参豉糖蛋白提取工艺优化及纤溶活性研究

[目的]对参豉中糖蛋白的提取工艺进行考察,并对其纤溶活性进行评价。[方法]以糖蛋白提取率为指标,通过单因素法考察缓冲液、提取温度、料液比、提取时间和提取次数对其的影响,并运用响应面法分析优化参豉糖蛋白的提取工艺,采用蒽酮-硫酸法测定糖蛋白中多糖含量,SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳确定糖蛋白的分子量,利用琼脂糖纤维蛋白平板法测定纤溶活性。[结果]缓冲液、提取时间和料液比对糖蛋白提取率影响较大;响应面法优化获得参豉糖蛋白的最佳提取工艺条件为Tris-Base-NaCl缓冲溶液(pH=8.04)、料液比1∶10(g∶mL),于4℃提取6 h,参豉糖蛋白提取率为4.85%,其中多糖含量为12.34%;SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,参豉糖蛋白分子量为4.1～27.0 kD;与豆豉糖蛋白相比,参豉糖蛋白纤溶活性提高了40.6%。[结论]经验证利用响应面法分析测得参豉糖蛋白与模型预测值接近,可用于参豉糖蛋白的提取,且参豉糖蛋白具有较高的纤溶活性,为其进一步开发利用提供依据。     

油茶籽糖蛋白提取工艺优化及抗氧化性

为探讨油茶籽糖蛋白的最优提取工艺及抗氧化活性,在单因素试验基础上采用响应面法对提取油茶糖蛋白的关键参数进行了优化。同时以维生素C作为对照,采用4种不同方法考察了油茶籽糖蛋白的抗氧化性能。结果表明,油茶籽糖蛋白的最佳提取工艺条件为:浸提时间8.81 h、提取盐浓度0.12 mol/L、pH值8.77和液料比11.62 mL/g,在此条件下蛋白得率为8.76%,糖得率为10.14%。抗氧化试验表明,油茶籽糖蛋白能显著清除DPPH、羟基自由基和超氧阴离子自由基,具备一定的还原能力。     

传染性造血器官坏死病毒新疆株的分离与鉴定

在新疆维吾尔自治区某养殖场取患病虹鳟Oncorhynchus mykiss组织样本,进行传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离鉴定、电镜观察、回归感染及遗传进化分析研究。细胞培养结果显示:患病虹鳟组织样本能够感染鲤Cyprinus carpio上皮细胞(carp epithelial cell,EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect,CPE),收集病毒悬液命名为XJ-13。滴度测定实验表明:该病毒为10~(6.15)TCID_(50)/m L。回归感染实验表明:该分离株在浓度为10~5PFU/尾的剂量使体质量5g的虹鳟死亡率达87.5%。通过透射电镜观察发现患病虹鳟组织悬液感染的EPC细胞内存在大量的子弹状病毒粒子,PCR鉴定结果表明该病毒为IHNV。XJ-13的糖蛋白氨基酸序列的聚类分析结果显示,该病毒株与我国IHNV-Sn1203株具有最高的同源性(99%),与美国参考株WRAC的同源性为94.6%。结果表明:IHNV XJ-13是造成该养殖场虹鳟大量死亡的病原。     

狂犬病毒分离株糖蛋白基因的克隆与序列分析

为分析狂犬病毒(RV)分离株糖蛋白基因之间的差异,本研究采用RT-PCR的方法扩增由广东某地临床表现正常犬的唾液中分离的RV(GD33)分离株的G基因,将其克隆、测序后与国内外部分毒株相应基因进行核苷酸序列比较,结果表明,该分离株与其他毒株相比核苷酸同源性为94%～97.1%;氨基酸同源性为97%～99.2%。而GD33分离株与HEP-Flury株在跨膜区、膜内区有很高的一致性;另外,GD33分离株与HEP-Flury和FluryLEP株在333位点出现精氨酸被取代的现象,证实GD33分离株这2个疫苗株没有显著差异,对监控我国狂犬病疫情具有一定的意义。     

