影响转基因绵羊胚胎移植受胎率的因素

为了提高并稳定转基因胚胎移植受胎率,对可能影响受胎率的供受体同期化程度、移植胚胎数量、受体处理方式、胚胎发育速度、受体注射黄体酮、供体作受体等6个方面进行研究。结果表明,(1)供受体发情时间差在±12h以内,不影响受胎率(P>0.05);(2)每只受体移植2～3枚转基因胚胎的受胎率极显著高于移植1枚的受胎率(P<0.01);(3)在繁殖季节里,受体采用自然发情、肌肉注射PGF2α、肌肉注射PMSG+PGF2α等方式,三者受胎率间差异不显著(P>0.05);(4)发育迟缓的胚胎移植后,受胎率显著低于正常发育胚胎的受胎率(P<0.01);(5)移植后的受体注射2mg黄体酮,不能提高受胎率(P>0.05);(6)供体当作受体使用,不影响受胎率(P>0.05)。     

IGF-I对绵羊冷冻精液质量的影响

[目的]探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ⅰ添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础.[方法]以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/mL)的IGF-Ⅰ,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果.[结果]Ⅱ组(IGF-Ⅰ添加浓度100 ng/mL)的冷冻精液解冻孵育0、1和2h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P＜0.05).体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P＞0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组.[结论]绵羊冻精稀释液中添加IGF-Ⅰ可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1h内完成相关操作.     

非繁殖季节未断奶母羊诱导诱导发情的研究

非繁殖季节母羊的诱导发情技术是工厂化高效养羊生产体系中的关键技术,正在生产中被逐渐推广.由于非繁殖季节诱导发情效果除受季节、品种、年龄、营养的影响外,还受所用激素的种类、剂量、用药方案及处理母羊所处生理状态的影响.本次试验目的在于探索一种同期发情效果好、经济实用的同期发情处理方法.从而使处于乏情期的产后不久的母羊,按生产者的要求,充分利用、有计划的发情,做到全年均衡性商品羊生产.     

不同因素对牛体外受精效果的影响

比较公牛个体、精子密度、精卵比例、受精前机械脱除卵丘细胞及胚胎培养液体积对体外受精效果的影响。结果表明:不同公牛个体的精子受精的卵裂率差异不显著(P>0.05),但囊胚率受到极显著的影响(52.24%vs28.13%,P<0.01);精子密度在(0.5~1.5)×106/mL间的卵裂率和囊胚率差异都不显著(P>0.05),但精子密度在0.25×106个/mL时的卵裂率显著低于其他3个试验组(52.17%vs91.23%,P<0.05);受精时,精卵比控制在2 000~10 000∶1之间,受精卵的卵裂率、囊胚率均无差异(P>0.05);受精前机械脱除卵丘细胞对受精效果没有影响(45.21%vs36.46%,P>0.05);每枚胚胎培养液体积在2.5~10μL之间的群体培养,对受精胚的发育没有显著影响(51.39%vs35.06%,P>0.05)。     

杜泊羊体外胚胎生产效率的影响因素

为了将绵羊体外胚胎发育技术应用于生产,采用活体采卵-体外受精的方法,对准备淘汰的杜泊羊进行外源激素处理,并对可能影响体外胚胎发育及移植后受胎效率如FSH剂量、公羊个体、获取卵母细胞方式等因素进行研究,结果发现:(1)每只供体注射FSH 240IU或420IU剂量对获得卵母细胞数、胚胎数及体外受精卵裂率没有明显影响(P0.05);(2)不同公羊个体对卵母细胞体外受精效率有显著影响,但胚胎移植后受胎率没有明显影响(P0.05);(3)活体采卵与屠宰场采卵方式相比,对卵母细胞的回收没有影响(12.24vs 13.84,P0.05),但活体采集卵母细胞受精后的平均胚胎数显著低于后者(7.50vs 11.17,P0.05),卵裂率极显著低于屠宰场采卵方式(60.92%vs 81.75%,P0.01);(4)上述几组试验对受胎率都没有影响(P0.05)。由此可见,供体使用240IU的FSH,选择受精效率好的公羊,能显著提高杜泊羊体外胚胎生产效率;离体采集卵母细胞体外发育效率高于活体采卵。     

