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11.
番茄溃疡病菌PCR快速检测技术 总被引:2,自引:0,他引:2
番茄溃疡病是一种严重危害番茄生产的细菌性病害,许多国家将其列为检疫性病害。利用ITS通用引物扩增了番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)的ITS序列,并进行克隆测序。根据序列比较结果设计了引物BT1和BT2,该引物特异性好,能专一扩增出268bp电泳条带,而马铃薯环腐病菌等不同亚种、不同属的细菌及健康的番茄材料均无扩增条带。从接种但未显症番茄苗叶片及人工模拟染菌种子上提取总DNA,以此为模板均能稳定地扩增出特异性目的条带。该方法直接对种子或植株进行检测,不需进行病原菌分离培养,快速简便,适用于出入境检验检疫及种苗健康检测领域。 相似文献
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植原体病害研究进展及其检疫重要性朱水芳,赵宝庆,胡加彬,张祥林,张成良(农业部植物检疫实验所北京100029国家动植物检疫局郑州动植物检疫局乌鲁木齐动植物检疫局)1967年日本学者Doi首次发现了植原体(Phytoplasma)。因这类微生物类似于动... 相似文献
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以甘薯丛枝病试管苗病株为材料,用热处理结合茎尖培养法对甘薯丛枝病病株进行了去除植原体 的研究。结果表明,0. 5 mm以下茎尖培养可以去除植原体,茎尖越小,去除植原体的效果越好,但成苗率降低; 0.8 mm以上茎尖培养不能去除植原体,但是成苗率较高。(39±1)℃高温连续处理2~3周后,剥取茎尖培养可以 提高去除植原体的效率,对成苗率影响不大,热处理时间越长,去除植原体效果越好,但被处理的试管苗易死亡。甘 薯丛枝病试管苗在(39±1)℃高温下,以处理3周为宜。 相似文献
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中草药青蒿(Artemisia annua L.)的实时荧光PCR检测 总被引:1,自引:0,他引:1
中草药青蒿,学名黄花蒿(Artem isia annuaL.),属于中国独有的抗疟药用植物资源之一。根据蒿属植物rDNA ITS序列多态性设计TaqM an探针及引物,通过实时荧光PCR方法对黄花蒿进行检测。结果表明:该组探针-引物对黄花蒿有很强的特异性,除黄花蒿外,其余8种对照蒿属材料均未检测到荧光信号。该方法快速、简便、安全、准确,适用于黄花蒿的出入境检验。 相似文献
16.
泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches’-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane pro-tein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因。序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%。将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达。以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PaWB-AMPD抗血清。利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体。 相似文献
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本研究成功建立了玉米细菌性枯萎病菌的PCR检测方法.该方法根据细菌ITS序列的特异性,设计了对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定性点突变的特异性引物及探针,并对5株玉米细菌性枯萎病菌及18种植物原性细菌的DNA进行了PCR、实时荧光PCR及PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)检测.结果表明,几种方法特异性强,检测灵敏度均为菌液浓度102 cfu/mL,PCR-DHPLC技术具有检测成本较低、高通量、自动化程度高、污染风险小及鉴定结果准确等特点,能够满足快速、准确诊断玉米细菌性枯萎病菌的要求. 相似文献
20.
对表现叶片黄化的玉兰植株,利用植原体16S rRNA基因通用引物进行巢式PCR检测,得到1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定、分析及构建系统关系树.结果表明,该片段与16SrI组中的各植原体同源率均达到99%以上,而与其他组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于97%,认为该植原体株系为翠菊黄化植原体组中的成员之一. 相似文献