剪切变形对基桩P-Δ效应的影响

给出了小剪切变形下的基桩P-Δ效应和大剪切变形下支座P-Δ效应计算的杆单元刚度矩阵方程。假定杆单元弯曲变形位移函数为三次幂函数,剪切变形函数为线性函数,根据有限元法一般原理,推导了一种同时计入竖向力径向剪切分力剪切变形和水平力剪切变形的P-Δ效应杆单元刚度方程,推导了一种仅计入竖向力径向剪切分力剪切变形而忽略水平力剪切变形的P-Δ效应杆单元刚度方程,推导了一种仅计入水平力剪切变形而忽略竖向力径向剪切分力剪切变形的P-Δ效应杆单元刚度方程。计入水平力剪切变形而忽略竖向力径向剪切分力剪切变形的P-Δ效应杆单元可良好的模拟支座在大剪切变形下的偏心工作特性,能实时计入其偏心弯矩影响,为实时计入支座偏心特性的结构动静力分析提供了理论支撑。最后通过自编MATLAB程序进行算例分析,结果表明,计入支座大剪切变下的P-Δ效应后,基桩内力位移和地基土压力均显著增大。基桩自身剪切变形对桩身内力位移和地基土压力影响较小,可以忽略。     

大豆蛋白的甘露聚糖糖基化研究

将大豆分离蛋白与甘露聚糖糖基化生成大豆糖蛋白,力求为工业化生产大豆糖肽作为原料.采用SDS-PAGE电泳技术,OPA法测定大豆蛋白的接枝度,结果大豆分离蛋白的7S和11S中各亚基均参与了糖基化反应,70℃和80℃的蛋白接枝度在30%左右;糖蛋白的溶解性测定结果显示经过糖基化之后的大豆糖蛋白溶解性有显著提高并且等电点向酸性方向偏移,糖基化之后的蛋白含糖量随糖基化温度升高而增加.     

鸭瘟病毒gB蛋白N端抗原域的高效表达及其免疫特性

在分析鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)gB蛋白抗原性的基础上,设计1对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因,克隆到表达载体pET32a中,构建了原核表达质粒pET-gB1.将pET-gB1转化到感受态大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约42.4kD的目的蛋白以包涵体形式表达.Western blot分析发现,表达产物与抗鸭瘟的鼠阳性血清发生特异性反应.将包涵体溶解于8mol/L的尿素中,利用His-Bind试剂盒获得纯化的蛋白,将纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,间接ELISA法测得抗体的效价,MTT法检测免疫小鼠的T淋巴细胞增殖反应能力.结果说明,该融合蛋白能够诱导机体产生较强的体液免疫和细胞免疫.     

牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的真核表达及纯化

【目的】构建proEM-bPAG9重组表达载体,并在HEK293细胞中转染表达。为进一步抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研究奠定基础。【方法】通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体proEM中,构建proEM-bPAG9重组载体后转到DH5α感受态细胞中,重组质粒转染至哺乳动物细胞HEK293中进行瞬时表达,再通过亲和层析纯化bPAG9重组蛋白(rbPAG9),经SDS-PAGE 和 Western Blot 检测rbPAG的表达效果。【结果】通过全基因合成法得到1 182 bp的bPAG9基因片段,构建的重组质粒proEM-bPAG9经双酶切获得约4 369 bp和1 176 bp的两条片段,与预期值相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致,氨基酸未发生突变;SDS-PAGE 和 Western Blot 鉴定显示,获得相对分子质量约为68 kDa 的bPAG9重组蛋白,通过Ni2+亲和层析纯化后,rbPAG9纯度可达90%。【结论】通过基因优化及真核表达获得分子质量为68 kDa 的rbPAG9重组蛋白。     

甘草硒糖蛋白的制备工艺及对DPPH的清除作用研究

[目的]考察甘草硒糖蛋白的制备工艺,探究其对DPPH自由基的清除作用。[方法]在硝酸催化剂的作用下加入亚硒酸钠,使甘草糖蛋白与亚硒酸钠作用,生成甘草硒糖蛋白,用HPLC法检测硒含量,以产率和硒含量为指标,确定其合成的最佳工艺。采用分光光度法测定甘草硒糖蛋白、甘草糖蛋白和Vc对DPPH自由基的清除能力。[结果]甘草硒糖蛋白的最佳制备工艺条件:甘草糖蛋白与亚硒酸钠的质量比为1∶1,反应温度为70℃,反应时间为8 h,Ba Cl2的量为1.0 g。在此条件下制备的甘草硒糖蛋白,硒含量平均为4.78 mg/g,平均产率为75.62%。对DPPH自由基的清除能力的试验结果:甘草糖蛋白、甘草硒糖蛋白和Vc的IC50值分别为1.789、1.410和0.427 mg/m L。[结论]该制备方法简单易行,安全,污染较小,硒含量较高;且甘草硒糖蛋白清除DPPH自由基能力强于甘草糖蛋白。