卵泡颗粒细胞维持山羊卵母细胞减数分裂抑制状态的研究

通过在卵母细胞体外成熟过程中添加不同浓度的卵丘细胞或其外围壁层颗粒细胞进行共培养,对山羊卵母细胞成熟过程中卵泡颗粒细胞对卵母细胞减数分裂抑制作用及作用机制进行了探索.结果表明,成熟液中添加105和106个/mL卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞的卵母细胞体外成熟率与对照组相比差异不显著(P>0.05),但添加5×106个/mL(41.2%)和107个/mL(24.6%)卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞组的成熟率显著降低(P<0.05);添加5×106和107个/mL卵丘细胞组和颗粒细胞组卵丘不能正常扩展,卵母细胞核状态观察,停留在GV期;Rp-cAMP(Rp-cyclic adenosine monophosphothioate)膜渗透性cAMP对抗剂,诱导了107个/mL的卵丘细胞组(71.6%)和外围壁层颗粒细胞组(71.3%)的卵母细胞体外成熟率与对照组(72.O%)差异不显著(P>0.05).在山羊卵母细胞体外成熟过程中,添加一定浓度的卵丘细胞及其外层的颗粒细胞可以提高卵母细胞胞质内的cAMP的水平,抑制卵母细胞减数分裂的启动,使卵母细胞停留在GV期.     

母鸡抑制素的产生

母鸡抑制素主要是由排卵前卵泡颗粒细胞产生的,肾上腺是又一来源,ＬＨ在刺激体外颗料细胞产生抑制素方面的比ＦＳＨ有效。去除排卵前卵泡后,血浆免疫活性抑制素显著降低,而血浆ＦＳＨ急剧升高。卵泡颗粒层中,抑制素α亚基比β（Ａ）亚基表达充分。α亚基是由近似１．７ｋｂ的ｍＲＮＡ编码,主要的８．４ｋｂβ（Ａ）－ｍＲＮＡ带在排卵前卵泡的颗粒层中表达。     

miRNA调控动物卵泡发育研究进展

雌性动物的繁殖潜力基于卵泡的发育，该过程受到复杂的基因网络调控。microRNA （miRNA）是一种短的、非编码RNA，在转录后调控基因表达。在过去的十年中，对动物卵泡中非编码RNA的深入研究揭示了miRNA在卵泡发育过程中的关键作用。作者简述了雌性动物卵泡发育过程，总结了miRNA调控卵泡发育的作用机制，包括原始卵泡的激活、生长卵泡的发育选择、卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞的生长调控等，分析了卵泡液外囊泡携带miRNA的功能。但当前卵泡miRNA的研究多集中在细胞敲低模型研究，敲除模型研究较少，因此增加细胞及活体敲除模型的研究有助于更好地了解miRNA在卵泡发育中的功能。本综述可为深入解析雌性动物繁殖性状调控的分子机制提供参考。     

FSH通过AKT/FOXO1通路调控绵羊卵泡颗粒细胞增殖的研究

旨在研究FSH-AKT-FOXO1途径调控绵羊卵泡颗粒细胞增殖机制。利用不同浓度FSH处理绵羊颗粒细胞(GCs),采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期变化,Western-Blot检测p-AKT和p-FOXO1蛋白质表达,qPCR分析PCNA、CCnd-2和Bcl-2基因表达量变化。结果表明:10ng/mL的FSH能显著提高GCs活性,抑制细胞凋亡(P0.05);AKT/FOXO信号通路的抑制剂AT7867预处理GCs后明显降低其活性(P0.05);在FSH的作用下,GCs中AKT蛋白的磷酸化水平显著升高,而FOXO1的磷酸化水平显著降低(P0.05),同时显著上调了PCNA、CCnd-2和Bcl-2的表达水平(P0.05)。本研究表明FSH通过AKT/FOXO1信号途径促进了绵羊GCs的生长、增殖。     

体外培养牛腔前卵泡颗粒细胞的超微结构研究

透射电镜下，简易机械法分离得到的腔前卵泡有1～3层颗粒细胞，相邻颗粒细胞间存在明显而广泛的间隙连接，卵泡基膜完整，外无卵泡膜。培养过程中超微结构的变化与体内发育腔前卵泡类似。培养6d时观察到颗粒细胞增殖现象，培养15d时，个别卵泡的内膜细胞开始形成。超微结构研究结果表明，本培养体系适于小腔前卵泡的体外培养。     

不同培养方法对奶牛体外受精卵发育的影响

用颗粒细胞单层、输卵管上皮细胞单层及中间受体兔三种方法培养奶牛体外受精后卵裂卵发育至可用于移植的桑椹胚及囊胚的百分率分别为２２．７３％、２２．３９％、２９．６０％。     

湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达谱分析

卵泡颗粒细胞对卵母细胞的营养支持、保护以及卵泡生长发育、成熟、闭锁、维持黄体功能等起着至关重要的作用。为研究湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达及其信号网络,提取湖羊黄体期卵泡颗粒细胞RNA,采用Illumina测序技术进行测序,并结合GO分析和KEGG通路分析对基因功能分类、参与的生物过程及信号网络进行了研究。试验共获得了17 627个可匹配基因的表达情况,发现了多个与繁殖、消化吸收及代谢相关基因的高表达,如CYP19A1、IL1A、IL1B、UCP2、STAR等基因。经过GO分析和KEGG通路分析,15 278个基因分别注释到三大类60个功能组,在biological process这一大类中发现了与繁殖、发育、代谢、调节和免疫等相关的功能组,有6 361个基因注释到了312个KEGG通路,发现了与生殖生物学、消化吸收、代谢等过程相关的信号通路,并对相关功能组和通路进行了分析。本试验揭示了湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达特点及其参与的信号通路,为深入研究绵羊卵泡发育的调控机制及湖羊高繁性状关键基因的挖掘提供了参考。     

VEGF对绵羊卵泡颗粒细胞FSHR、E2R表达的影响

血管内皮生长因子(VEGF)可以促进颗粒细胞的增殖,但是否影响同样分布于颗粒细胞上的FSHR、E2R表达效果尚属未知.因此,通过Western blotting和荧光定量PCR分别对添加0、5、10、15、20、25 μg/L VEGF卵泡颗粒细胞中FSHR、E2R表达量及FSHR mRNA、E2R mRNA表达量进行检测.Western blotting蛋白检测结果表明,空白对照组和各个不同质量浓度VEGF处理组的颗粒细胞上均有FSHR和E2R蛋白表达,FSHR相对分子质量为75 000,E2R相对分子质量为56 000；荧光定量PCR检测结果表明,添加VEGF的各个处理组中FSHR mR-NA、E2R mRNA表达量均显著高于对照组(P＜0.05),各处理组间的FSHR mRNA之间差异不显著(P＞0.05),而VEGF添加量20、25 μg/L组的E2R mRNA表达量显著高于其他3个处理组(P＜0.05),并且这2个组间则差异不显著(P＞0.05),其余3个处理组间亦差异不显著(P＞0.05).