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[目的]构建携带人类端粒酶催化亚基基因(hTERT)的腺病毒载体并优化其包装条件,为进一步探究端粒酶与细胞重编程调控间的作用机理提供参考依据.[方法]利用腺病毒载体pAdEasy-1构建携带hTERT基因的重组腺病毒载体,分别采用脂质体法和电转法及不同浓度胎牛血清在HKE293A细胞中进行包装,筛选出最佳病毒包装条件,收集重组腺病毒rAd-hTERT并体外感染小鼠胎儿成纤维细胞,验证重组腺病毒rAd-hTERT的活性功能.[结果]以腺病毒载体pAdEasy-1为骨架质粒,成功构建获得携带hTERT基因的重组腺病毒载体(pAd-hTERT),其最佳病毒包装条件是采用脂质体法结合15%胎牛血清,此条件下收集获得的病毒滴度最高(1×1011 IFU/mL).以携带hTERT基因的腺病毒rAd-hTERT感染小鼠胎儿成纤维细胞72 h后,可扩增出片段大小约3450 bp的目的基因条带,即hTERT基因在小鼠胎儿成纤维细胞中成功表达.[结论]采用脂质体法结合15%胎牛血清包装获得的携带hTERT基因重组腺病毒具有较高病毒滴度,感染小鼠胎儿成纤维细胞能成功表达hTERT基因,进一步证实端粒酶具有蛋白功能的生物学活性. 相似文献
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端粒酶与体细胞重编程是当今生物界最热门的研究领域之一。研究端粒酶能揭示生物体胚胎早期发育、衰老和癌症发生的机制;细胞重编程则有望从根本上解决体细胞克隆技术问题,从而开启生命再造新时代。文章通过对端粒酶与体细胞重编程及二者互作机制的最新研究进展进行详细阐述,发现细胞重编程面临的主要问题是效率低下,其根本原因是对其作用机制尚未完全了解;而最新研究证实,生殖细胞的端粒酶活性发生时序性变化可能在胚胎发育及细胞重编程过程中发挥重要调控作用。因此,揭示细胞重编程机制是今后研究工作的重心,尤其是揭示端粒酶在胚胎发育过程的分子调控机理及端粒酶调控细胞重编程可能开启的信号通路,对提高细胞重编程效率,推进克隆动物的生产实践并开启生命再造,以及为治疗癌症等人类重大疾病具有重要意义。 相似文献
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自从改革开放以来,我国人民的生活水平显著提高,人们对食品安全及营养越来越重视。食品安全和食品营养是非常重要的,应该利用先进的检测技术全面检测食品的质量和安全。高效液相色谱法是一种非常有效且快速的检测技术,在食品领域被广泛应用,提高了食品检测的效率,在实际的食品安全和营养指标检测过程中发挥了重要的作用。文章阐述了食品安全营养问题和高效液相色谱的基本内容,并分析了高效液相色谱技术在食品安全及营养指标检测中的具体应用。 相似文献
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<正>养驴在我国具有悠久的历史,在数千年的农业生产中贡献巨大。但是随着时代的发展,养驴的目的性也逐渐发生了改变,人们最初养驴是由于驴有具较大的役用价值,可以在很大程度上节约农业生产中的人力投入。同时,驴还具有饲养难度小、耐粗饲、抗病能力强等优点,因此在我国各地具有广泛的养殖基础。但是近几十年,生产技术快速发展、农业生产机械化程度日益提高,进而导致毛驴这一传统的劳动力逐渐被机械所取代,我国毛驴养殖数量也从20世纪90年代的1100多万头锐减至目前的400多万头。与此同时,毛 相似文献
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分离鉴定三株中国东北地区PRRSV,对其主要结构蛋白GP5和M基因RT-PCR扩增和测序,同时对2006~2012年东北地区PRRSV毒株进行遗传变异分析.结果表明,三株东北地区PRRSV分离株均属于美洲型高致病性毒株,JilinTN2株和HH12株可能由JXA1变异而来,GP5基因变异较大,而M基因相对保守;一些氨基酸变异会改变GP5和M蛋白的二级结构;GP5蛋白中和表位Q40和L41的突变和诱骗表位L28的新突变在2011和2012年黑龙江省PRRSV毒株中被发现,33~37 aa处氨基酸的变异对潜在糖基化位点的数量和位置影响较大,可能会干扰中和抗体对紧随其后的中和表位识别,减少病毒中和抗体应答;GP5中PRRSV毒力关键住点的新突变在2012年分离株中被发现.文章揭示东北地区PRRSV流行毒株GP5基因的变异特征,PRRSV仍在不断发生变异,需针对GP5基因变异采取相应防控措施. 相似文献