鼠源细胞TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其他物种来源细胞基因组及生物制品原辅材料未出现特异性扩增曲线;敏感性高,基因拷贝数检出限度为45.3拷贝。本试验建立的荧光定量PCR检测方法能够有效地对鼠源细胞进行快速检测,为细胞质量控制提供了有效方法。     

不同胎次的仔猪猪瘟母源抗体衰减规律探索

为了探索不同胎次的剑河白香猪仔猪猪瘟母源抗体衰减规律以确定不同胎次仔猪首次免疫猪瘟疫苗的时间,对种母猪及仔猪进行猪瘟抗体检测。在剑河白香猪原种场随机选取孕育第1胎～第6胎的种母猪共58头,在种母猪产后第1天采集全血,分离血清;从每头种母猪所产仔猪中随机选取4头,分别于1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、5周龄、6周龄采集全血,分离血清。采用液相阻断酶联免疫吸附测定(liquid-phase blocking enzyme linked immunosorbent assay, LPB-ELISA)法对种母猪及仔猪的血清进行猪瘟抗体检测。结果显示：孕育第1胎～第6胎的种母猪产后第1天的猪瘟抗体阻断率分别是87.31%、86.32%、86.36%、78.37%、61.58%、34.05%,第1胎～第6胎的仔猪在1周龄时猪瘟抗体阻断率分别是86.12%、85.29%、85.30%、76.23%、60.38%、31.26%,表明第1胎～第6胎的仔猪1周龄时猪瘟抗体阻断率整体与种母猪抗体阻断率相近且高度相关;第1胎～第3胎、第4胎、第5胎、第6胎仔猪猪瘟抗体阻断率分别在6周龄(39.04%、37.2...     

牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立

牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻,对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合,建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明,CPA体系Mg²⁺最佳物质浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度,60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原,层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线,未出现交叉反应。结果显示,CPA BCoV-N具有较高的特异性,CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器,简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增,封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染,对结果的判断更加直观客观,是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。     

奶制品中三聚氰胺的检测研究进展

三聚氰胺及其类似物非法添加于奶制品已严重威胁人们的身体健康,特别是婴幼儿。长期摄入低剂量的三聚氰胺有导致损伤肾小管、增加结石形成和早期肾损伤的风险。近年来,科学家们提出了许多三聚氰胺检测方法应用于奶制品的检测,为确保奶制品的安全问题提供技术支持,特别是婴幼儿配方奶粉。本文对奶制品中三聚氰胺的检测方法进行了总结和评论,以了解其适用性和未来的研究方向。     

禽流感病毒检测方法研究进展

禽流感病毒（AIV）不仅能引起禽类发病和死亡,造成严重的经济损失,部分亚型（H5N1、H7N9等）也能感染人类,严重威胁人类健康。早期检测AIV对于禽流感的高效防控非常重要,有必要开发高特异性、高敏感性、操作简便、快速的检测方法用于AIV早期检测。文章对禽流感病毒的免疫学检测方法、分子生物学检测方法以及生物传感器检测方法进行综述,以期为禽流感病毒的检测提供参考。     

广西地区犬细小病毒检测及VP2基因序列分析

为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件采用邻接法构建遗传进化树。结果表明：共获得55份CPV阳性血清样本,阳性率约为13.0%。PCR扩增得到大小约为1 755 bp的VP2基因。55株分离毒株之间的相似性为98.6%～100%;分离毒株与国内外参考毒株的相似性为97.4%～100%,与疫苗株Pfizer/vaccine/06的相似性为98.3%～98.9%。扩增序列的推导氨基酸主要在第5,297,370,426,440位发生变异。在55株分离毒株中,有32株为New CPV-2a亚型毒株,20株为CPV-2c亚型毒株,3株为New CPV-2b亚型毒株。55株分离毒株形成3个主要的流行分支,与国内参考毒株的亲缘关系较近,而与国外参考毒株、猫细小病毒的亲缘关系较远。说明New CPV-2a、CPV-2c、New CPV-2b亚型毒株在广西地区流行广泛,正逐步取代CPV-2a...     

兔源强毒力金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法,本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针,通过反应条件的优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法耗时短,仅需约50 min就能完成检测,较已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法均省时;该方法特异性强,对兔源低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、魏氏梭菌、大肠杆菌和阴性对照(灭菌ddH₂O)均无交叉反应;该方法敏感性高,最低检测限为10拷贝/μL,分别是已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的1 000倍和10倍。此外,该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法检测126份已知结果的临床样品,检测结果与已知结果、已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的检测结果完全一致。该方法的建立不仅丰富了兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测方法,也为该菌的快速检测提供了更有力的技术支持。     

猴痘病原学、流行病学特征及其检测防控技术

2022年5月以来,全球暴发了严重的猴痘疫情,截至2022年12月14日已有超过100个国家和地区报告出现82 553例人间猴痘病例,我国也发现了6例境外输入病例。此次全球流行的猴痘病毒与2018年和2019年英国流行株一致,属于分支Ⅱ（西非分支）的Ⅱb亚分支。猴痘从动物感染人主要通过直接接触传播,人间传播途径也较多,其中性传播为2022年疫情的主要传播途径。猴痘的检测方法有多种,其中实时荧光定量PCR核酸检测方法主要用于早期检测,酶联免疫吸附试验（ELISA）血清学方法常用于流行病学调查,但最终确诊还需要进行病毒分离培养和基因组分析。世界卫生组织（WHO）建议,从中断人际传播、保护处境危险易感人群、减少人和动物间传播3个方面开展猴痘防控。目前无有效的猴痘疫苗及防治药物,但天花疫苗可以对其提供85%的保护。我国应时刻保持警惕,建立完善的猴痘防控策略,防止疫情传入国内,同时应继续加强猴痘病毒检测技术研究和应用评估,做好技术储备。本文从猴痘病原学、流行病学、检测技术、防控措施等方面加以综述,以期帮助相关人员全面认识猴痘,提高防范意识,同时为相关机构做好防控及技术储备工作提供参考。     

山东省沂南县动物强制免疫“先打后补”现状分析

2021年,沂南县推进动物疫病强制免疫“先打后补”工作,依托“鲁牧云”信息平台,通过强化组织领导,加强政策宣贯,强化人员培训,放开强免疫苗经营渠道,提供抗体检测无偿服务等措施,提升了养殖场户“先打后补”的积极性、自主性、灵活性,强化了养殖场户动物防疫主体责任,满足了养殖场户疫苗多样化需求。但由于 “先打后补”补助金额少、社会化服务不规范、基层动物防疫体系弱化、缺少配套工作经费等原因,部分养殖场户实施“先打后补”的积极性不高。建议通过规范社会化服务组织,强化培训水平,提高补助标准,强化三级（县乡村）基础设施建设,升级“鲁牧云”等措施,确保“先打后补”政策惠及更多养殖场户。     

条件性敲除D1133L基因的重组非洲猪瘟病毒的构建及增殖特性

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞(BMDMs),以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在的条件下,经绿色荧光和PCR鉴定,获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制差异,利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异,分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示：本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株;在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中,vD1133Li复制能力恢复。综上所述,D1133L基因对于ASFV复制至关重...