副猪嗜血杆菌分离鉴定及药敏试验

副猪嗜血杆菌能够引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等,是影响猪的最重要细菌之一,目前在所有的主要养猪国家均有存在。为了弄清河南省副猪嗜血杆菌病流行情况,2012年-2015年,从河南不同地区猪场送检的疑似病料,进行副猪嗜血杆菌分离和鉴定,共分离到5株细菌,通过细菌形态观察、培养特征鉴定、生化试验、PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌,分别命名为A6-fei、C3-xin、C12-xin、D2-fei和E1-fei。采用纸片扩散法,对分离5株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,其结果表明所分离的5株副猪嗜血杆菌的药物敏感性不尽相同,各分离菌株对头孢噻肟、氟苯尼考星最敏感,对复方新诺明敏感性最差,其中菌株C3-xin对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、青霉素完全耐药。表明副猪嗜血杆菌病在河南省依然存在,并且不同地区菌株对常用药物的敏感性各不相同,应当引起养猪场重视。     

一起猪繁殖与呼吸综合征与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

为查明猪场发病原因,对发病猪进行剖检及实验室检测,剖检发现淋巴结肿大,胸腔、腹腔有纤维素性渗出物;通过细菌分离鉴定发现所分离的菌株培养特性与HPS基本一致,通过病原学检测发现发病猪只存在PRRSV和HPS混合感染。     

Cloning and Bioinformatics Analysis of espP Gene of Haemophilus parasuis

In order to evaluate whether Haemophilus parasuis espP gene could use as a vaccine candidate antigen or not,the espP gene was amplified by PCR using the specific primers that designed according to corresponding sequence getting form GenBank (accession No.:HAPS_1381) and then sent to sequence.After translating the DNA sequence into amino acid sequence,the signal peptide,hydrophilic region,linear B cell epitopes and 3D structure of Hps espP protein were predicted using multiple bioinformatics analysis.The results showed that the full length of Hps espP gene was 2 343 bp,encoding 781 aa.The first 23 aa were predicted as signal peptide.There were 12 hydrophilic regions and 12 B cell epitopes in the Hps espP protein.The 3D structure of C-terminal of the protein was consisted of a monomeric β-barrel containing 12 β-strands and a central pore.The study laid the foundation for further development of molecular vaccines based on espP protein against Hps infection.     

副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白研究进展

副猪嗜血杆菌是猪革拉泽氏病的病原体,该病是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病之一,呈世界性分布。副猪嗜血杆菌相关致病性毒力因子的研究目前很少,关于转铁结合蛋白更是鲜为人知。在此对副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白的结构、形成机制、影响因素及其免疫原性进行综述,对阐明致病菌的慢性感染机理有一定的生物学意义。     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白表型分析

为揭示副猪嗜血杆菌外膜蛋白与毒力的关系,采用SDS-PAGE测定了82个副猪嗜血杆菌分离株细胞外膜蛋白(OMP),比较了不同临床背景分离株的OMP表型差异,根据外膜蛋白的电泳迁移率Rf值和蛋白含量对OMP与毒力菌株的相关性和PAGE分型进行了聚类分析。图谱表型分析结果表明,82个分离株分成以相对分子质量36～40ku为特征的Ⅰ型和以42～45ku为特征的Ⅱ型2种类型,约34%患病猪分离株属于PAGEⅠ型,只有8.7%健康猪分离株属于PAGEⅠ型。Rf值聚类分析结果显示外膜蛋白分为3种类型,PAGEⅠ、PAGEⅡ和PAGEⅢ型。图谱蛋白含量聚类分析显示5个PAGE型。结果提示,36～40ku蛋白与菌株的毒力相关。     

aroA gene PCR-RFLP diversity patterns in Haemophilus parasuis and Actinobacillus species

The Haemophilus parasuis aroA gene encodes 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase and participates in the aromatic amino acids and the folic acid universal metabolic pathway of bacteria. The application of aroA-based PCR-RFLP methodology yields a significant degree of diversity in H. parasuis and Actinobacillus species. PCR amplification of the aroA gene rendered a 1,067-bp fragment in all 15 H. parasuis serovars, and also in Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1-12, Actinobacillus lignieresii, Actinobacillus equuli, Actinobacillus porcinus, Actinobacillus rossii, Actinobacillus suis, Actinobacillus ureae, Actinobacillus minor and Actinobacillus indolicus. Sau3AI and RsaI digestions of the aroA PCR products rendered seven different restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns: group I (H. parasuis serovars 1, 2, 4-6, and 8-15, A. porcinus and A. ureae), group II (H. parasuis serovars 3 and 7, and A. pleuropneumoniae serotypes 1, 4, 5, 9, 11 and 12), group III (A. lignieresii), group IV (A. pleuropneumoniae serotype 7), group V (A. pleuropneumoniae serotypes 2, 3, 6 and 8, A. equuli, A. rossii, A. minor and A. indolicus), group VI (A. suis) and group VII (A. pleuropneumoniae serotype 10). This is the first report describing the presence of aroA gene in H. parasuis, A. lignieresii, A. porcinus, A. rossii, A. suis, A. ureae, A. minor and A. indolicus and the data presented here demonstrates a significant degree of aroA genetic diversity in H. parasuis and species of the genus Actinobacillus.     

广东部分猪场副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

为了解副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis,HPS)在广东省部分地区的流行情况,通过针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2(OMPP2)的间接ELISA法对广东省部分猪场的376份猪血清样本进行了抽样检测。结果显示,副猪嗜血杆菌的阳性率为23.8%,其中母猪阳性率高达31%;保育仔猪为29%,育肥猪为33.6%,育肥猪阳性率显著高于母猪和保育仔猪;冬季(11～1月)副猪嗜血杆菌抗体阳性检出率最高为31.4%、秋季(8～10月份)的阳性检出率最高为18.7%,冬季比秋季高出12.7%,差异极显著(P<0.01)。     

副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的克隆及序列分析

本研究旨在从分子水平对副猪嗜血杆菌湖南分离株进行鉴定,并用16S rRNA序列分析不同血型副猪嗜血杆菌之间的遗传关系。利用PCR扩增副猪嗜血杆菌的16S rRNA,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,再用Phylip 3.67程序MP法和Mage 4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAStar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示,所获得的16S rRNA序列长度均为783 bp,湖南分离株与已知5型副猪嗜血杆菌位于同一分枝。结果表明,湖南分离株属于5型副猪嗜血杆菌,为副猪嗜血杆菌的分子流行病学和其相关疾病的诊断奠定基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断与防制

目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分离鉴定、药敏试验、PCR和RT-PCR等实验室检测最终确诊为高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病的混合感染,在此基础上提出和实施了该病的防控方案。     

副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白的表达及其免疫原性分析

为原核表达副猪嗜血杆菌血清5型TbpA蛋白,本研究利用特异性引物扩增tbpA基因,并将其克隆到pMD 18-T载体中进行序列测定.再将其亚克隆于pET-28a中构建重组表达质粒pET-tbpA.将其转化受体菌E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白约106 ku,并以包涵体形式存在.表达的重组蛋白经纯化后,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明制备的血清抗体效价在1∶3 200以上,表明TbpA具有良好的免疫原性.