6个品种鸡LPL基因的PCR-RFLP分析

采用PCR-RFLP方法对金水乌鸡、武定鸡、湖北红鸡、青脚麻鸡、矮黄鸡和隐性白羽肉鸡6个品种共计360只鸡LPL基因进行多态性分析,选用Hha Ⅰ、HaeⅢ、Hinf Ⅰ、Bam HⅠ、EcoRⅠ和PstⅠ 6种限制性内切酶对PCR产物进行单酶切,结果发现HinfⅠ-RFLP具有多态性,有AA和tBB两种基因型,采用独立性X2检验方法检验该基因座频率分布差异,结果表明,蛋用品种湖北红鸡与药用观赏型珍禽金水乌鸡间差异显著(P<0.05);矮黄鸡、隐性白羽鸡2个肉鸡品种间的差异不显著,而它们与其它品种间的差异均达到极显著水平(P<0.01);金水乌鸡、武定鸡、青脚麻鸡3个品种间差异不显著。     

伊犁马LPL基因多态性及其与肉质性状关联性分析

【目的】研究伊犁马脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因多态性及其对肉质性状的影响,为专门化肉用马选种提供技术支撑。【方法】以41匹成年伊犁马为研究对象,采集颈静脉血液样本及其三角肌、背阔肌、臂三头肌、腹外斜肌和臀中肌5个部位肌肉样本,提取伊犁马DNA样本并测定肉质性状,利用PCR测序法筛选LPL基因突变位点并进行多态性分析,结合伊犁马肉质性状数据与LPL基因多态性进行关联性分析。【结果】所选马匹中共检测出2个突变位点(g.715T>C和g.12074C>A),均为内含子突变,2个位点均只检测出2种基因型,为低度多态位点。g.715T>C位点TT基因型马匹背阔肌和臀中肌失水率显著高于TC基因型马匹(P<0.05),背阔肌剪切力极显著大于TC基因型马匹(P<0.01),腹外斜肌剪切力极显著小于TC基因型马匹(P<0.05),三角肌和臀中肌剪切力显著大于TC基因型马匹(P<0.05);g.12074C>A突变位点CC基因型马匹臂三头肌和臀中肌失水率极显著低于CA基因型马匹(P<0.01),背阔肌和腹外斜肌失水率显著低于CA基因型马匹(P<0.05),臂三头肌熟肉率极显著高于CA基因型马匹(P<0.01),三角肌和腹外斜肌熟肉率与CA基因型马匹呈显著差异(P<0.05),臂三头肌和腹外斜肌剪切力极显著高于CA基因型马匹(P<0.01)。【结论】LPL基因g.715T>C和g.12074C>A位点是影响伊犁马肉质性状的潜在位点。     

Replacement of a large portion of fish oil by vegetable oils does not affect lipogenesis, lipid transport and tissue lipid uptake in European seabass (Dicentrarchus labrax L.)

In order to investigate the impact of dietary lipid sources on mechanisms involved in lipid deposition, three groups of European seabass fingerlings with average initial body weight of 5.2 ± 1.0 g were fed three diets differing only by lipid source. These diets were: 100% anchovy oil (diet A), 40% anchovy oil-60% mix of vegetable oils (35% linseed, 15% palm, 10% rapeseed) (diet B) and 40% anchovy oil-60% mix of vegetable oils (24% linseed, 12% palm, 24% rapeseed) (diet C). After 64 weeks of rearing, when seabass reached the size of 160 g, the activity of lipogenic enzymes (fatty acid synthetase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and malic enzyme) in liver and of lipoprotein lipase (LPL) in perivisceral adipose tissue, liver and white muscle were measured. Transport of lipid by lipoproteins was examined by determining plasma lipid composition and lipoprotein classes. Dietary oil source did not modify growth performance or lipid content of flesh and liver of seabass. Replacement of 60% of fish oil by the two mixtures of vegetable oils had no significant effect on hepatic lipogenesis and activity of LPL in liver and adipose tissue. Activity of LPL in white muscle was decreased in fish fed diet C compared to those fed diets A and B. Diets containing the mixture of vegetable oils led to lowered plasma, VLDL and LDL cholesterol levels compared to diet A.It is concluded that replacing 60% of fish oil by the two mixtures of vegetable oils in the feeds of European seabass fingerlings until they reach the size of 160 g has no marked effect on growth performance, lipogenesis and tissue lipid uptake but has a hypocholesterolemic effect.     

