非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立

【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具...     

禽干扰素基因工程表达技术研究进展

干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白(主要是糖蛋白),是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。根据干扰素产生的来源和结构不同可分为α干扰素、β干扰素和γ干扰素三类。研究发现干扰素通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制病毒的复制,同时它还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力,从而起到免疫调节作用,并增强抗病毒能力。由于干扰素几乎能抵抗所有病毒引起的感染,加     

城市化进程对耕地面积变化的影响——以甘肃省和江苏省为例

城市化是工业化发展的必然要求和必然结果,是人口非农化、经济非农化发展的一个过程,也是土地非农化的过程。文章以甘肃省和江苏省为例,运用相关系数和回归分析模型对我国城市化水平和耕地面积的关系进行了分析,得出在不同地区和不同阶段城市化水平和耕地面积的关系有不同的表现,但要协调好两者的关系,根本在于加快城市化进程,走集约利用土地的道路。     

伊敏露天煤矿排土场坡面水蚀特征研究

本文以伊敏露天煤矿排土场为研究对象,对露天煤矿的3个排土场坡面(内排土场、沿帮排土场、西排土场)的侵蚀沟、地表糙度、容重、植被进行详细的调查,在一定的条件下对比分析各排土场的侵蚀状况和恢复情况。实验结果表明:伊敏露天煤矿排土场坡面侵蚀较为严重,排土场的水土流失(水蚀)主要受容重、地表糙度、植被覆盖度和植被类型4个因素影响,且植被覆盖度、植被类型等可变因子对排土场坡面水土流失影响程度最为明显。     

荒漠化监测与评价研究进展

随着全球环境问题的日益恶化,荒漠化越来越引起国际社会的关注,进行荒漠化动态监测与评价具有重要的现实意义。本文综合阐述了国内外荒漠化动态监测、评价及其评价信息系统等方面的研究成果,提出了荒漠化监测与评价研究的发展趋势。     

不同垫料发酵床养猪效果研究

旨在探明不同垫料发酵床对猪的免疫功能及生长性能的影响.将40头猪随机分为4组,每组10头,第1组是以粉碎玉米秸秆为主的发酵床饲喂组(玉米秸组);第2组是以花生壳为主的发酵床饲喂组(花生壳组);第3组是以锯末为主的发酵床饲喂组(锯末组);第4组为常规水泥地面饲喂组(对照组).各组均注射猪瘟、猪蓝耳、猪伪狂犬疫苗防疫,并按常规方法饲养,试验期为60d.实验期末测定每头猪增重率、血清抗体阳性率、血液中血红蛋白、淋巴细胞数量和红细胞总数、γ-IFN和IL-4含量.结果表明,饲喂至60d时,第1、2、3组猪的增重率分别比对照组高4.66％、7.16％、3.56％,均差异显著(P＜0.05);第1、2、3组猪的抗体阳性率均高于对照组,且第2和3组阳性率显著高于对照组(P＜0.05);血液中血红蛋白含量、淋巴细胞数量和红细胞总数第1组均低于对照组,第2、3组均高于对照组,均无显著差异(P＞0.05);第1、2、3组猪血清中γ-IFN和IL-4含量均高于对照组,但均无显著差异(P＞0.05).不同垫料的发酵床饲养组较常规水泥地面饲养组均能够提高猪的生长性能及免疫效果,且利用玉米秸秆和花生壳作为发酵床垫料能够明显提高猪的增重率和饲料利用率,该研究结果为发酵床养猪技术的推广及应用提供了理论依据和技术支持.     

不同来源沙门菌入侵基因invH的检测及序列分析

根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。     

禽网状内皮组织增殖病的研究进展

禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis RE)是由反转录病毒科中的禽网状内皮组织增殖病病毒(RE Virus REV)引起的鸡、鸭、火鸡和其他     

常见家兔养殖消毒误区

消毒是指用物理的、化学的和生物的方法消灭病原微生物,其目的是消灭外界环境中的病原体,以切断传播途径,阻止疫病继续蔓延,是预防兔场发病