DNA Methylation Pattern in Pronuclear-Stage Mouse Embryos: Effect of Oocyte Vitrification

This study was conducted to investigate the pattern of DNA methylation in pronuclearstage mouse embryos derived from vitrified-warmed oocytes.Mouse oocytes at metaphase Ⅱ (MⅡ) stage of meiosis were all...     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。     

Cryopreservation of shoot apices of hawthorn in vitro cultures originating from East Asia

The objective of this study was to establish a cryopreservation protocol for hawthorn shoot apices (Crataegus pinnatifida Bge.). Cryopreservation was carried out via encapsulation–dehydration, vitrification, and encapsulation–vitrification on shoot apices excised from in vitro cultures. We began by showing that cold-acclimation enhanced the regrowth of cryopreserved apices from 10.0 to 65.5% in encapsulation–dehydration. We then decided that the encapsulation–dehydration method was an optimal cryopreservation method for hawthorn shoot apices in terms of its high recovery after cryopreservation as well as its ease of use compared with vitrification and encapsulation–vitrification. In encapsulation–dehydration, the protocol leading to optimal regrowth was as follows: after cold-acclimation at 5 °C in the dark for 2 weeks, excised shoot tips were pretreated for 24 h at 25 °C on hormone-free Murashige and Skoog [Murashige, T., Skoog, F., 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture. Physiol. Plant. 15, 473–497] (MS) basal medium with 0.4 mol/L sucrose, then encapsulated and precultured in liquid MS medium with 0.8 mol/L sucrose for 16 h at 25 °C. Precultured beads were dehydrated for 6 h at 25 °C in the dessicator containing 50 g silica gel to a moisture content of 15.3% (fresh-weight basis) before cryostorage for 1 h. In addition, we examined the effect of adding glycerol to both the alginate beads and loading solution to enhance regrowth after cryopreservation in encapsulation–dehydration. In the present study, it was shown that adding 0.5 mol/L glycerol resulted in high regrowth percentages (82.5–90.0%) in four Crataegus species.     

哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

综述了近年来关于哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展,并对这项技术的发展前景进行展望。重点讨论了影响哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存的几种因素,包括冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻方法和卵母细胞所处的发育阶段等,以及冷冻过程中细胞膜、微丝、微管、皮质颗粒、纺锤体和线粒体等出现的损伤。目前,玻璃化冷冻法存在的最主要问题是冷冻过程中造成超微结构不可逆转的损伤影响胚胎发育,亟待解决。     

菊薯(Smallanthus sonchifolius)脱毒快繁的研究

采用菊薯块茎的腋芽进行生长点的剥离,通过组织培养得到了再生植株.经双抗体夹心酶联(DAS-ELISA)法对脱毒植株进行病毒鉴定表明,脱毒的成功率为60%.用无毒苗的茎段(含节)、叶片作为外植体,筛选了从启动、增殖与分化直至生根各阶段的最适培养基,建立了简单良好的再生体系.茎段增殖的最适培养基为MS+BA 1 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+BA0.2 mg·L-1+TDZ 0.01 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.01 mg·L-1.平均移栽成活率达80%以上.     

欧李茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对欧李(Cerasus humilis)茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,预培养对欧李茎尖超低温保存有一定的影响,茎尖在含有0.5 mg.L-1BA和2 M甘油的B 5培养基上室温(25℃)下预培养3 d成活率最高;最佳预处理时间为60%PVS2处理10~20 min,玻璃化液(PVS2)处理时间为0℃下60 min.在优化的保存条件下,植株再生率达83.9%,再生植株生长和分化正常.这是欧李超低温保存成功的首例报道.     

玻璃化超低温保存中拟南芥幼苗细胞膜ATPase的变化

运用氯化铈(CeCl3)沉淀的电镜细胞化学方法, 研究了玻璃化超低温保存中拟南芥(Arabidopsis thaliana)不同苗龄幼苗细胞ATPase活性变化及玻璃化保护处理对酶活性的影响. 种子萌发48 h形成的幼苗(2 d龄幼苗)细胞膜ATPase活性反应强于种子萌发72 h形成的幼苗(3 d龄幼苗),但直接投入液氮(LN2)冻融后,2 d及3 d龄幼苗的ATPase全部失活. 玻璃化技术保护处理后, 2 d及3 d龄幼苗ATPase活性有不同程度提高. 2 d龄幼苗经玻璃化处理后ATPase活性明显提高,细胞膜ATPase在随之的LN2冻融后仍保持了较高活性;3 d龄幼苗经玻璃化处理后ATPase活性稍有提高,但LN2冻融后酶活性丧失. 幼苗玻璃化超低温保存结果显示,2 d及3 d龄幼苗直接投入LN2幼苗全部死亡. 玻璃化处理后再投入LN2,2 d龄幼苗有76%的成活率,而3 d龄幼苗仍然全部死亡. 结果表明,幼苗细胞膜ATPase活性与幼苗耐受LN2冻融后的成活率相关联. 玻璃化处理可以提高幼苗细胞膜ATPase活性,对2 d龄幼苗抗LN2冻融伤害有保护作用.     

微波复温对玻璃化冻存大鼠胚脑细胞活性的影响

以孕17～19 d的SD大鼠为材料,对胚脑细胞进行玻璃化深低温保存,在冻存3、10、20、30、60d后,胚脑细胞样品分别采用常规的38℃水浴复温和微波复温即在300mL 10℃水中,控制微波功率为800 W,频率2450MHz,复温时间80 s.检测胚脑细胞的功能变化,比较两种复温方法对细胞活性的影响.结果表明:胚脑细胞玻璃化冻存3～30 d,细胞的回收率、存活率、细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性都有下降的趋势,过氧化氢(H2O2)含量显著增加,但冻存30 d后这些指标保持基本稳定,与第60 d比较无显著差异(P＞0.05).微波复温组的细胞存活率,细胞内SDH、SOD的活性高于水浴复温组,细胞内H2O2含量明显低于水浴复温组.说明微波复温能够提高复温速率,对胚脑细胞的损伤要低于水浴复温.     

草莓离体培养中玻璃化的发生及克服措施研究

以“丰香”品种为试材,MS为基本培养基,研究草莓玻璃化的克服措施,结果表明,在6-BA试验浓度范围内（1-3 mg·L^-1）,玻璃化率随6-BA浓度的增加而增加;40 g·L^-1蔗糖,降低MS基本培养基中铵离子浓度,加入活性炭,采用透气膜封口在一定程度上均能使玻璃苗恢复正常.     

卵巢组织玻璃化冷冻研究进展

卵巢组织玻璃化冷冻可替代直接冷冻卵母细胞或胚胎。玻璃化冷冻卵巢组织在辅助生殖上具有优越性。它无需控制供体的生殖周期 ,也无需取出卵泡。同样这一技术可用于保存濒危动物或受意外伤害的人或动物的卵母细胞 ;可为性成熟前失去生殖能力的动物或人提供生殖保险以及增加卵母细胞的来源 ;可用于建立生殖细胞 (卵母细胞 )的冷冻库。而传统的冷冻技术存在很多弊端。文章综述了玻璃化冷冻卵巢组织的研究背景和现状 ,并指出了其广阔的应用前景