奶牛乳腺上皮细胞中miR-224靶基因的初步验证

利用生物信息学方法预测出miR-224可能的靶基因为ACADM、ACAT1、ALDH2和LPL,然后用实时荧光定量法检测了miR-224与其靶基因在奶牛乳腺上皮细胞中的表达量。结果显示:(1)miR-224的相对表达量。转染shNc组表达量低于转染mimics组而高于inhibitor组。(2)靶基因荧光定量结果表明,ACADM、ALDH2和LPL基因转染shNc组表达量低于转染inhibitor组而高于mimics组。(3)经SPSS22.0相关性分析表明:在乳腺上皮细胞中,ACADM、ALDH2和LPL基因的表达量与miR-224的表达量呈显著负相关,ACAT1基因与miR-224没有显著联系。初步验证说明,ACADM、ALDH2和LPL基因可能是miR-224的靶基因,为进一步探索miR-224在奶牛乳牛乳腺上皮细胞发挥的作用提供了一定的理论依据和研究基础。     

紫花苜蓿对杂交猪育肥性能和相关基因表达量的影响

为了研究紫花苜蓿对猪生长及肉质性能的作用,选用16头长×大外二元育肥猪,在基础饲料中添加4%苜蓿,应用免疫组织化学、酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR研究脂肪代谢相关因子在mRNA水平和蛋白质水平表达的差异。结果显示:饲料中添加苜蓿后,杂交猪骨骼肌细胞中瘦素(leptin)基因(P<0.05)和蛋白(P>0.05)的表达量下降,与日增重呈轻度负相关(r=-0.314);转录因子C/EBPβ(CCAAT/en-hancer binding proteins,CEBPβ)基因和蛋白的表达量变化不明显;过氧化氢酶体激活增殖受体(peroxisome proliterator actiated receptors,PPARr)基因和蛋白水平高于对照组(P>0.05),与日增重(r=-0.837)、瘦肉率(r=-1.000)、pH1(r=-1.000)呈高度负相关,与脂率(r=1.000)、熟肉率(r=1.000)高度正相关;脂联素(adiponectin)基因(P>0.05)和蛋白(P<0.05)表达量高于对照组,与脂率(r=-1.000)、熟肉率(r=-1.000)、胴体重(r=-0.500)、屠宰率(r=-0.500)、肉色评分(r=-0.500)、pH24(r=-0.500),肌内脂肪含量(r=-0.500)负相关,与日增重(r=0.837)、瘦肉率(r=1.000)、pH1(r=1.000)、眼肌面积(r=0.500)、失水率(r=0.500)正相关;脂肪分化相关蛋白(adiposedifferentiation-related protein,ADFP)基因(P>0.05)和蛋白(P<0.05)表达量上调,但与肉质、体增重等指标相关性不大;脂蛋白脂酶(lipo-protein lipase,LPL)基因和蛋白变化不明显,与各项屠宰指标不相关。这些结果表明一定量的紫花苜蓿下调Leptin、通过CEBPβ上调PPARr、ADFP和Adiponectin 3个基因和蛋白的表达,增加猪的日增重、肌内脂肪,影响肉质性状,对LPL的作用较小。这些研究为紫花苜蓿在养猪业中的开发利用奠定了理论基础。     

桑叶对绒山羊血脂及脂肪代谢相关基因表达的影响

【目的】探讨日粮中桑叶添加方式和添加量对绒山羊血脂代谢及组织中脂蛋白酯酶(LPL)、脂肪酸合成酶(FASN)、瘦素(Leptin)基因表达量的影响。【方法】选用体况良好(平均体质量(28±1.05)kg/只)的陕北白绒山羊羯羊60只,随机均分为对照组、干桑叶组Ⅰ、干桑叶组Ⅱ、青贮桑叶组Ⅰ、青贮桑叶组Ⅱ、青贮桑叶组Ⅲ6组,其中对照组日粮中不添加桑叶;干桑叶组Ⅰ、Ⅱ日粮中分别添加质量分数10%,15%的自然风干桑叶,青贮桑叶组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日粮中分别添加质量分数10%,15%,20%的青贮桑叶。饲养试验持续70d。饲养试验结束后,每组随机挑选3只羊进行屠宰,宰前颈静脉采血并分离血清,宰后采集腹部皮下脂肪、肾周脂肪、尾部脂肪、肝脏、背最长肌组织样。测定血清中血脂代谢相关指标;通过实时荧光定量PCR检测各组织中LPL、FASN、Leptin基因表达量。【结果】干桑叶组Ⅱ和青贮桑叶组Ⅱ的血清LDL-C浓度分别显著降低36.4%和30%(P0.05);饲喂干桑叶组羊血清Leptin质量浓度显著降低(P0.05);干桑叶组Ⅱ和青贮桑叶组Ⅲ中血清FASN质量浓度均显著降低(P0.05)。LPL、FASN、Leptin具有组织表达特异性,且日粮中添加桑叶对绒山羊各组织中基因表达的影响不同。肝脏中,干桑叶组Ⅱ和青贮桑叶组Ⅱ中FASN基因表达量显著降低(P0.05);腹部皮下脂肪中,青贮桑叶组Ⅲ的LPL、Leptin基因表达量显著增加(P0.05);肾周脂肪中,LPL基因表达量在青贮桑叶组Ⅱ中显著上升(P0.05);尾部脂肪中,干桑叶组Ⅱ和青贮桑叶组Ⅱ的LPL基因表达量显著增加(P0.05),干桑叶组Ⅱ和青贮桑叶组Ⅲ的Leptin表达量显著增加(P0.05);背最长肌中,青贮桑叶组Ⅱ的LPL、Leptin基因表达量显著上升(P0.05)。【结论】日粮中添加干桑叶和青贮桑叶对绒山羊脂肪代谢均有调控作用,但整体上饲喂青贮桑叶效果更显著;在日粮中添加质量分数15%的青贮桑叶有更好的降血脂效果,降低血液中TC、TG、LDL-C浓度,促进脂肪组织中LPL、Leptin基因表达,抑制肝脏中FASN基因表达。     

徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位.本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL.聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPL mRNA在细胞内的表达.结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530 bp长的cDNA,完整阅读框大小为1437 bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383.信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%.信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%.成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显.EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分.结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达.     

延边黄牛脂蛋白脂肪酶基因多态性及其与肉质性状的关联分析

为探究延边黄牛脂蛋白脂肪酶（lipoprteinlipase,LPL）基因遗传多态性及其对肉质性状的影响,本试验以80头健康的30月龄延边黄牛背最长肌作为试验材料,运用PCR直接测序法和高分辨率熔解曲线技术（HRM）对LPL基因的SNP位点进行检测,分析了试验群体的遗传效应,并与延边黄牛的肉质性状数据进行关联分析。PCR直接测序结果表明,延边黄牛LPL基因存在2个多态性位点（g.6215 A>G和g.18341 C>T）,其中g.6215 A>G位点表现为2种基因型：AA与AG,优势等位基因为A;g.18341 C>T位点表现为2种基因型：CC和CT,C为优势等位基因;对文献中2个位点的检测结果表明,g.355427 T>A位点表现为2种基因型：AA与AT,A为优势等位基因;c.322 G>A位点的HRM分型结果显示并未分型。这些多态性位点全部呈中度多态（0.25<PIC<0.5）,并处于Hardy-Weinberg平衡状态。HRM分型结果显示,这3个SNPs位点与延边黄牛肉质性状存在显著相关：g.6215 A>G位点与延边黄牛胴体重及脂肪、蛋白、水分含量有显著关联,表现为AG基因型个体胴体重、脂肪含量显著高于AA基因型个体（P<0.05）,AA基因型个体蛋白及水分含量显著高于AG基因型个体（P<0.05）;g.18341 C>T位点与延边黄牛宰前活重、胴体重及背膘厚有显著关联,表现为CT基因型个体这些性状均显著高于CC基因型个体（P<0.05）;g.355427 T>A位点AT基因型个体宰前活重、背膘厚和脂肪含量均高于AA基因型个体（P<0.05）。综上,LPL基因g.6215 A>G、g.18341 C>T和g.355427 T>A位点对延边黄牛的肉质有显著影响,LPL基因可以作为延边黄牛品种选育改良工作的优势候选基因和有效分子标记。     

藏绵羊脂蛋白脂酶基因克隆及序列分析

[目的]为深入研究藏绵羊肉用性能的遗传调控与营养代谢关系。[方法]利用RT-PCR和T-A克隆技术获得了藏绵羊LPL基因,并对其进行生物信息学分析。[结果]藏绵羊LPL编码基因全长1437 bp,编码478个氨基酸。将藏绵羊LPL基因及氨基酸序列分别与GenBank中公布的11种动物进行序列一致率比对,发现藏绵羊与所选动物的LPL基因序列一致率在84.6%～99.6%,LPL氨基酸序列一致率在88.8%～99.0%。藏绵羊与普通绵羊LPL基因存在6个位点核苷酸差异,其中有一个核苷酸位点的差异没有引起相应氨基酸的改变,其余5个位点核苷酸的不同都引起了氨基酸的差异。[结论]该研究可为了解LPL基因的演化关系及作用机理提供资料。