的最佳条件为:80min、80℃、18倍的水料比、2.5倍体积乙醇沉淀效果最佳;3%浓度的TCA溶液除蛋白质效果最好;通过紫外扫描检测纯化样品表明糖结合蛋白基本除尽。     

纤维素酶酶解小麦麸皮技术初步研究

本实验采用还原糖法研究了不同酶解时间、温度、pH值及酶浓度条件对纤维素酶酶解小麦麸皮效果的影响。结果表明,纤维素酶酶解小麦麸皮的最适条件为:酶解时间15min,温度37℃,pH值6,最适酶浓度0.04IU/mL。     

转基因食品(饲料)的安全性评价

随着转基因技术的广泛应用，转基因植物的种植面积也在迅速扩大，而且这些作物都与人类的食物和动物的饲料密切相关。近年来，转基因生物安全性问题越来越引起人们的关切和重视。最新数据表明，目前美国超市的食品有７０％与转基因生物有关。而且，不论对转基因生物学相对保守的欧洲，还是在相对开放的美国，大众对于转基因生物学有关食品的选择都日益谨慎。１食品、食品成分安全性分析原则１．１安全性分析的内容１．１．１基因供体包括其来源、分类、学名；与其它物种的关系；作为食品食用的历史；含有毒物的历史；过敏性；传染性（微生物…     

饲用β—葡聚糖酶活力测定需注意的几个问题

随着微生物发酵技术(包括菌种选育和发酵设备)的快速发展,饲用β-葡聚糖酶制剂得到了广泛应用。国内外大量研究报道了它们在充分利用饲料营养价值、减少水状粘液粪便排放、改善畜禽生产性能和缓解仔猪断奶应激方面均发挥了积极作用。然而,饲用β-葡聚糖酶制剂的质量度量问题引起了饲料界的广泛关注。笔者调查了     

菌体蛋白饲料的安全性问题

蛋白质是动物生长的必需的营养物质。目前,饲料中广泛使用的蛋白质原料有鱼粉、饼粕类等。但进口鱼粉价格昂贵以及搀假行为等,使鱼粉的使用受到限制;同时植物性蛋白也无法完全替代动物性蛋白。菌体蛋白作为一种动物蛋白源,除了具有价格优势以外,还含有有益菌、外源性消化酶和及未知生长因子,具有易于消化吸收和免疫功能等。但是,在使用菌体蛋白作为蛋白质饲料时,其安全性是值得注意的一个问题。目前使用的微生物菌体蛋白产品为多菌种的混合物,所以,对微生物菌种的监控是保证产品安全的关键。其次,因基因重组等高新技术在菌种改良中的应用,对…     

纤维素酶的酶学性质研究

本试验采用DNS法对一种微生物产纤维素酶的酶学性质进行了研究。结果表明:酶作用的最适温度和pH值分别为37℃和5.5。该酶是一种耐热酶,在有底物保护条件下,酶的热稳定性可大幅度提高。酶的pH稳定性范围为5.0～7.0。金属离子Ba2 、K 对酶都有激活作用,Cu2 、Ca2 、Fe3 、Mn2 、Zn2 、Fe2 对酶起抑制作用。该酶对纤维素类底物具有较强的分解作用,对茶叶多糖分解能力较弱。     

特异腐质霉Humicola insolens(YH-8)纤维素酶的催化性质研究

对诱变后的特异腐质霉Humicolainsolens(YH-8)纤维素酶的催化性质进行了研究。结果表明:该酶的最适催化温度和pH值分别为65℃和6.0,在50℃以下酶的稳定性较好,70℃条件下底物对酶有较强的保护作用,该酶的pH稳定性范围为6.0￣9.0,Zn2 、K 、Li 对酶活有促进作用,Mn2 、Ca2 、Mg2 、Co2 、Fe2 、Fe3 对酶活起抑制作用,其中Fe3 对酶的抑制作用非常强,酶对CMC和水杨素有分解作用,而几乎不分解脱脂棉、微晶纤维素和滤纸。