高职院校"鸡新城疫抗体水平测定"技能大赛操作要点探索

由农业部主办的全国职业院校鸡新城疫抗体水平测定技能大赛赛项是高职院校中规模最大、水平最高、竞争最激烈的比赛项目之一。为了更好的提高学生的专业技能以及在以后的比赛中取得更突出的成绩,本文从实验器材的准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝(HA)实验、配制四单位病毒、血凝抑制(HI)实验和抗体滴度报告等六个操作环节进行了初步分析,以供从业者参考。     

山葡萄VaCIPK18原核表达与多克隆抗体制备

类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBLs)互作蛋白(CIPKs) 作为类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在植物响应非生物胁迫信号转导中起着重要作用。基于前期山葡萄响应低温胁迫转录组测序结果,发现低温胁迫引发的早期伤害及感知阶段的激酶基因中涉及CBL-CIPK 信号通路的VaCIPK18表达显著上调。为进一步研究山葡萄(Vitis amurensis)VaCIPK18激酶参与低温胁迫的功能,采用同源克隆获得了VaCIPK18基因,其开放阅读框为1 320 bp,编码439个氨基酸。基于对VaCIPK18蛋白生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位丰富的肽段,并将其C端调控结构域(230~439 aa)构建到原核表达载体pET28a-SUMO。将重组表达载体转化至大肠杆菌(E. coli Rosetta)中,经0.8 mmol·L^-1 IPTG、37℃诱导4 h表达出大小为42 kDa的包涵体蛋白。将重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得anti-VaCIPK18多克隆抗体,经检测具有高效价及特异性。Western Blot结果表明,该抗体可以与葡萄内源CIPK18特异性结合,且在50 kDa位置出现与预期一致的条带。同时,CIPK18在低温胁迫后葡萄叶片中蛋白表达水平与室温下相一致,但两种状态下均存在可能的磷酸化与泛素化修饰现象。本研究结果为进一步探究VaCIPK18的蛋白定位、表达及其功能奠定了基础。     

庐江县2020年不同镇鸡新城疫免疫抗体水平调查

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性接触性传染病,传染性极强,鸡各个年龄段均可感染,严重威胁鸡群的生存,造成巨大的经济损失。因此,需要在平时加强对鸡群免疫接种效果的检测。本论文对2019年庐江县11个乡镇共113份鸡血清进行新城疫抗体水平进行监测。血凝和血凝抑制试验实验结果表明新城疫抗体总体阳性率为92.9%。其中万山镇、矾山镇、盛桥镇、柯坦镇、龙桥镇、郭河镇和庐城镇的抗体阳性率为100%,乐桥镇和汤池镇的抗体阳性率为90%,金牛镇的抗体阳性率为88.89%,罗河镇的抗体阳性率为50%。抗体水平均一度来看,矾山镇的抗体整齐度最好,金牛镇的抗体整齐度跨度最大。结果提示庐江县不同镇养鸡场的新城疫疫苗接种效果总体较好,但是罗河镇存在较大的风险,提示日后需要加强该镇的新城疫防范。金牛镇的免疫整齐度有待加强。     

龟源迟缓爱德华氏菌分离鉴定及灭活疫苗研制

【目的】利用从发病死亡的中华草龟(Chinemys reevesii)分离到的病原菌株制备灭活疫苗。【方法】对该菌进行培养特性、生理生化特征、16S rRNA同源性分析、药敏等试验。人工感染中华花龟(Ocadia sinensis),确定半数致死剂量(LD50)。经0.03%甲醛灭活后与铝胶3∶1制成灭活疫苗,对中华花龟进行腹腔注射免疫,测定血清抗体效价,以5LD50活菌浓度进行攻毒试验测定免疫保护率。【结果】分离鉴定该菌为迟缓爱德华氏菌。两次免疫14 d后抗体效价分别为1∶64和1∶256,在5LD50剂量攻毒后相对免疫保护率分别为60%和73%。【结论】本灭活疫苗二免的相对保护率达73%,有保护效果,可用于龟的迟缓爱德华氏菌病的预防。     

