草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析

为了筛选草鱼肝细胞脂肪变性的最佳诱导剂及浓度,并初步分析脂肪乳剂(lipid emulsions,LE)引起草鱼肝细胞脂肪变性的作用机理,以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)正常肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞模型,以含10%胎牛血清的基础培养液为对照组,处理组为含20%脂肪乳剂0.5~2 m L/L和含20%、50%胎牛血清的诱导培养液,孵育草鱼肝细胞48 h后,定量分析肝细胞内的甘油三酯(TG)含量,观察脂滴积聚情况及肝细胞超微结构的变化,检测细胞培养上清中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)的活性,q RT-PCR技术检测脂代谢关键基因(PPAR?、PPAR?、SREBP-1c、LPL、Lep和UCP2)的转录水平变化,蛋白质印迹技术检测PPAR?、SREBP-1c的蛋白水平变化。结果发现,含1~2 m L/L LE的诱导液组和含20%、50%FBS的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升(P0.05),且20%FBS和各浓度LE诱导组的转氨酶活性与对照组相比差异不显著(P0.05),表明含1~2 m L/L LE的诱导液和含20%FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模型。在肝细胞脂变模型中,PPARγ和LPL等脂代谢基因的表达量显著升高(P0.05),而Lep基因表达量显著降低(P0.05),PPARγ和SREBP-1c的蛋白水平升高。结论认为:采用1~2 m L/L LE和20%的FBS均可以在短时间内建立草鱼肝细胞脂肪变性模型,含1 m L/L LE的诱导液诱导效果最佳;肝细胞内脂质的蓄积可能与脂肪代谢关键基因PPARγ、SREBP-1c、LPL及Lep等密切相关。     

云南伊洛瓦底江外来种麦穗鱼的形态差异分析

对采自伊洛瓦底江水系和顺、猴桥、龙陵和盈江4个群体共120尾麦穗鱼标本进行11个常规性状和16个框架结构性状的测量,应用多变量形态度量学结合主成分分析和差异系数分析方法比较各群体间的形态差异。结果表明,4个群体间没有显著性差异。其中,主成分PC1、PC2和PC3贡献率分别为26.658%,15.281%和11.395%,累积贡献率为53.334%,在PC1、PC2散点图中,龙陵与猴桥群体部分分出。从27个性状变量中筛选出贡献较大的9个性状(P0.01)与体长的比值进行形态差异系数分析,发现龙陵与猴桥、和顺、盈江群体间差异系数均小于1.28,综上分析,伊洛瓦底江4个麦穗鱼地理群体形态差异不显著,这可能与引入时间较短、引入群体来源于同一种群有关。     

鱼类miRNAs研究新进展

正MicroRNAs(miRNAs)是一类内生性的、进化上高度保守的单链成熟非编码RNA,长度约21~25个核苷酸,广泛存在植物、动物及微生物中~[1-2],参与生物体的胚胎形成、个体生长发育、机体免疫、疾病防御以及繁殖和糖脂类代谢等生命过程~[3-8]。目前,基于生物信息学预测,miRNAs约占整个基因组的2%~3%~[9]。自Lee等~[10]利用定位克隆法从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中克隆到     

天水市鸡病血清学调查

据统计,天水市有各类鸡313.1万羽,为了保障养鸡事业的健康发展,为鸡病防治提供科学依据,我们在1989年6-8月,采用血清学方法对天水市五县,二区的2个集体鸡场、193个专业户的887羽鸡进行了9种疫病普查.普查中用平板凝集反应检查禽结核、鸡白痢、鸡败血霉形体病;琼脂扩散反应用以检查鸡喉气管炎、禽霍乱、鸡马立克氏病、鸡法氏囊病;血凝抑制试验用以检查鸡新城疫;间接血凝试验检查鸡衣原体.结果,鸡白痢病检出阳性率为15.6%(138/887),禽结核为25.0%(130/519),鸡败血霉形体为57.7%     

