IL-2真核质粒对乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗猪体免疫反应的分子佐剂效应

为研究猪IL-2真核表达质粒对乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗(Lactobacillus acidophilusSFMD-1)猪体免疫的分子佐剂效应,通过RT-PCR方法从猪的肠系膜淋巴结克隆猪IL-2基因,基于pRc/CMV2载体,构建编码猪IL-2的真核表达质粒pCSIL2,以RT-PCR方法分析了该质粒转染PK15细胞以后的mRNA表达。结果显示预期的429 bp IL-2带仅出现在pCSIL2转染细胞。试验猪单独免疫L.acidophilusSFMD-1或者联合免疫pCSIL2质粒,后者能够增强FMDV-VP1特异的T细胞和B细胞反应,免疫后5周,单独免疫组和联合免疫组的抗体水平分别为1.50和1.66;免疫后6周,抗体水平分别上升到1.83和2.28;在T细胞增殖试验中,L.acidophilusSFMD-1单独免疫组和pCSIL2联合免疫组的刺激指数(SI)分别为2.00和2.70。结果表明,联合应用IL-2真核表达质粒是改进乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗免疫原性和效能的有效方法。     

蜂产品市场潜力大

我国是蜂产品大国,也是销售大国。2000—2004年蜂花粉、蜂蜜、蜂胶、蜂王浆、蜂房、蜂蛹等,在国内外市场的销售量、销售额与创汇额均呈逐年上升之势,平均每年递增11%,2004年比2000年增长35.5%。蜂产品食药兼用,还走进了医药保健、化妆、美容等领域,已成为国内外市     

蜂胶及其医疗保健功效

蜂胶是蜜蜂从植物叶芽或树皮上采集的粘性分泌物———树脂 ,再混入蜜蜂的上颚腺分泌物和蜡腺分泌的蜂蜡等经反复加工而成的一种胶状物质 ,是蜜蜂自身加工巢脾、填补蜂室裂缝和孔洞用以防止污染和消除病菌感染、保护蜂巢的。现代科学研究证实 ,蜂胶具有显著抑制和杀灭细菌、病毒的作用 ,且对正常细胞无毒副作用 ,能有效提高人体免疫力 ,预防及治疗多种顽疾 ,有很高的药用价值 ,是中、老年人的安全、有效、多功能保健食用佳品。我国在 1 9世纪末引进西方蜂种后 ,开始发现蜂胶保健的重要作用 ,1 95 6年我国蜂业专家房柱教授开始深入研究蜂胶保…     

蜂胶的研究利用概况

蜂胶是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂,再混以蜜蜂的舌腺、蜡腺等腺体分泌物,经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质。蜂胶属不透明固体,呈棕褐色、棕红色或灰褐色,有时带有青绿色,少数近似黑色。天然新鲜蜂胶有树脂香味,具有粘性和可塑性。36℃时开始变软,15℃时变硬变脆、可粉碎,60~70℃时融化成粘稠液体。蜂胶属树脂类物质,极易溶于乙醚、氯仿、丙酮、苯及2%NaOH溶液,溶于95%乙醇,溶液呈透明状,随蜂胶浓度的增大,有颗粒状沉淀析出。蜂胶的乙醇提取物可反映蜂胶质量的优劣以及蜂胶的等级,优质蜂胶的乙醇提取物含量一般在75%以上,65…     

蜂胶免疫佐剂的研究

用蜂胶作为免疫佐剂制成鸡新城疫（ＮＤ）蜂胶灭活苗，与含有相同抗原的油乳剂苗、氢氧化铝胶苗和无佐剂灭活苗，对鸡进行ＮＤ免疫效果比较。结果表明，蜂胶苗的抗体上升速度比油乳剂苗快；与氢氧化铝苗和无估剂灭活苗相比，蜂胶苗的抗体水平较高、维持时间较长。经安全试验、证明蜂胶无毒、无刺激性。是一种值得研制和开发的新型免疫佐剂。     

佐剂对嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果的作用

制备嗜水气单胞菌J—1株福尔马林灭活疫苗，用浸浴法免疫银鲫。设疫苗加IMS1312佐剂免疫组、不加佐剂疫苗免疫组及未免疫对照组，每组20尾。18～20℃水温饲养35d，检测银鲫血清嗜水气单胞菌凝集抗体。佐剂组抗体效价达1：64，相对保护率为67％。不加佐剂免疫组抗体效价为1：32，相对保护率达56％。对照组抗体效价为1：4，相对保护率为10％。试验结果表明浸浴免疫对银鲫具有较好的保护力，佐剂IMS1312可增强鱼体的免疫应答。     