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达

【目的】水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体,是RRSV侵染介体所必需。然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道。【方法】利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;通过水稻原生质体病毒侵染体系,利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况,利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况。【结果】将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体p DEST17中,IPTG诱导表达成功后,制备融合蛋白抗血清。Western blot检测显示,该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白。病毒侵染水稻原生质体后,Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体;Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累,24 h后达到最大值,随后开始下降;Pns10蛋白在24 h后开始表达,之后维持较高水平,60 h后略有下降。【结论】成功获得了Pns10抗血清;Pns10在水稻原生质体内成功表达,可形成类似病毒原质的内含体,并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达。     

牛支原体P48蛋白卵黄抗体的制备

为了研究牛支原体P48抗原蛋白的免疫学功能及相应卵黄抗体的生物学特性,探究其抗体效价随免疫时间的变化规律,试验采用牛支原体P48蛋白疫苗免疫健康产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋,用水稀释法结合硫酸铵盐析法制备特异性卵黄抗体,利用间接ELISA法检测血清抗体(IgG)和卵黄抗体(IgY)效价。结果表明,低、中、高剂量组均能诱导蛋鸡产生有效免疫应答,血清抗体效价与卵黄抗体效价的变化趋势基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,在首次免疫后8~10周Ig Y效价达到峰值,其中中剂量组的免疫效价最高,最高效价为1:212。经SDS-PAGE检测,制备所得的纯度达86%以上,得率在8.6 mg/m L以上。说明采用牛支原体P48蛋白免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度的抗牛支原体P48蛋白卵黄抗体,从而为卵黄抗体在牛支原体的检测与防控方面的研究奠定了基础。     

云南某犬场犬狂犬病灭活疫苗免疫抗体效价评估

采用直接免疫荧光病毒中和试验(FAVN),对云南某犬场狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的犬群随机抽样44只(份),检测血清中狂犬病病毒抗体效价。结果显示,44只受试犬,14只阳性(≥0.50 IU/m L),阳性率31.82%(14/44);狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只受试犬(幼犬14只、训练犬17只),3只阳性,阳性率9.68%(3/31);免疫2次及2次以上的13只受试犬(3只训练犬,10只种犬),11只阳性,阳性率84.62%(11/13)。调查显示,该犬场狂犬病灭活疫苗免疫覆盖率为100%。笔者建议:在犬12月龄前,应进行两次狂犬病灭活疫苗免疫;在幼犬3月龄后进行第1次免疫,间隔1个月后进行第二次狂犬病灭活疫苗加强免疫,消除狂犬病免疫空挡,以后每年进行1次免疫;对于监测过程中,出现血清中和抗体效价低于0.50 IU/m L的犬只,应及时加强免疫1次;并加强犬场周围流浪犬、流浪猫管理。     

中药抗体复合制剂防治仔猪腹泻试验

选择待开产未经大肠杆菌免疫来航蛋鸡150只,用ETEC K88+菌株C83907进行免疫后,收集高免蛋制备卵黄抗体粉。将中药提取物、卵黄抗体粉与载体按比例混合制成中药抗体复合制剂。分别选择3日龄和21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪18只和40只,人工感染C83907大肠杆菌后,口服含制备的中药抗体复合制剂进行被动免疫试验。结果表明:3日龄仔猪服用抗ETEC中药抗体复合制剂后,平均增重接近对照组(p>0.05),仔猪死亡率显著小于对照组(p<0.01)。21日龄服用中药抗体复合制剂组的仔猪增重高于卵黄抗体组(p<0.05)。研究结果表明,喂以6 g和10 g抗ETEC卵黄粉组的治愈率与抗生素治疗组差异不显著(p>0.05),比单一使用纯中药和卵黄抗体使用效果好(p<0.01)。     

对蜜蜂寿命的几点认识

<正>日前,读了几篇有关"卵黄原蛋白"、"胖蜜蜂"等内容的国外译文,笔者对蜜蜂寿命的内涵有了一些新的认识,并与学者S先生一起进行了探讨,整理如下,供参考。一、蜜蜂寿命对蜂群的贡献在养蜂实践中,常见同地的不同蜂场,蜂群春繁时的群势基本相同,但日后繁殖与采集的效果却大不一样,引起这种结果的原因有很多,但其中有一个极易被     

基于ELISA方法检测不用来源猪流感病抗体水平

本文简介了猪流感病毒的基本情况和猪流感的临诊症状,主要讲述了应用ELISA方法检测猪流感抗体,并对其结果进行分析讨论,最终提出控制对策。