不同因素对绵羊卵母细胞体外受精效果的影响

本试验研究了发情羊血清、不同个体的冷冻精液和新鲜精液、精子密度、受精时颗粒细胞的有无及不同培养液对绵羊体外受精效果的影响。结果表明,发情3d的血清与发情当天的血清相比,对卵裂率和囊胚率有极显著的影响(P0.01);不同个体的冷冻精子对卵裂率和囊胚率都有显著的影响(P0.05),但鲜精和冷冻精子的受精效果与个体有关;精子密度在2×106～6×106个/mL之间对受精效果没有影响(P0.05);颗粒细胞对受精的作用不明显(P0.05);不同的培养液对受精效果没有显著影响(P0.05)。因此,选用好的公羊个体精子,用发情3d的发情羊血清能显著提高受精效果。     

阿勒泰羊FKBP5基因的克隆及其在组织中的表达

【目的】研究FKBP5基因和蛋白在绵阿勒泰羊不同组织、不同卵泡发育时期中的表达和定位情况。【方法】利用PCR法扩增获得阿勒泰羊FKBP5基因CDS区全长序列,并构建分子系统进化树;利用Real-time qPCR和Western Blot检测阿勒泰羊卵巢等不同器官和组织中FKBP5基因和蛋白的表达量;利用Real-time qPCR技术检测FKBP5基因在阿勒泰羊不同大小卵泡及黄体中的表达情况;利用免疫组化技术检测FKBP5蛋白在阿勒泰羊卵巢中的表达定位。【结果】阿勒泰羊FKBP5基因CDS区序列全长1390 bp,编码462个氨基酸;绵羊与山羊和牛的亲缘关系较近,与鸡(禽类)亲缘关系较远;FKBP5基因和蛋白在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、子宫、卵巢、输卵管和睾丸中均有表达,其中在输卵管中表达量最高,接下来依次是肝脏、脾脏、子宫、卵巢和睾丸等器官和组织,在心脏、肺和肾脏中表达量较低;FKBP5基因在大卵泡中的表达量最高,且极显著高于卵巢、小卵泡和黄体(P<0.01),其次是卵巢和小卵泡,在黄体中表达量最低;FKBP5基因在大、小卵泡不同细胞中的表达情况略有不同。其在大卵泡膜细...     

新疆细毛羊超数排卵效果研究

[目的]提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2~8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材.[方法]分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案.[结果]不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P<0.01):1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P<0.01);FSH剂量在150~200 U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量( P>0.05):FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P<0.01).[结论]新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150~200 U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用.     

动物实验中显微操作针的制作

本文介绍了体细胞核移植、胞质内单精子注射等显微操作中所用针的种类（包括固定针、注射针、透明带切开法用的去核针和移核针以及一步法去核针）、制作方法及注意事项。     

绵羊凝血酶敏感因子1(TSP-1)基因的克隆及在不同生长时期卵泡中的表达

凝血酶敏感因子1(TSP-1)基因在模式动物中发挥着各种生物学功能,FSH诱导后羔羊TSP-1的表达显著下调,而成年羊在激素诱导前后则无显著变化。为探究TSP-1基因的序列结构及生物学功能,实验采用PCR扩增的方法获得阿勒泰羊TSP-1基因的CDS区全长,软件分析TSP-1基因的蛋白质序列及其功能区域,同时利用荧光定量PCR的方法检测5头1周岁阿勒泰羊10个组织中的表达情况。结果显示,TSP-1基因序列全长为3 519 bp,共编码1 172个氨基酸,与预测序列相比有2个无义突变。系统进化树分析表明绵羊与牛、野猪的遗传距离较近。TSP-1蛋白结构不稳定,不存在跨膜结构,有一个信号肽,可能存在6个N-糖基化位点、50个潜在O-糖基化位点以及44个潜在的磷酸化位点,与TSP-3蛋白含有2个长重复区、3个短重复区、6个C型Ga离子结合位点和一个N型Ga离子结合位点。TSP-1基因在阿勒泰羊7个组织中都有表达,随着卵泡直径的增大,TSP-1基因的表达也逐渐升高。试验结果推测TSP-1基因可能在绵羊卵泡发育中发挥重要作用。