蜂胶———一种优质的动物疫苗佐剂

疫苗佐剂是一种免疫增强剂,自身并不能引起机体产生免疫应答,但能提高抗原的免疫原性和免疫反应的可持续性,诱发机体针对特定抗原产生更加长期、高效的免疫应答反应,增强疫苗对机体的免疫保护作用。随着人们对动物食品卫生安全的关注,绿色、环保、健康的理念已逐渐深入人心,普遍将“使用要安全、免疫要高效、抗体产生快、免疫保护强”这几点作为动物疫苗佐剂研究的方向。蜂胶是由蜜蜂的工蜂采集杨树、柳树、松树等植物的幼芽等同自身的消化腺和蜡腺等分泌物进行混合之后形成的一种具有芳香气味的胶状固体物,含有黄酮类、萜烯类、有机酸、芳香醛、醇类、酯类及多种氨基酸、酶、维生素、矿物质等,其主要的成分为黄酮类化合物,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫功能和促进组织再生等广泛的生物学作用,是良好的动物疫苗佐剂。早在20世纪90年代,我国沈志强等研究人员以蜂胶为免疫佐剂,开创了疫苗佐剂研究的新领域,使我国蜂胶佐剂疫苗的研究与应用处于世界领先地位。20年来,蜂胶在动物疫苗佐剂中得到迅速发展和广泛应用,论文着重介绍了蜂胶在猪疫苗佐剂、禽疫苗佐剂、兔疫苗佐剂、犬疫苗佐剂中的应用研究进展及应用概况,旨在为蜂胶在动物疫苗佐剂中的开发利用与推广应用积累资料。     

兔病毒性出血症兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联蜂胶灭活疫苗最小免疫剂量的研究

利用实验室试制的200903001批兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联蜂胶灭活疫苗,对健康易感兔进行最小免疫剂量测定。采用将疫苗以0.25m L/只、0.5m L/只、1.0m L/只3种不同剂量组免疫健康易感兔,同时设置非免疫对照组,免疫14日进行攻毒保护试验。试验结果表明:0.25m L/只剂量组对兔病毒性出血症和兔多杀性巴氏杆菌分别为8/10、9/10保护;0.5m L/只、1.0m L/只剂量组对兔病毒性出血症免疫保护均为10/10,对兔多杀性巴氏杆菌病分别为9/10、10/10免疫保护。试验结果证实该疫苗的最小免疫剂量为0.5m L/只。     

犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备

【目的】克隆犬转录因子ELF4基因（cELF4）,体外表达重组cELF4蛋白（rcELF4）并制备抗该蛋白的卵黄抗体（IgY）,为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因,将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码的氨基酸序列特征。将cELF4基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET28a-cELF4,分别转化大肠杆菌BL21（DE3）和Rosetta（DE3）感受态细胞,诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。将rcELF4蛋白分别与3种免疫佐剂（ISA 15AVG、 ISA 71VG、 ISA 201VG）乳化制备免疫原,通过免疫蛋鸡检测抗体滴度和IgY含量。构建真核重组表达载体pEGFP-cELF4,转染细胞后,利用免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）分析cELF4特异性IgY的免疫活性。【结果】cELF4基因（GenBank登录号MZ198105）的开放阅读框（ORF）为1992 bp,编码663个氨基酸残基。cELF4基因与狐ELF4基因的核苷酸相似性最高 （99.3%）,而与小鼠的相似性最低 （81.5%）。结合系统进化结果发现, cELF4基因与狐、大熊猫、欧洲雪貂、北美水獭等动物ELF4基因的亲缘关系较近,而与人和猴等灵长类动物及啮齿类鼠ELF4基因的亲缘关系相对较远。rcELF4蛋白分子量大小约100 kD,可刺激鸡产生相应抗体, ISA 15AVG、 ISA 71VG和ISA201VG组血清抗体滴度均在首免后38 d达峰值,其中ISA 201VG组效价最高 （>128000倍）,且3组rcELF4特异性IgY抗体均在首免后14 d转阳,首免后35 d达峰值,其中ISA 201VG组血清抗体滴度最高,为256000倍。3组鸡蛋卵黄中所提取的IgY含量最高值为4.09 mg/10 mL卵黄液,与rcELF4蛋白呈特异性反应、且与人ELF4蛋白存在交叉反应。rcELF4蛋白定位在细胞核。【结论】 rcELF4蛋白在大肠杆菌中成功表达,且存在翻译后修饰现象,不同类型的免疫佐剂对rcELF4蛋白的免疫原性产生不同的影响,所制备rcELF4抗体免疫活性良好,且与人ELF4蛋白存在交叉反应。