牛病毒性腹泻黏膜病毒E2基因的原核表达与免疫原性分析

[目的]原核表达牛病毒性腹泻黏膜病毒(BVDV)E2基因编码蛋白。[方法]采用PCR方法从BVDV中扩增E2基因片段,与原核表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-E2,转化E.coli(Rosetta)感受态细胞,重组菌用1 mmol/L IPTG诱导表达E2蛋白,进行SDS-PAGE电泳,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,经Western blot分析鉴定免疫原性。[结果]重组质粒pET-32aE2经PCR及酶切鉴定证明构建正确,重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为58 kDa,纯化后E2重组蛋白浓度0.521 mg/mL,Western blot分析表明,其能被BVDV阳性血清识别,具有很好的免疫原性。[结论]E2蛋白成功表达,为后续建立BVDV检测方法奠定了基础。     

我国部分地区梅树病毒病的病原初步检测

梅是一种原产于中国、具有重要经济价值、花果兼用型的树种。在其生长繁育过程中易受病毒等病原侵染,从而可能造成严重的经济损失。目前我国梅树上病毒的发生及分布尚不清楚。为此,对无锡、武汉、上海、杭州、南京的梅园进行了调查,采集了115份样品,其中发现了疑似病毒病害,主要症状表现为花叶、卷叶、叶片皱缩、褪绿、脉间失绿等。RT-PCR检测出了苹果茎沟病毒(ASGV)、樱桃病毒A(CVA)和亚洲李属病毒2(APV 2),检出率分别为30.4%、4.3%和3.5%。此外,克隆了这三种病毒的外壳蛋白基因序列,同GenBank已登录的相应序列相似性为86%~99%(核苷酸水平)和83%~99%(氨基酸水平)。序列比较发现APV2梅分离物与日本梅分离物亲缘关系较近。     

Environmentally friendly methods for controlling pine pitch canker

Fusarium circinatum is a highly virulent invasive pathogen that causes the disease commonly known as pine pitch canker (PPC). On mature trees, the most common symptoms of PPC include resin bleeding, resinous cankers, wilting of needles and dieback. In nurseries the main symptoms are yellowish needles, and wilting of foliage and shoots. PPC is considered one of the most important diseases of conifers globally and at least 60 species of Pinus along with Pseudotsuga menziesii are known to be susceptible. Quarantine regulations are crucial to minimize the risk of new introductions into disease-free countries. However, if these measures fail, implementation of environmentally friendly control methods is currently encouraged in an integrated management approach that minimizes the use of chemicals in forests. This review therefore summarizes current knowledge of biological control using endophytic fungi, bacteria and viruses, and other environmentally friendly methods to control PPC, including thermotherapy, natural products with fungicidal effects, promoters of innate host resistance mechanisms and breeding for resistance. Key research gaps to be addressed for improvement of effective management of this disease are discussed.     

青海BYDV-GAV青稞分离物基因组克隆及结构特征分析

大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf viruses,BYDVs)病是一种在世界范围内发生危害的禾谷类作物病毒病害。2014年笔者在对青海重要作物病毒病调查时发现田间青稞作物上有疑似BYDVs危害的症状,利用BYDVs引物对田间采集的9份典型症状病样进行了RT-PCR检测,结果均扩增到目的条带(约300bp),随机抽选样品进行序列测定,BLAST分析结果显示其与BYDV-GAV同源性最为接近(99.2%)。为进一步明确该分离物的分类地位及基因组结构特征,根据已测定的BYDV-GAV序列设计全长扩增引物,利用分段法克隆了其全基因组序列,发现其全长为5 683bp,具有典型的黄症病毒属的特征,编码6个ORF,有4个非编码区(UTR)。基因组序列聚类进化分析结果显示,其与BYDV-GAV聚类于同一分支,与中国陕西渭南小麦分离物亲缘关系较近。以上结果说明,该分离物是BYDV-GAV的一个分离物,这是青海BYDV-GAV青稞分离物全基因组的首次报道。     

我国作物病虫害生物防治研究与应用最新进展

本文总结了近5年来我国在作物病虫害生物防治研究和应用方面的最新进展, 包括作物害虫、病害(真菌、细菌和病毒病)和线虫的生物防治、植物免疫和昆虫性信息素的研究和应用, 以及新方法和新技术在作物病虫控制中的应用。同时, 与国外的研究进展进行了比较, 指出了存在的主要问题、发展趋势与对策建议。     

病原感染后鸡miRNAs调控的研究进展

microRNAs(miRNAs)是一种短的单链非编码小分子RNAs，无论是在正常发育还是疾病的发生发展过程中，都能够与靶mRNA结合，参与到基因的转录后调控过程，并在其中发挥重要的调节作用。近年来随着miRNAs研究的深入，越来越多的证据表明，病原感染后会引起宿主miRNAs表达水平发生变化，这些差异表达的miRNAs能够积极地参与到疾病的发生发展过程中，并通过调控靶基因的表达参与免疫功能、自噬、炎症反应、代谢等多种生物学过程来抑制或促进疾病的发展。此外，宿主miRNAs作为一种参与转录后调节的小分子RNAs，在病原感染过程中，鸡miRNAs除了可以靶向自身的基因来调控鸡先天免疫信号，也可以靶向病原的基因从而影响病原的吸附、入侵、增殖等过程。作者主要介绍了miRNAs的生物合成、功能以及鸡miRNAs在部分病毒、细菌、寄生虫等病原侵袭过程与致病过程中的调控作用及其机制，简述了不同病原感染后鸡miRNAs的调控策略，以期从miRNAs的角度为鸡病的诊断、治疗和防控提供一定的参考。