不同浓度PVP对猪前体脂肪细胞冷冻保存的效果

猪前体脂肪细胞是研究人类肥胖及其相关的糖尿病、高血压等疾病最合适的材料之一,但目前尚未建立猪的前体脂肪细胞系。原代培养的猪前体脂肪细胞生长周期较长,且在常规培养条件下难以长期保存,如能将细胞在超低温条件下保存,使其生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡(薛庆善,200     

斑马鱼PGC-1β基因部分cDNA的克隆及其表达的初步研究

设计斑马鱼过氧化物酶体增殖物受体γ辅助活化因子-1β(PGC-1β)引物,扩增斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列,并进行同源性分析.同时研究饥饿对斑马鱼PGC-1β基因mRNA表达的影响.结果表明:克隆得到斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列长度为466bp,获得GenBank序列号为EU433886.同源性分析显示,斑马鱼PGC-1β基因同人、大鼠、小鼠、狗、鸡、金鱼同源性较低,分别为59.4%、57.5%、56.6%、59.0%、53.3%和59.0%.饥饿后,斑马鱼PGC-1βmRNA表达量显著升高.研究表明,PGC-1β在斑马鱼的能量代谢过程中可能发挥重要的作用.     

草鱼SREBP-1基因的克隆及糖对其在肝脏中表达的影响

固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是调控糖脂代谢相关基因表达的关键核转录因子。为获知草鱼SREBP-1基因的序列及其在肝脏中的表达规律,本实验采用同源克隆和RACE方法获得了草鱼SREBP-1基因的部分cDNA序列,并通过生物信息学方法对该基因及所编码蛋白的结构特征进行了分析;采用实时荧光定量PCR技术,对SREBP-1基因在8种不同组织的表达规律及低糖(糖含量24%)和高糖(糖含量42%)投喂条件下肝脏中的表达水平进行了研究。结果显示,所克隆到的草鱼SREBP-1基因cDNA长4 760 bp,其中包括开放读码框3 426bp,编码1 141个氨基酸;草鱼SREBP-1具有一个典型的碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构(bHLH-zip);氨基酸序列比对结果显示,草鱼SREBP-1与其他鱼类的同源性在76%~88%之间,与斑马鱼的进化关系最近;草鱼SREBP-1基因在脑中的表达量最高,肝脏和肠次之,在肾脏、脾脏、肌肉、脂肪和性腺中均有少量表达;与对照组相比,SREBP-1基因在高糖诱导下表达量显著提高(P0.05),低糖诱导下没有显著性差异。研究表明,在高糖负荷条件下,草鱼肝脏中SREBP-1可能会促进糖的利用和转化,从而参与糖代谢调节过程,为丰富鱼类糖代谢调控机理提供研究资料,并有望为提高鱼类对饲料糖的利用效率提供理论依据。     

淇河鲫甘露糖受体基因克隆及嗜水气单胞菌感染对其基因表达的影响

为了解淇河鲫甘露糖受体(mannose receptor,MR)的结构特点及其在抗感染免疫反应中的作用,实验通过同源克隆和RACE技术,获得了淇河鲫甘露糖受体(CaMR)全长c DNA,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究了嗜水气单胞菌感染对CaMR组织表达的影响。结果显示,CaMR c DNA全长4473 bp,5′非编码区81 bp,3′非编码区90 bp,编码一个由1433 aa组成的前体蛋白,其中前20 aa为信号肽。CaMR的氨基酸序列和分子结构与其他物种高度相似:胞外一个富含半胱氨酸的结构域(CRD)、一个纤连蛋白II型结构域(FNIID)及8个串连的C型凝集素样结构域(CTLDs),一个跨膜区和一个很短的胞内区。氨基酸同源性和进化分析显示,CaMR与草鱼、团头鲂、斑马鱼等鲤科鱼类的进化关系较近,与草鱼MR的同源性最高(82.4%)。通过qPCR检测到头肾、脾、心脏、肌肉等10种组织中均有表达,其中头肾表达量最高;嗜水气单胞菌感染后,头肾、脾和心脏MR基因的相对表达量均呈先升后降的趋势,而肠道则呈下降趋势,肌肉的表达量变化不显著。本研究为进一步揭示CaMR在免疫反应中的作用机制及其在淇河鲫疾病防治中的应用奠定了基础。